Danno d'organo bersaglio e polimorfismi Vav-2 e Vav-3 in soggetti ipertesi (LOD-HTA)

Monitoraggio ambulatoriale della pressione arteriosa (ABPM): L'ABPM verrà eseguito in un giorno di attività standard, con un bracciale adeguato alle dimensioni del braccio del paziente. Verrà utilizzato un sistema di controllo, modello SpaceLabs 90207 (Spacelabs Healthcare, Issaquah, Washington, USA), validato secondo il protocollo della British Hypertension Society [57]. Sono state considerate valide le registrazioni in cui la percentuale di letture valide sarà l'80% del totale e con letture valide in ogni momento. Inoltre, affinché le registrazioni siano valutabili, saranno necessarie almeno 14 misurazioni durante il periodo diurno, o almeno sette durante il periodo notturno o di riposo. Il monitor sarà programmato per ottenere misurazioni della pressione sanguigna ogni 20 minuti durante il periodo diurno e ogni 30 minuti durante il periodo di riposo. Gli stimatori medi e di dispersione di SBP e DBP sono stati calcolati durante le 24 ore, diurne e notturne, definite sulla base del diario riportato dal paziente. Il paziente compila un modulo specificando l'ora di coricarsi e l'ora della sveglia.

Indice di rigidità arteriosa ambulatoriale (AASI) e indice di rigidità arteriosa domestica (HASI): La rigidità arteriosa sarà valutata dagli indici di rigidità arteriosa ambulatoriale e domestica (AASI e HASI). Per la stima AASI e HASI, la pendenza di regressione della pressione arteriosa diastolica su sistolica sarà calcolata per ciascun individuo sulla base dell'ABPM di 24 ore (AASI) e anche delle letture HASI nell'arco di 6 giorni. AASI e HASI sono stati definiti come uno meno la rispettiva pendenza di regressione di DBP su SBP [58]. L'AASI verrà anche calcolato dalla pressione sanguigna al risveglio o durante il sonno.

Valutazione dei vasi retinici: la retinografia verrà eseguita utilizzando una telecamera retinica non midriatica Topcon TRC NW 200 (Topcon Europe B.C., Capelle a/d Ijssel, Paesi Bassi), ottenendo immagini nasali e temporali centrate sul disco. L'immagine nasale con il disco centrato verrà caricata nel software sviluppato, calcolatore dell'indice AV (Ciclorisk SL, Salamanca, Spagna, registro n. 00/2011/589). Il software riconosce automaticamente il disco e disegna due cerchi concentrici esterni che delimitano l'area A, compresa tra 0 e 0,5 diametri del disco dal margine del disco ottico, e l'area B, tra 0,5 e 1 diametro del disco dal margine. Il software individua dapprima i limiti dei diversi vasi, dopodiché riconosce automaticamente arterie e vene, ed effettua misurazioni multiple del diametro della sezione dei vasi circolanti nell'area B. Infine stima il calibro medio di vene e arterie in mm , e queste misurazioni sono riassunte come rapporto arteriole-venule, AVIx. Un AVIx di 1,0 suggerisce che i diametri arteriolari saranno in media uguali ai diametri venulari in quell'occhio, mentre un AVR più piccolo suggerisce arteriole più strette. Abbiamo utilizzato le coppie di vasi principali nei quadranti temporali superiore e inferiore, rifiutando tutti gli altri vasi, per migliorare l'affidabilità e aumentare l'efficienza del processo, analizzando le misure per ciascun quadrante separatamente e insieme per stimare la misura media in ciascun occhio. [64].

Laboratorio: la determinazione della concentrazione di superossido e catecolamine (adrenalina e noradrenalina) nel plasma e nell'anione urinario sarà determinata mediante ELISA (CatCombi ELISA, IBL, Deventer, Paesi Bassi), seguendo le istruzioni del produttore. L'attività della superossido dismutasi nel plasma sarà valutata anche utilizzando i kit ELISA (Cu-Zn superoxid-dismutase ELISA, IBL) e l'escrezione urinaria e i livelli plasmatici dei perossidi lipidici misurando i prodotti che reagiscono con l'acido tiobarbiturico (TBARS) (OxiSelect TBARS Assay Kit, Cell Biolabs, Inc., San Diego, CA 92126).

In un campione di DNA di sangue periferico vengono studiati i polimorfismi eritrocitari dei geni VAV e VAV-2-3 in tutti i soggetti dello studio. A tal fine, 10cc di sangue venoso ottenuto con anticoagulante (EDTA: acido etilendiamminotetra-acetico).

Valutazione renale: il danno renale sarà valutato misurando la concentrazione plasmatica di creatinina, la velocità di filtrazione glomerulare è stata stimata da CKD-EPI (Chronic Kidney Disease Epidemiology Collaboration) [59] e MDRD-IDMS (Modification of Diet in Renal Disease-Isotopic Dilution Spettrometria di massa) [60] e proteinuria sono state valutate dal rapporto albumina/creatinina seguendo i criteri della European Society of Hypertension/European Society of Cardiology Guidelines del 2007 [2]. Il danno d'organo subclinico è stato definito come creatinina plasmatica tra 1,3 - 1,5 mg/dl negli uomini e 1,2 - 1,4 mg/dl nelle donne, velocità di filtrazione glomerulare inferiore a 60 ml/min o rapporto albumina/creatinina > 22 mg/gr negli uomini e 31 mg /gr nelle donne. La malattia renale è stata definita come creatinina plasmatica di 1,5 mg/dl o superiore negli uomini e 1,4 mg/l nelle donne o rapporto albumina/creatinina > 300 mg/24 ore.

Valutazione cardiaca: L'esame elettrocardiografico verrà eseguito con un sistema ECG General Electric MAC 3.500 (Niskayuna, New York, USA), che misura automaticamente la tensione e la durata delle onde e stima i criteri del prodotto Cornell tensione-durata (Cornell VDP) [61] per valutare l'LVH mediante la seguente equazione: Uomini ((RaVL + SV3) * QRS) e donne ((RaVL + SV3) * QRS + 6). LVH sarà definito come il prodotto tensione-durata > 2.440 mm/ms [2] e Sokolow e R avl > 11.

Velocità dell'onda del polso (PWV): questi parametri saranno stimati utilizzando il sistema SphygmoCor (AtCor Medical Pty Ltd., sede centrale, West Ryde, Australia). Utilizzando il Sistema SphygmoCor (Vx pulse wave velocity), e con il paziente in posizione supina, sono state analizzate le onde del polso delle arterie carotidee e femorali, stimando il ritardo rispetto all'onda ECG e calcolando il PWV. Le misurazioni della distanza sono state effettuate con un nastro di misurazione dalla tacca sternale alle arterie carotidi e femorali nella posizione del sensore [62].

Valutazione della struttura vascolare mediante spessore dell'intima media carotidea (IMT): L'ecografia carotidea per valutare C-IMT sarà eseguita da due ricercatori addestrati a questo scopo prima di iniziare lo studio. L'affidabilità di tali registrazioni è stata valutata prima dello studio, utilizzando il coefficiente di correlazione intraclasse, che ha mostrato valori di 0,97 (IC 95%: 0,94-0,99) per concordanza intra-osservatore su misurazioni ripetute in 20 soggetti e 0,90 (IC 95%: 0,74-0,96) per accordo tra osservatori. Secondo l'analisi di Bland-Altman, il limite di concordanza tra osservatori era 0,02 (IC 95%: -0,05-0,10), mentre il limite di concordanza intra-osservatore era 0,01 (IC 95%: -0,03-0,06). Verrà utilizzato un dispositivo ecografico Sonosite Micromax abbinato a un trasduttore lineare multifrequenza ad alta risoluzione da 5-10 MHz con software Sonocal per eseguire misurazioni automatiche dell'IMT carotideo al fine di ottimizzare la riproducibilità. Verranno effettuate misurazioni della carotide comune dopo l'esame di una sezione longitudinale di 10 mm ad una distanza di 1 cm dalla biforcazione, effettuando misurazioni nella parete anteriore o prossimale, e nella parete posteriore o distale nella parete laterale, anteriore e proiezioni posteriori, seguendo un asse perpendicolare all'arteria per discriminare due linee: una per l'interfaccia intima-sangue e l'altra per l'interfaccia medio-avventizia. Si otterranno un totale di 6 misurazioni della carotide destra, con altre 6 misurazioni della carotide sinistra, utilizzando valori medi (media IMT carotideo) e valori massimi (massimo IMT carotideo) calcolati automaticamente dal software [63]. Le misurazioni saranno ottenute con il soggetto disteso, con la testa estesa e leggermente ruotata opposta all'arteria carotide esaminata. L'IMT medio sarà considerato anormale se misura 0,90 mm, o se ci saranno placche aterosclerotiche con un diametro di 1,5 mm o un aumento focale di 0,5 mm o il 50% dell'IMT adiacente [2].