Alteraciones epigenéticas asociadas al estrés en recién nacidos poscirugía fetal

ANTECEDENTES Y OBJETIVOS:

La espina bífida abierta o mielomeningocele (MMC) es un defecto congénito devastador del sistema nervioso central para el que no existe cura. La etiología de la MMC sigue siendo poco conocida. La falla primaria del cierre del tubo neural en el neuroporo caudal en el período embrionario da como resultado la exposición de la médula espinal en desarrollo al ambiente uterino. Sin una cobertura de tejido protector, puede ocurrir una destrucción secundaria del tejido neural expuesto por traumatismo o líquido amniótico durante la gestación. Para proteger la médula espinal de esta destrucción secundaria, se puede realizar una reparación quirúrgica fetal entre las semanas 20 y 26 de gestación.

Desde un punto de vista psicológico, la reparación fetal de MMC constituye un evento altamente estresante tanto para la madre como para el feto. Sin embargo, hasta la fecha, nunca se ha estudiado el estrés de las madres y los niños en caso de cirugía prenatal para la reparación de MMC. Por lo tanto, no está claro si el procedimiento y sus consecuencias están asociados con el estrés y en qué medida, y si hay consecuencias a corto o largo plazo.

Los objetivos de este estudio son tres:

1. ¿Los recién nacidos tras cirugía fetal por MMC presentan alteraciones epigenéticas en genes implicados en la regulación del estrés?
2. ¿A qué variables médicas y psicosociales se asocian las alteraciones epigenéticas?
3. A los 3 meses de edad, ¿los bebés después de la cirugía fetal tienen un temperamento más difícil en comparación con los controles?

MÉTODOS:

Muestra: El estudio incluirá recién nacidos después de cirugía fetal por MMC en el Hospital Universitario de Zúrich y dos grupos de control. Uno que incluye recién nacidos sanos y otro que incluye recién nacidos después de la exposición prenatal a glucocorticoides sintéticos (sGC) en el embarazo. Cada grupo incluirá n=30 recién nacidos (es decir, número total de participantes en el estudio: n=90).

Reclutamiento y procedimientos: El reclutamiento se llevará a cabo en el University Children's Hospital y el University Hospital Zürich y continuará hasta que se alcance el tamaño de muestra requerido. Para cada paciente con MMC, se realizará el reclutamiento secundario de un niño de control para los grupos 2 y 3 (emparejados por sexo del niño). El personal responsable del estudio se acercará a los padres de todos los grupos de estudio después de verificar los criterios de inclusión y exclusión. Se les informará oralmente sobre el estudio y se les entregará la carta de información del estudio (ver adjunto). El personal del estudio se pondrá en contacto con los padres de nuevo después de más de 24 horas en persona o por teléfono para responder a cualquier pregunta, si es necesario. Si los padres aceptan participar en el estudio, proporcionarán el formulario de consentimiento informado por escrito firmado (ver adjunto). Después de la inclusión en el estudio, el personal del estudio contactará nuevamente a los padres en el hospital alrededor de 24 a 36 horas después del nacimiento para volver a explicar la recolección de las muestras de saliva. Luego, las muestras de saliva se recolectarán entre las 24 y las 72 horas posteriores al parto. Seis semanas y 3 meses después del parto, los padres recibirán los cuestionarios del estudio por correo y se les pedirá que los completen y los devuelvan en el plazo de 1 semana. Si los cuestionarios no se reciben después de 10 días, el personal del estudio se comunicará con los padres por teléfono para recordarles amablemente. Los padres no reciben compensación económica por participar en el estudio.

Informacion recolectada:

-) La toma de muestras de ADN y ARN del niño se realizará entre las 24 y las 72 horas de vida durante la hospitalización por personal capacitado del proyecto de investigación. Para obtener ADN y ARN, la saliva se recolectará utilizando dispositivos de esponja especiales diseñados para usar con bebés que no pueden escupir de forma independiente.

Para el ADN, se utilizarán 2x ORAcollect para pediatría (OC-175; DNA Genotek Inc) para recolectar saliva a fin de obtener suficiente muestra de ADN.

Para el ARN, se utilizarán dispositivos de recolección de saliva 2x para pediatría (CP-190; DNA Genotek Inc) para recolectar saliva a fin de obtener suficiente muestra de ARN de los recién nacidos.

• Datos médicos: a) Niño: Edad gestacional al nacer; género; talla al nacer y percentil; peso al nacer y percentil; perímetro cefálico al nacer y percentil; Puntaje de Apgar; ph y lactato de la arteria umbilical; líquido amniótico teñido de meconio; Edad gestacional en el momento de la cirugía fetal; tiempo y duración de la cirugía fetal; posicionamiento del feto necesario; traslado a neonatología (grupo 2 y 3). b) Madre: Edad materna; paridad; edad gestacional en el momento del tratamiento con glucocorticoides; tratamiento del trabajo de parto prematuro; medicamentos durante el embarazo; cirugía y variables perinatales; antecedentes en cuanto a tabaquismo, alcohol, nicotina, marihuana, otras drogas ilícitas; Indicación para ECS (grupo 2 y 3).
• Datos psicosociales: Se evaluarán las siguientes variables de las madres mediante cuestionarios estandarizados y validados: país de nacimiento (padres, abuelos); Situación socioeconómica, educación materna y parental; situación laboral actual (no, medio tiempo, tiempo completo); antecedentes de trauma materno y paterno (Childhood Trauma Questionnaire - Short Form from Bernstein & Fink, 1998; Karos et al. 2014); eventos significativos de la vida durante el embarazo (Life Event Scale de Landolt & Vollrath, 1998); estrés subjetivo materno y paterno durante el embarazo (Escala de estrés percibido PSS-10 de Cohen, Kamarck y Mermelstein (1983) y Klein et al. (2016); salud mental materna y paterna retrospectivamente durante el embarazo y actualmente en los puntos de evaluación después del nacimiento : ansiedad y depresión mediante dos módulos del Patient Health Questionnaire PHQ de Spitzer, Kroenke, & Williams (1999), trastorno de estrés postraumático mediante el International Trauma Questionnaire ITQ (Cloitre et al., 2018) y temperamento del infante mediante mediante el Infant Behaviour Questionnaire IBQ - Very Short Form de Rothbart (1981). Todas las medidas están estandarizadas y disponibles en versiones alemanas validadas.

Análisis estadísticos: el objetivo 1 se examinará con ANCOVA para comparar la metilación/expresión génica total (nivel de ARNm) para las regiones genéticas estudiadas en los 3 grupos. Se investigará la correlación entre los niveles de metilación y la expresión génica, esperando que la hipermetilación induzca una expresión génica reducida y viceversa.

El objetivo 2 se examinará mediante análisis correlacionales (parciales) entre las variables predictoras y la metilación total. Si se cumplen los requisitos, se realizarán análisis multivariados.

El objetivo 3 se examinará con ANCOVA comparando las puntuaciones de IBQ en los tres grupos.

Los datos no se transformarán antes del análisis. Si los datos no cumplen con los requisitos para las pruebas estadísticas seleccionadas, entonces las pruebas modificadas (p. pruebas unidireccionales) o pruebas apropiadas (p. métodos no paramétricos).

El análisis estadístico se realizará con el programa Statistical Package for Social Sciences (SPSS, Versión 25) o el programa estadístico R. La significancia estadística se establecerá en un nivel de significancia de α= <.05.

Tamaño de muestra: Según un cálculo de análisis de poder con el programa G*Power 3.1 (Faul, Erdfelder, Buchner & Lang, 2009), el tamaño de muestra requerido para un ANCOVA con 3 grupos, un tamaño de efecto de d=0.4 (pequeño efecto ) y una potencia de .90 es n=84.