Osteopontina in pazienti con carcinoma mammario metastatico

Analisi dei polimorfismi nella regione regolatoria OPN:

L'amplificazione PCR della regione regolatoria del promotore dal DNA estratto utilizzando i seguenti primer -3 (forward primer 5" -CAA GCT ACT GCA TAC TCG AAA TCA CA-3" ; reverse primer 5" - ACA ACC AAG CCC TCC CAG AAT TTA-3" ). La PCR è stata eseguita utilizzando 50 ng di DNA come templato nelle seguenti condizioni: 95°C per 10 min, quindi 36 cicli di 94°C per 30 s, una temperatura di ricottura per 60 s e 72°C per 60 s, con una estensione finale a 72°C per 15 min. Dopo la purificazione della membrana di affinità utilizzando il kit QIAquick Gel Extraction (Qiagen, Carlsbad, CA, USA), i prodotti PCR sono stati sottoposti a sequenziamento del ciclo con il rispettivo primer forward e reverse utilizzando un sequenziatore di DNA ABI 310 automatizzato.

Misurazione del livello sierico di osteopontina:

I livelli di OPN sono stati misurati utilizzando il kit ELISA (Enzyme Linked Immnosorbent) fornito da IBL (Immuno-Biological Laboratories Co. Ltd., Giappone). Sono state condotte 30 donne normali di pari età con un livello sierico osteopontino mediano di 15, quindi questo livello è stato assegnato come valore limite.

Il livello sierico pretrattamento e il polimorfismo dell'oteopontina erano correlati con diversi criteri clinicopatologici dei pazienti, risposta al trattamento, PFS e OS.