Capacità di colonizzazione e persistenza di un probiotico multi-ceppo nell'allergia alimentare pediatrica al latte o all'uovo.

Questo studio valuta la capacità di colonizzazione di tre probiotici (Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve e Bifidobacterium infantis) in bambini allergici al latte e/o alle uova.

Si prevede l'arruolamento di circa 20 pazienti allergici all'uovo e/o al latte di età compresa tra 10 e 14 mesi confermati con test di tolleranza orale in doppio cieco verso placebo (Gruppo 1).

Inoltre, verranno reclutati circa 10 pazienti sensibili al latte o all'uovo ma non confermati con test di tolleranza orale in doppio cieco rispetto al placebo (Gruppo 2) e circa 10 individui sani (Gruppo 3).

Per tutti i 40 pazienti:

1. Verrà valutata la presenza basale di Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V e Bifidobacterium infantis M-63;

   Solo per i bambini del Gruppo 1 saranno valutati anche:

2. La presenza degli stessi ceppi durante 30 giorni di somministrazione di probiotici multiceppo contenenti 3,5 x 109 UFC di Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V e Bifidobacterium infantis M-63 e dopo 60 giorni dalla sospensione della somministrazione.

Quantificazione di B. breve, B. longum subsp. longum e B. longum subsp. infantis in campioni fecali è stato eseguito mediante qRT-PCR utilizzando la piattaforma Light Cycler 480 (Roche Diagnostics, Mannheim, Germania). I saggi sono stati eseguiti con una miscela di amplificazione PCR da 20 µl contenente: 10 µl LightCycler 480 Probe Master mix (Roche Diagnostics), 2 µl di primer e sonde (concentrazioni ottimizzate, rispettivamente 0,5 µM e 0,1 µM), 3 µl di H2O di grado molecolare e Modello di DNA da 5 µl. Ogni campione è stato testato in duplicato per garantire la riproducibilità dei dati. Il profilo di temperatura RT-PCR consisteva in una denaturazione iniziale a 95°C per 10 min, 45 cicli di amplificazione a 95°C per 10 sec, 60°C per 30 sec e 72°C per 1 sec seguiti da una fase di raffreddamento finale a 40°C per 30 sec. La quantificazione assoluta è stata eseguita utilizzando il "metodo del massimo della derivata seconda"

Analisi statistiche: il test dei ranghi con segno di Wilcoxon è stato utilizzato per confrontare le concentrazioni di specie probiotiche nel corso del tempo.