胎児手術後の新生児におけるストレス関連のエピジェネティックな変化

背景と目的:

開放性二分脊椎または骨髄髄膜瘤 (MMC) は中枢神経系の壊滅的な先天性欠損症であり、治療法はありません。 MMC の病因はよくわかっていないままです。 胎生期における尾側神経孔での神経管閉鎖の一次障害は、発達中の脊髄の子宮環境への曝露をもたらす。 保護組織が覆われていないと、妊娠中に外傷や羊水によって露出した神経組織が二次的に破壊される可能性があります。 この二次破壊から脊髄を保護するために、妊娠 20 週から 26 週の間に胎児の外科的修復を行うことができます。

心理的な観点からすると、胎児の MMC の修復は、母親と胎児の両方にとって非常にストレスの多い出来事となります。 しかし、今日まで、MMC修復のための出生前手術の場合の母親と子供のストレスは研究されていません。 したがって、手順とその結果がストレスに関連しているかどうか、およびその結果がどの程度まで関連しているか、また短期的または長期的な結果があるかどうかは不明です.

この調査の目的は次の 3 つです。

1. MMCの胎児手術後の新生児は、ストレス調節に関与する遺伝子のエピジェネティックな変化を示しますか?
2. エピジェネティックな変化に関連する医学的および心理社会的変数はどれですか?
3. 生後 3 か月の胎児手術後の乳児は、対照群に比べて気難しい傾向がありますか?

方法:

サンプル: この研究には、チューリッヒ大学病院での MMC の胎児手術後の新生児と 2 つの対照群が含まれます。 1 つは健康な新生児を含み、もう 1 つは妊娠中の合成グルココルチコイド (sGC) への出生前曝露後の新生児を含みます。 各グループには、n=30 の新生児が含まれるものとします (つまり、研究参加者の総数: n=90)。

募集と手続き: 募集は大学小児病院とチューリッヒ大学病院で行われ、必要なサンプル数に達するまで続けられます。 すべての MMC 患者について、グループ 2 および 3 のコントロールの子供の二次募集が実行されます (子供の性別に一致)。 すべての研究グループの保護者は、包含および除外基準を確認した後、責任ある研究スタッフからアプローチされます。 彼らは研究について口頭で通知され、研究情報レター（同封を参照）が提供されます。 必要に応じて、24時間以上対面または電話で研究スタッフから保護者に再度連絡し、質問に答えます。 両親が研究への参加に同意する場合、署名済みの書面によるインフォームド コンセント フォームを提供します (同封を参照)。 研究に組み入れた後、出生後約24〜36時間で研究スタッフから両親に病院で再度連絡を取り、唾液サンプルの収集について再度説明します。 その後、分娩後 24 時間から 72 時間の間に唾液サンプルを採取します。 産後 6 週間と 3 か月で、両親は調査アンケートを郵送で受け取り、1 週間以内に記入して返却するよう求められます。 質問票が 10 日経っても届かない場合は、研究スタッフが保護者に電話で連絡し、念のため確認します。 保護者は、研究に参加することに対して金銭的な補償を受けていません。

収集データ:

-) 子供からの DNA および RNA サンプルの収集は、訓練を受けた研究プロジェクト スタッフによって、入院中に生後 24 時間から 72 時間の間に行われます。 DNAとRNAを採取するために、唾液を自力で吐き出すことができない乳児用に設計された特別なスポンジ装置を使用して唾液を採取します。

DNA の場合、十分な DNA サンプルを得るために、小児用 ORAcollect (OC-175; DNA Genotek Inc) を 2 回使用して唾液を採取します。

RNA の場合、新生児から十分な RNA サンプルを得るために、小児科用の 2x 唾液収集装置 (CP-190; DNA Genotek Inc) を使用して唾液を収集します。

• 医療データ: a) 子供: 出生時の在胎週数。性別;出生時の身長とパーセンタイル;出生時体重とパーセンタイル;出生時の頭囲とパーセンタイル;アプガースコア;臍動脈phおよび乳酸;胎便で染色された羊水;胎児手術時の在胎週数;胎児手術の時間と長さ;必要な胎児の位置;新生児科への転送 (グループ 2 および 3)。 b) 母親: 母親の年齢;パリティ;グルココルチコイド治療時の妊娠期間;早産の治療;妊娠中の薬;手術と周産期変数;喫煙、アルコール、ニコチン、マリファナ、その他の違法薬物の使用歴。 ECS (グループ 2 および 3) の適応。
• 心理社会的データ: 以下の変数は、標準化され検証されたアンケートによって母親から評価されるものとします。社会経済的地位、母親と親の教育;現在の仕事の状況（いいえ、パートタイム、フルタイム）;母方および父方の外傷歴 (小児期の外傷アンケート - バーンスタイン & フィンクからの短い形式、1998; カロスら 2014);妊娠中の重大なライフイベント (Landolt & Vollrath, 1998 による Life Event Scale);妊娠中の母親と父親の主観的ストレス (Cohen, Kamarck, & Mermelstein (1983) および Klein et al. (2016) による知覚ストレス尺度 PSS-10; 妊娠中の遡及的および現在の出産後の評価時点における母親と父親のメンタルヘルス: Spitzer, Kroenke, & Williams (1999) の患者健康アンケート PHQ の 2 つのモジュールによる不安と抑うつ; 国際トラウマ アンケート ITQ (Cloitre et al., 2018) による心的外傷後ストレス障害と乳児の気質幼児行動アンケート IBQ の手段 - Rothbart (1981) による非常に短い形式。 すべての測定値は標準化されており、検証済みのドイツ語版で利用できます。

統計分析: 目的 1 を ANCOVA で調べて、3 つのグループ間で調べた遺伝子領域の総メチル化/遺伝子発現 (mRNA レベル) を比較します。 メチル化レベルと遺伝子発現の間の相関関係は、過剰メチル化が遺伝子発現の低下を誘発し、逆もまた同様であることを期待して調査されます。

目的 2 は、予測変数と総メチル化の間の (部分的な) 相関分析によって調べられます。 要件が満たされている場合、多変量解析が実行されます。

目的 3 は、3 つのグループの IBQ スコアを比較する ANCOVA で調べられます。

データは分析前に変換されません。 選択した統計検定の要件をデータが満たしていない場合は、変更された検定 (例: 一方向テスト) または適切なテスト (例: ノンパラメトリック法) が使用されます。

統計分析は、プログラム Statistical Package for Social Sciences (SPSS、バージョン 25) または統計プログラム R のいずれかを使用して実行されます。統計的有意性は、α= <.05 の有意水準に設定されます。

サンプルサイズ: プログラム G*Power 3.1 (Faul, Erdfelder, Buchner & Lang, 2009) による検出力分析計算によると、3 つのグループを持つ ANCOVA に必要なサンプルサイズ、d=0.4 の効果サイズ (小さな効果) .90 の累乗は n=84 です。