Alterações epigenéticas associadas ao estresse em recém-nascidos após cirurgia fetal

CONTEXTO E OBJETIVOS:

A espinha bífida aberta ou mielomeningocele (MMC) é um defeito congênito devastador do sistema nervoso central para o qual não há cura. A etiologia da MMC permanece pouco compreendida. A falha primária do fechamento do tubo neural no neuroporo caudal no período embrionário resulta na exposição da medula espinhal em desenvolvimento ao ambiente uterino. Sem cobertura tecidual protetora, pode ocorrer destruição secundária do tecido neural exposto por trauma ou líquido amniótico ao longo da gestação. A fim de proteger a medula espinhal dessa destruição secundária, um reparo cirúrgico fetal pode ser realizado entre 20 e 26 semanas de gestação.

Do ponto de vista psicológico, a reparação fetal da MMC constitui um evento altamente estressante tanto para a mãe quanto para o feto. Até o momento, no entanto, o estresse de mães e filhos em caso de cirurgia pré-natal para reparo da MMC nunca foi estudado. Portanto, não está claro se e até que ponto o procedimento e suas consequências estão associados ao estresse e se há consequências de curto ou longo prazo.

Os objetivos deste estudo são três:

1. Recém-nascidos após cirurgia fetal para MMC apresentam alterações epigenéticas em genes envolvidos na regulação do estresse?
2. A quais variáveis ​​médicas e psicossociais estão associadas as alterações epigenéticas?
3. Aos 3 meses de idade, os bebês após a cirurgia fetal têm um temperamento mais difícil em comparação com os controles?

MÉTODOS:

Amostra: O estudo incluirá recém-nascidos após cirurgia fetal para MMC no Hospital Universitário de Zurique e dois grupos de controle. Um incluindo recém-nascidos saudáveis ​​e outro incluindo recém-nascidos após exposição pré-natal a glicocorticóides sintéticos (sGC) na gravidez. Cada grupo deve incluir n=30 recém-nascidos (ou seja, número total de participantes do estudo: n=90).

Recrutamento e procedimentos: O recrutamento será realizado no University Children's Hospital e no University Hospital Zürich e continuará até que o tamanho da amostra necessária seja atingido. Para cada paciente com MMC, será realizado o recrutamento secundário de uma criança controle para os grupos 2 e 3 (comparados por sexo da criança). Os pais de todos os grupos de estudo serão abordados pela equipe responsável pelo estudo após a verificação dos critérios de inclusão e exclusão. Eles serão informados oralmente sobre o estudo e a carta de informações do estudo (ver anexo) será fornecida. Os pais serão contatados novamente após > 24h pessoalmente ou por telefone pela equipe do estudo para responder a quaisquer perguntas, se necessário. Se os pais concordarem em participar do estudo, eles fornecerão o formulário de consentimento informado por escrito assinado (ver anexo). Após a inclusão no estudo, os pais serão contatados novamente no hospital pela equipe do estudo cerca de 24 a 36 horas após o nascimento para reexplicar a coleta das amostras de saliva. As amostras de saliva serão então coletadas entre 24 e 72h pós-parto. Seis semanas e 3 meses após o parto, os pais receberão os questionários do estudo por correio e serão solicitados a preenchê-los e devolvê-los em até 1 semana. Se os questionários não forem recebidos após 10 dias, a equipe do estudo entrará em contato com os pais por telefone para um lembrete gentil. Os pais não são compensados ​​financeiramente por participar do estudo.

Dados coletados:

-) A coleta de amostras de DNA e RNA da criança será realizada entre 24 e 72 horas de vida durante a internação por equipe treinada do projeto de pesquisa. Para obter DNA e RNA, a saliva será coletada usando dispositivos de esponja especiais projetados para uso com bebês que não conseguem cuspir sozinhos.

Para DNA, 2x ORAcollect para pediatria (OC-175; DNA Genotek Inc) será usado para coletar saliva para obter amostra de DNA suficiente.

Para RNA, 2x dispositivos de coleta de saliva para pediatria (CP-190; DNA Genotek Inc) serão usados ​​para coletar saliva a fim de obter amostra de RNA suficiente dos recém-nascidos.

• Dados médicos: a) Criança: Idade gestacional à nascença; Gênero sexual; comprimento e percentil ao nascer; peso e percentil ao nascer; perímetro cefálico ao nascimento e percentil; Índice de Apgar; ph e lactato da artéria umbilical; líquido amniótico corado de mecônio; Idade gestacional na cirurgia fetal; tempo e duração da cirurgia fetal; posicionamento do feto necessário; transferência para neonatologia (grupo 2 e 3). b) Mãe: Idade materna; paridade; idade gestacional no tratamento com glicocorticóide; tratamento do trabalho de parto prematuro; medicamentos durante a gravidez; variáveis ​​cirúrgicas e perinatais; história de tabagismo, álcool, nicotina, maconha, outras drogas ilícitas; Indicação para ECS (grupo 2 e 3).
• Dados psicossociais: Serão avaliadas as seguintes variáveis ​​das mães por meio de questionários padronizados e validados: país de nascimento (pais, avós); Situação socioeconómica, escolaridade materna e parental; situação profissional atual (não, meio período, período integral); histórico de trauma materno e paterno (Childhood Trauma Questionnaire - Short Form de Bernstein & Fink, 1998; Karos et al. 2014); eventos de vida significativos durante a gravidez (Life Event Scale de Landolt & Vollrath, 1998); estresse subjetivo materno e paterno durante a gravidez (Perceived Stress Scale PSS-10 de Cohen, Kamarck e Mermelstein (1983) e Klein et al. (2016); saúde mental materna e paterna tanto retrospectivamente durante a gravidez quanto atualmente nos pontos de avaliação após o nascimento : ansiedade e depressão por meio de dois módulos do Patient Health Questionnaire PHQ de Spitzer, Kroenke, & Williams (1999); transtorno de estresse pós-traumático por meio do International Trauma Questionnaire ITQ (Cloitre et al., 2018) e temperamento do bebê por por meio do Infant Behavior Questionnaire IBQ - Very Short Form de Rothbart (1981). Todas as medidas são padronizadas e estão disponíveis em versões alemãs validadas.

Análises estatísticas: O Objetivo 1 será examinado com ANCOVAs para comparar a metilação total/expressão gênica (nível de mRNA) para as regiões gênicas estudadas nos 3 grupos. A correlação entre níveis de metilação e expressão gênica será investigada, esperando-se que a hipermetilação induza expressão gênica reduzida e vice-versa.

O Objetivo 2 será examinado por análises correlacionais (parciais) entre variáveis ​​preditoras e metilação total. Se os requisitos forem atendidos, análises multivariadas serão realizadas.

O Objetivo 3 será examinado com ANCOVAs comparando as pontuações do IBQ nos três grupos.

Os dados não serão transformados antes da análise. Se os dados não atenderem aos requisitos dos testes estatísticos selecionados, testes modificados (por exemplo, teste unidirecional) ou testes apropriados (p. métodos não paramétricos) serão usados.

A análise estatística será realizada com o programa Statistical Package for the Social Sciences (SPSS, Versão 25) ou com o programa estatístico R. A significância estatística será definida para um nível de significância α= <.05.

Tamanho da amostra: De acordo com um cálculo de análise de poder com o programa G*Power 3.1 (Faul, Erdfelder, Buchner & Lang, 2009), o tamanho da amostra necessário para uma ANCOVA com 3 grupos, um tamanho de efeito de d=0,4 (pequeno efeito ) e uma potência de 0,90 é n=84.