Possibile azione del resveratrolo nel migliorare i risultati della fecondazione in vitro/ICSI nelle coppie con infertilità inspiegata (RECOS)

Secondo le ultime stime, la prevalenza globale dell’infertilità nell’arco della vita è del 17,5%, il che significa che circa una persona su sei ha sperimentato l’infertilità in un determinato momento della propria vita.

Nonostante un miglioramento delle indagini diagnostiche convenzionali, ancora oggi circa il 25% delle cause di infertilità di coppia restano inspiegate.

Infatti, diversi momenti cruciali del processo riproduttivo umano non possono essere studiati e, pertanto, specifiche alterazioni riproduttive rimangono non diagnosticate. Basti pensare al processo di follicologenesi ovarica, allo sviluppo dell'ovocita, all'impianto embrionale, tutti veri e propri "misteri biologici".

Tra questi diversi aspetti biologici, è noto che la qualità degli ovociti è il principale predittore della gravidanza clinica dopo IVF/ICSI. Infatti, il processo di maturazione dell'ovocita influenza lo sviluppo dell'embrione e, di conseguenza, la vitalità dell'embrione. Sebbene i meccanismi che determinano la buona qualità dell'ovocita non siano noti, si ritiene che i processi dipendenti dall'energia svolgano un ruolo importante nello sviluppo dell'ovocita. Questi processi sono mediati dai mitocondri, la cui concentrazione negli ovociti è la più alta tra le altre cellule del corpo umano. La maturazione nucleare e citoplasmatica dell'ovocita è strettamente connessa alla crescita delle cellule della granulosa (GC). Queste cellule circondano l'ovocita e stabiliscono una comunicazione funzionale bidirezionale con l'ovocita stesso attraverso giunzioni comunicanti e fattori paracrini. Durante la follicologenesi, i GC aumentano il consumo di glucosio e metabolizzano il glucosio in piruvato che passa all'ovocita. Tutto ciò determina un aumento dell'apporto energetico all'ovocita stesso, dimostrato dall'aumento della produzione di ATP, che consente a quest'ultima cellula di prepararsi alla fecondazione e alle prime fasi dello sviluppo embrionale che, come noto, è totalmente dipendente dall'ovocita.

Il resveratrolo sembra essere in grado di inserirsi in quest'area del funzionamento cellulare. È un polifenolo naturale, diffuso negli alimenti, nelle piante, nelle bevande e sembra indurre la proliferazione dei GC attraverso un effetto anti-apoptotico in maniera SIRT1-dipendente. Inoltre, nei GC, il resveratrolo riduce lo stress ossidativo, aumenta la biogenesi dei mitocondri e i livelli di ATP intracellulare, determinando un'elevata disponibilità energetica che favorisce la crescita dell'ovocita. Il resveratrolo sembra ridurre nelle cellule della granulosa di ratto l'espressione del fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF), implicato nell'angiogenesi e nella permeabilità vascolare, mostrando potenzialmente un effetto protettivo sul rischio di sindrome da iperstimolazione ovarica (OHSS), una condizione pericolosa per la vita associata all'insufficienza ovarica. stimolazione, di cui VEGF è il principale mediatore.

Un recente studio clinico randomizzato ha dimostrato che un pretrattamento di 3 mesi con resveratrolo, in donne affette da infertilità di coppia sottoposte ad ICSI, era associato ad un maggior numero di ovociti recuperati e maturi, ad un più alto tasso di fecondazione, ad un maggior numero di blastocisti per paziente e un numero più elevato di embrioni crioconservati in eccedenza per paziente, anche se non è stato osservato alcun effetto significativo sulle gravidanze cliniche e sui tassi di natalità vivi.

Sulla base di quest'ultima evidenza e considerati i potenziali effetti benefici del resveratrolo sulla follicologenesi e sullo sviluppo degli ovociti, i ricercatori hanno progettato uno studio randomizzato, controllato, in doppio cieco, in un unico centro, il cui obiettivo sarà il confronto dei risultati biologici e clinici del resveratrolo. integratore nelle donne sottoposte a cicli di fecondazione in vitro/ICSI per infertilità inspiegata.

A conoscenza dei ricercatori, non è stato pubblicato alcuno studio sul potenziale effetto del resveratrolo sugli esiti della fecondazione in vitro/ICSI considerando le coppie con questa diagnosi di infertilità, che potrebbero essere l’obiettivo naturale di questo trattamento integrativo poiché il processo di follicologenesi e maturazione degli ovociti non può essere regolarmente indagato. Un'alterazione di questi meccanismi biologici potrebbe essere la causa non riconosciuta di parte dell'infertilità inspiegata e il trattamento con resveratrolo potrebbe comportare un significativo miglioramento clinico per le pazienti arruolate nello studio.

Più in dettaglio, l'obiettivo principale di questo studio randomizzato, controllato con placebo, in doppio cieco, monocentrico sarà la valutazione del possibile effetto del resveratrolo nel determinare un migliore sviluppo follicolare in pazienti con infertilità inspiegata sottoposte a stimolazione ovarica controllata (COS ) per la fecondazione in vitro/ICSI.

Le pazienti infertili con riserva ovarica normale verranno trattate secondo la pratica clinica e la differenza tra ovociti attesi (tramite AFC) e recuperati sarà valutata in relazione all'uso del resveratrolo.

PROGETTAZIONE E METODOLOGIA:

Verranno arruolate coppie affette da infertilità inspiegata. La definizione di infertilità inspiegata è la seguente: infertilità in coppie con funzione ovarica, tube di Falloppio, utero, cervice e pelvi apparentemente normali, età ≤ 40 anni e con frequenza coitale adeguata; e funzione testicolare apparentemente normale, anatomia genito-urinaria ed eiaculato normale.

Tutti i pazienti saranno randomizzati per nessun trattamento (gruppo placebo - solo acido folico) e per il trattamento con resveratrolo (gruppo studio) con un rapporto 1:1. La lista di randomizzazione, generata da un software, sarà gestita da un infermiere non direttamente coinvolto nello studio e somministrarà ai pazienti i farmaci per tutta la durata del trattamento. Né i medici/embriologi né i pazienti verranno a conoscenza del contenuto delle scatole di farmaci (acido folico o resveratrolo) (design in doppio cieco).

La durata del trattamento sarà di almeno 65 giorni prima dell'inizio della stimolazione (dallo stadio di follicoli preantrali) e fino al giorno del prelievo degli ovociti.

Tutte le determinazioni dell'AFC verranno eseguite dagli stessi due medici dal 2° al 6° giorno del ciclo, in uno degli ultimi tre mesi prima dell'inizio della stimolazione. Verranno registrati tutti i follicoli compresi tra 2 e 10 mm (distinguendo tra i follicoli compresi tra 2 e 5 mm e quelli compresi tra 6 e 10 mm).

La COS verrà effettuata mediante iniezioni giornaliere di rFSH (Gonal F; Merck Serono, Italia) e verrà iniziata il 2°/3° giorno del ciclo e proseguita fino al giorno dell'induzione della maturazione degli ovociti. La soppressione ipofisaria sarà ottenuta mediante la somministrazione dell'antagonista del GnRH ganirelix (0,25 mg al giorno, Fyremadel, Ferring S.p.A.), che verrà iniziata a partire dal 6° giorno della stimolazione ovarica fino al giorno dell'induzione della maturazione degli ovociti.

Lo sviluppo follicolare sarà monitorato dopo 5 giorni di trattamento e successivamente almeno ogni 2 giorni. Il monitoraggio consisterà in: a) ecografia transvaginale per valutare il numero e il diametro massimo dei follicoli ovarici e lo spessore endometriale; b) il dosaggio di 17β-estradiolo, LH e progesterone solo il giorno dell'induzione della maturazione degli ovociti. L'ecografia transvaginale per il monitoraggio verrà eseguita dagli stessi due medici.

Verranno utilizzate 10.000 UI di hCG urinario altamente purificato (Gonasi HP, IBSA Farmaceutici, Italia), per via sottocutanea o intramuscolare, per indurre la maturazione finale dell'ovocita quando si osserveranno due o più follicoli di diametro ≥ 16 mm e verranno somministrati per 35,5-36 ore prima del prelievo pianificato degli ovociti. In caso di rischio OHSS, la maturazione finale degli ovociti sarà ottenuta utilizzando un agonista del GnRH (Triptorelina, Decapeptyl 0,1 mg, Ipsen S.p.A., Italia) 0,3 mg per via sottocutanea, e il recupero degli ovociti sarà pianificato con le stesse modalità sopra descritte; in questo caso tutti gli embrioni ottenuti verranno crioconservati.

Non è stata mostrata alcuna differenza nel numero di ovociti recuperati confrontando queste due diverse modalità di attivazione della maturazione finale degli ovociti (Haahr et al., 2017).

L'innesco della maturazione dell'ovocita non sarà raggiunto in caso di incapacità di raggiungere almeno 2 follicoli ≥16 mm.

I prelievi degli ovociti verranno eseguiti dai due medici con il massimo livello di esperienza.

Il nuovo trasferimento degli embrioni verrà effettuato il secondo, terzo o quinto giorno dopo il prelievo degli ovociti.

In caso di rischio OHSS e/o in caso di aumento del progesterone il giorno della somministrazione di hCG (≥1,5 ng/ml), tutti gli embrioni verranno crioconservati. Le coppie con tutti gli embrioni congelati verranno prese in considerazione per l'analisi degli endpoint.

CALCOLO DELLA DIMENSIONE DEL CAMPIONE:

Per perseguire gli obiettivi del presente protocollo di studio, è stato condotto un calcolo a priori della dimensione del campione per determinare il numero minimo di partecipanti richiesto. I dati disponibili in letteratura indicano in media una differenza di 1,5 nel n. di follicoli pre-ovulatori (≥16 mm) tra il gruppo trattato con resveratrolo e il gruppo di controllo, con un aumento medio del 15% a favore del gruppo di studio. Pertanto, considerando una differenza conservativa del 10%, che equivale a una dimensione dell'effetto elevata di d=0,80, una potenza (1-β) del 95%, un alfa di 0,05, un t-test a due code e un rapporto di 1:1 tra i due gruppi, sarebbero necessari un totale di 90 soggetti (45 per ciascun gruppo) per verificare una differenza significativa nell'esito primario tra i due gruppi.