Studio di collaborazione longitudinale Aimmune (FIBER-IMPACT)

I partecipanti saranno selezionati da un pool di candidati precedentemente selezionati e identificati o che hanno comunicato interesse a partecipare alla ricerca attraverso il programma GoodNature, gestito da Aimmune. Nessun partecipante che abbia realizzato o abbia il potenziale per realizzare un gran numero di prodotti finiti non sarà autorizzato a partecipare. Coloro che accettano di partecipare completeranno un sondaggio di pre-screening sanitario tramite modulo elettronico o telefonata e completeranno il modulo di consenso informato (ICF). Dopo il completamento dell'ICF, ai partecipanti verrà assegnato un ID partecipante univoco e anonimo. Solo pochi membri selezionati dello Sponsor dello studio avranno accesso ai codici identificativi; i codici di deidentificazione non saranno condivisi con i collaboratori. Successivamente, ai partecipanti verranno fornite informazioni generali sulle pratiche dietetiche, sui benefici delle fibre e dettagli relativi allo studio, inclusa la raccolta e l'etichettatura dei campioni, il monitoraggio della dieta tramite sondaggi, foto dei pasti inviati, ecc.

I partecipanti si incontreranno presso un sito di studio e verranno forniti semi di chia, lo strumento manuale per il campionamento delle feci e contenitori per campioni preetichettati se raccolgono i campioni a casa. In questo momento, i partecipanti possono anche fornire campioni di sangue.

Una volta completati i materiali pre-intervento, i partecipanti (60) inizieranno un periodo di intervento di 16 settimane; metà dei partecipanti aggiungerà 2,5 cucchiai di semi di chia al giorno per le prime 8 settimane dello studio e tornerà alla propria dieta normale per le seconde 8 settimane, metà dei partecipanti manterrà la propria dieta normale per le prime 8 settimane e aggiungerà 2,5 cucchiai di semi di chia al giorno per le seconde 8 settimane come progetto crossover. Possono partecipare più persone nella famiglia, ma perché vogliamo comprendere la trasmissibilità dei livelli di SCFU e/o IgA.

I partecipanti verranno randomizzati in due gruppi, ma i membri della stessa famiglia verranno assegnati a gruppi opposti.

A tutti i partecipanti verrà chiesto di completare un breve sondaggio elettronico sullo stress quotidiano, inclusa la fornitura di foto quotidiane dei pasti. L'indagine quotidiana includerà il Questionario sulla salute del paziente (PHQ-4), un breve questionario di screening convalidato costituito da una scala della depressione a 2 voci (PHQ-2) e una scala dell'ansia a 2 voci (GAD-2)2. I dati PHQ-4 verranno utilizzati per monitorare lo stress. Le foto giornaliere dei pasti verranno utilizzate per tenere traccia dei dati sulla dieta durante lo studio.

Il punteggio totale PHQ-4 varia da 0 a 12, con le categorie di disagio psicologico2:

• Nessuno 0-2
• Lieve 3-5
• Moderato 6-8
• Grave 9-12

Sottoscala dell'ansia = somma degli elementi 2 e 3 del modulo di indagine giornaliera (intervallo di punteggio da 0 a 6) Sottoscala della depressione = somma degli elementi 4 e 5 del modulo di indagine quotidiana (intervallo di punteggio da 0 a 6) In ciascuna sottoscala, un punteggio pari o superiore a 3 è considerato positivo ai fini dello screening.

Ai partecipanti verrà inoltre chiesto di raccogliere un minimo di 3 campioni di feci a settimana durante lo studio. I partecipanti che stanno raccogliendo campioni di feci a casa conserveranno i campioni nei loro congelatori in un contenitore per la conservazione dei rischi biologici fornito e i campioni verranno ritirati settimanalmente dal personale dello studio o da un corriere. Tutti i partecipanti scannerizzeranno il codice QR sul contenitore per registrare la data e l'ora di raccolta del campione e scriveranno la data di raccolta sul contenitore.

Nelle settimane 1, 8 e 16, ai partecipanti verrà chiesto di raccogliere dati dettagliati sulla dieta tramite sondaggio elettronico, utilizzando lo strumento di valutazione dietetica 24 ore su 24 automatizzato e autosomministrato NIH. I campioni di feci verranno preparati e suddivisi in aliquotazioni dallo sponsor dello studio e inviati all'UCI e alla Cleveland Clinic per la PCR batterica, l'analisi metabolomica, il sequenziamento metagenomico Shotgun, la valutazione del titolo delle spore batteriche e il test delle IgA. Tutti i campioni, compresi i campioni di sangue, verranno conservati a tempo indeterminato in un congelatore a -80°C presso Aimmune Therapeutics per la ricerca secondo il protocollo esistente della biobanca n. 20234092. Ai partecipanti verranno inviati sondaggi intermedi e successivi all'intervento per valutare le esperienze con lo studio e i semi di chia, nonché per identificare eventuali effetti collaterali o reclami.

I sondaggi non identificati verranno forniti e analizzati dallo Sponsor dello studio.

Soggetti con bassi livelli di IgA durante lo studio. Per scoprire i batteri sconosciuti che degradano le IgA, i ricercatori diffonderanno campioni fecali di soggetti con basso livello di IgA su piastre di agar sangue anaerobico del CDC per formare singole colonie. Successivamente, i ricercatori sottocoltureranno tutte le colonie sul nuovo agar sangue del CDC mediante striamento. I ricercatori raschieranno ciascuna colonia di sottocoltura in un tampone PBS sterile e metteranno in comune circa 15 colonie individuali per l'incubazione in vitro con IgA e Pigr. Dopo l'incubazione notturna a 37 °C, l'analisi WB verrà utilizzata per valutare la degradazione di IgA e Pigr. Le colonie del pool batterico con attività di clivaggio di IgA/Pigr verranno nuovamente incubate individualmente con i substrati e analizzate mediante immunoblotting.

Valutare la complessità dei batteri che degradano le IgA. I ricercatori determineranno la sensibilità agli antibiotici dei batteri candidati in vitro. A causa delle sfide con T. immunophilia (degradatore delle IgA nei topi), i ricercatori valuteranno la complessità delle colonie (se crescono facilmente in coltura pura rispetto alla presenza di batteri compagni all'interno della colonia isolata). Se il candidato degradatore delle IgA cresce lentamente in coltura, i ricercatori valuteranno l'auxotrofia dei batteri come per T. immunophila. I ricercatori utilizzeranno strumenti genomici e metabolici in combinazione per testare l'auxotrofia.

Soggetti con livelli elevati di IgA alla fine dello studio. I ricercatori inoculeranno topi esenti da germi con campioni di feci di questi donatori e valuteranno i livelli di IgA dopo due settimane in questi topi (utilizzeremo campioni a basso contenuto di IgA come controllo). Per i topi che hanno livelli elevati di IgA, i ricercatori isoleranno le spore con vari metodi e le testeranno su topi privi di germi. I ricercatori perfezioneranno il più possibile la comunità stimolante le IgA e testeranno se è coltivabile. L’obiettivo è identificare i microbi intestinali umani che rispondono alle fibre nella dieta e alterano i livelli di IgA in tutti i microbi intestinali.