Оценка анализа крови для измерения иммунной функции у ВИЧ-позитивных людей по сравнению с ВИЧ-отрицательными людьми (QFM)

Рутинные вирусологические и иммунологические тесты для мониторинга ВИЧ-1 у инфицированных лиц, получающих высокоактивную антиретровирусную терапию (ВААРТ), включают подсчет Т-лимфоцитов CD4, вирусную нагрузку плазмы ВИЧ-1 и определение генотипической резистентности ВИЧ-1 на исходном уровне для пациентов, ранее не получавших лечения, и после вирусологической неудачи во время ВААРТ.

Подсчет Т-клеток CD4 представляет собой измерение числа Т-хелперных лимфоцитов и в сочетании с соотношением CD4/кластер дифференцировки 8 (CD8) является суррогатным маркером для оценки состояния иммунной системы и используется для мониторинга прогрессирования. и определить стадии ВИЧ-инфекции у инфицированных субъектов, находящихся на лечении или без него. Увеличение или высокое количество CD4 и соотношение CD4/CD8 от 1 до 4 предполагает контроль репликации вируса в результате ВААРТ (или врожденной иммунной активности у нелеченых субъектов), в то время как уменьшение или низкое количество CD4 и соотношение CD4/CD8 <1 предполагает неэффективность ВААРТ и/или ухудшение состояния иммунной системы.

Вирусная нагрузка плазмы ВИЧ-1 измеряет количество копий РНК ВИЧ-1, полученных из вирусных частиц в плазме. Определяемая вирусная нагрузка в плазме указывает на репликацию ВИЧ-1, тогда как неопределяемая вирусная нагрузка в плазме свидетельствует о контроле репликации ВИЧ-1. Тем не менее, с нижним пределом обнаружения 50 копий РНК ВИЧ-1/мл для коммерческих анализов, более низкие уровни вируса в плазме могут оставаться незамеченными этими анализами, но выявляемыми примерно у 70% пациентов, получающих ВААРТ, с использованием исследовательских анализов с порогом отсечения <50. копий РНК ВИЧ-1/мл. Такие основанные на исследованиях анализы вирусной нагрузки в плазме никогда не используются для рутинного мониторинга при клиническом лечении инфицированных субъектов.

Хотя количество CD4 и вирусная нагрузка ВИЧ-1 в плазме неразрывно связаны в контексте заболевания ВИЧ-1, и в настоящее время одобренные тесты для определения ответа ВИЧ-1 на ВААРТ имеют существенные недостатки для эффективного лечения ВИЧ, как определено ниже:

• Количество CD4 и иммунная дисфункция. Увеличение или высокое количество CD4 или нормальное соотношение CD4/CD8 в результате ВААРТ не обязательно свидетельствует о бескомпромиссной иммунной системе, но может свидетельствовать о состоянии иммунной дисфункции в результате активации иммунитета в результате продолжающейся репликации ВИЧ.
• Клеточные резервуары ВИЧ: Низкий уровень связанной с клетками репликации ВИЧ, не обнаруживаемый в плазме при стандартном анализе вирусной нагрузки в плазме. Ассоциированная с клеткой репликация ВИЧ определяется с помощью полимеразной цепной реакции ВИЧ (ПЦР) из выделенной и очищенной тотальной клеточно-ассоциированной РНК или путем гибридизации in situ с клеточно-ассоциированной РНК ВИЧ-1 в интактных клетках и выявляется примерно у 62-80% пациентов, получающих ВААРТ. с вирусной нагрузкой плазмы <50 копий РНК ВИЧ-1/мл. Целенаправленное лечение, клеточно-ассоциированная эффективность препаратов против ВИЧ, клеточно-ассоциированная резистентность к ВИЧ и идентификация клеточного источника ВИЧ могут быть определены анализами резервуаров ВИЧ-клеток, а не вирусной нагрузкой в ​​плазме.
• Различия в функциональном иммунном ответе, основанные на транскрипционной активности ВИЧ-1, связанной с клетками, а не на неопределяемой вирусной нагрузке в плазме. Иммунный ответ у пациентов, получающих ВААРТ, с хроническим низким уровнем репликации ВИЧ в циркулирующих Т-лимфоцитах и ​​неопределяемой вирусной нагрузкой в ​​плазме включает значительную пролиферацию in vitro на антиген p24 ВИЧ-1, отсутствие значимого ответа на повторный антиген столбнячного анатоксина и более высокий ответ на антигены патогена по сравнению с пациентам, получающим ВААРТ, с неопределяемой репликацией ВИЧ в Т-лимфоцитах памяти и неопределяемой вирусной нагрузкой в ​​плазме.
• Адгезия вирионов ВИЧ-1, полученных из плазмы, к эритроцитам. Эритроциты секвестрируют вирионы ВИЧ-1, связанные с плазмой, в цельной крови некоторых пациентов, получающих ВААРТ. В то время как у этих пациентов вирусная нагрузка в плазме не определяется, соответствующая цельная кровь имеет значения вирусной нагрузки в диапазоне от 234 до 82 878 копий РНК ВИЧ-1/мл цельной крови. Эти пациенты с обнаруживаемой вирусной нагрузкой в ​​цельной крови, но с неопределяемой вирусной нагрузкой в ​​плазме, демонстрируют клинически выраженную ВИЧ-инфекцию.
• Количество CD4 и необъяснимый ответ на ВААРТ. Снижение количества CD4 при неопределяемой вирусной нагрузке в плазме можно объяснить секвестрацией вируса плазмы ВИЧ в эритроцитах или низкими уровнями репликации ВИЧ, ассоциированной с клетками.
• Дефектные/неинфекционные вирионы: анализ вирусной нагрузки в плазме ВИЧ-1 нельзя использовать для дифференциации инфекционных и неинфекционных или дефектных вирусных частиц, поскольку <0,2% циркулирующих вирионов ВИЧ-1 (или от 1:477 до 1:117 803) заразный. Следовательно, те анализы генотипической и фенотипической лекарственной устойчивости и анализы тропизма ВИЧ-1, в которых используется РНК ВИЧ-1, полученная из плазменной РНК вируса ВИЧ-1, будут давать результаты в основном неинфекционного или дефектного вируса. Различия в последовательностях нуклеиновых кислот между инфекционными и неинфекционными или дефектными вирусами не были должным образом исследованы в отношении диагностических и мониторинговых тестов. Последствия использования вирусных последовательностей из преимущественно неинфекционных или дефектных вирусных частиц в отличие от инфекционных вирусных частиц для тестов на лекарственную устойчивость и тропизм при клиническом лечении ВИЧ-инфицированных пациентов неизвестны.

Следовательно, появляется все больше данных, свидетельствующих о том, что количество CD4 и вирусная нагрузка в плазме не могут использоваться для полной интерпретации реакции ВИЧ на ВААРТ. Более того, все больше данных доказывает, что продолжающаяся репликация ВИЧ-1 в отсутствие определяемой вирусной нагрузки в плазме приводит к образованию ВИЧ и вирусного антигена, что приводит к активации иммунной системы, тем самым обеспечивая патогенез ВИЧ, о чем свидетельствуют повышенные уровни оборота и пролиферации Т-клеток, апоптоз неинфицированных Т-клеток, а также поликлональные В-клетки, естественные клетки-киллеры (NK) и активация моноцитов. Различные клеточные маркеры были связаны с патогенезом ВИЧ, включая маркеры иммунной активации антиген лейкоцитов человека (HLA) - рецептор клеточной поверхности (DR) (HLA-DR), кластер дифференцировки 38 (CD38), кластер дифференцировки 69 (CD69), кластер кластер дифференцировки 71 (CD71), кластер маркеров старения дифференцировки 57 (CD57), маркер пролиферации Ki67 и кластер маркеров дифференцировки 95 (CD95) апоптоза (FasR). В совокупности эти маркеры патогенеза ВИЧ включают воспалительные реакции, повторное заселение резервуаров, эволюцию ВИЧ-1 и резистентность к лекарствам, а также неоппортунистические заболевания с постепенным ухудшением состояния иммунной системы.

Иммунные функциональные тесты оценивают функциональность компонента иммунной системы. Как правило, они основаны на анализе in vitro и предназначены для измерения исхода после воздействия на лимфоциты специфическими антигенами или митогенами. Результатом может быть измерение маркера иммунной стимуляции, такого как секреция гамма-интерферона, включение меченого тритием тимидина в клеточную геномную ДНК в результате лимфопролиферативного клеточного ответа на отзыв антигена и/или митогена или, в случае ин- Туберкулиновый кожный тест, основанный на естественных условиях, размер уплотнения кожи в месте введения туберкулинового очищенного белкового производного.

Cellestis Limited — компания Qiagen недавно разработала тест QuantiFERON® Monitor (QFM или CST007) на основе запатентованной технологии QuantiFERON® для измерения клеточно-опосредованной иммунной функции. Это диагностический тест in vitro, в котором используется комбинация стимуляторов для специфической стимуляции различных иммунных клеток в цельной крови и измеряется гамма-интерферон, высвобождаемый в плазме, с помощью ELISA (иммуноферментного анализа). Таким образом, цели этого исследования будут касаться полезности QFM в условиях иммунодефицита ВИЧ, и поскольку связанные с клетками маркеры патогенеза ВИЧ влияют на иммунную функцию, анализ крови на вирусный резервуар ВИЧ будет включен, чтобы лучше понять уровень иммунной функции внутри и между когортами. .

Как много времени это займет? Одно посещение продолжительностью около 1 часа с доктором Гатполинтаном и его координатором клинических исследований для ответов на вопросы, затем около 10 минут для забора крови (девять кварталов от офиса доктора Гатполинтана).

Показатели результатов исследования (корреляция между QFM и количеством CD4 и соотношением CD4/CD8) будут оцениваться, включая представление данных, в течение среднего периода в 1 год после включения субъекта исследования.