膝の変形性関節症を治療するための自己脂肪由来間質血管画分の使用

方法:

脂肪の収穫。 経口または非経口の鎮静剤を使用せず、標準的な湿潤液 (1 リットルの乳酸リンゲル液、1% リドカイン 50 mg、および 1:1000 エピネフリン 1 cc) を、腹部に #11 メスの刃の先端で作成した小さな切開部から注入しました。または、標準の多穴注入カニューレを使用してフランクします。 スーパーウェット プラス テクニック (提案された脂肪吸引液 1 ボリュームに対して 2 ボリュームのウェット ソリューション) を使用して、深層および表層の脂肪コンパートメントに溶液を注入しました。 エピネフリンの血管収縮効果が最大になるように 20 分間放置しました。 脂肪は、約 0.5 ～ 0.7 気圧の真空で 3 mm カニューレを使用した標準的な吸引補助脂肪吸引 (SAL) 法を使用して採取し、約 200 ～ 300 cc の脂肪吸引物を滅菌組織処理容器 (GID SVF-1、Lousiville、 CO) 治療する膝ごとに。

脂肪処理方法。 脂肪吸引物を採取し、単一の GID SVF-1 滅菌使い捨てデバイス内で SVF の生成まで処理しました。 GID SVF-1 ユニットには、洗浄機構、メッシュ フィルター、および遠心分離機能が同じデバイスに含まれています。 採取後、脂肪吸引物を、1リットルあたり20mgのCiproと5,000単位のヘパリンを含む37℃の乳酸リンゲル液で3回洗浄し、メッシュフィルターシステムを使用して液体部分を除去し、キャニスター内に乾燥脂肪を残しました。 キャニスターを秤量して、さらなる処理に使用できる乾燥脂肪の量を決定しました。 洗浄された脂肪は、Ｉ型コラゲナーゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ，Ｌａｋｅｗｏｏｄ，ＮＪ）を使用して、全触媒容積の２００ＣＤＵ／ｍｌの濃度で分解された。ここで、全触媒容積は、脂肪組織の容積に等しい容積の３７Ｃ乳酸リンゲル溶液を加えたものである。 コラゲナーゼは、無菌の.22 ミクロンフィルター (Millex-MP、ミリポア、コーク、アイルランド)。 次に、脂肪、バッファー、およびコラゲナーゼを含むデバイスを、38℃、150 RPM で 40 分間インキュベートしたシェーカーに入れました。図 1 を参照してください。 解離後、ヒトアルブミン溶液を添加して濃度を 2.5% にし、それ以上のコラゲナーゼ活性を停止させました。 次いで装置を８００ｇで１０分間遠心分離した。 すべての浮遊細胞と破片、および水相を含む上清を、デバイスの上部にあるポートを使用して除去し、廃棄しました。 下部の SVF ペレットを、14G 5.5 インチの脊髄針 (Abbocath-T、Hospira、Sligo、Ireland) を使用して、デバイスの中央ポートを介してアクセスした 10 ml の無菌 LR に再懸濁しました。 ０．５ｍｌの再懸濁液のサンプルを１．５ｃｃのエッペンドルフ管に集め、細胞計数およびアッセイに使用した。 再懸濁したＳＶＦ細胞を、滅菌した１５ｍｌファルコンチューブを４００ｇで４分間使用して、３ｍｌ用量に濃縮した。

SVFカウント方法。 ADAM MC 画像サイトメトリー システム (Bulldog Bio, Portsmouth, NH) を使用して、SVF 細胞数と生存率を評価しました。 ADAM MC は、ヨウ化プロピジウム染色を使用して、生存および非生存の有核細胞をカウントします。 アッセイ サンプルの 100 µL アリコートを 1:5 の比率 (サンプル 1 対滅菌 LR 5) で希釈し、サンプルを ADAM MC の動作限界内に調整しました。 識別染色が適用され、ADAM デバイスで使用される使い捨てカセットにアリコートがロードされました。 ADAM 計数装置の結果は、再懸濁シリンジ内の SVF 細胞の濃度と生存率を示します。 シリンジ内の再懸濁の総量に濃度を乗じて、再懸濁した単核細胞の総数を求めました (脂肪細胞、RBC、および計数プロセスに含まれるフラグメントはありません)。

注射と画像誘導法。 患者は仰臥位に置かれ、膝の膝蓋骨外側領域上の領域は、ヨウ素調製溶液 (1% ヨードフォア) に続いて 70% イソプロピル アルコール溶液を使用して、通常の無菌様式で調製されました。 この場所は、関節内空間へのアクセスが容易であり、膝の脂肪パッドへの注入を避けるために使用されました。 鎮静剤や鎮痛剤は患者に投与されませんでした。 皮膚の色が白くなるまで、塩化エチルの局所麻酔薬を膝の外側にスプレーしました。 リドカイン局所麻酔薬を 25 ゲージ針を使用して注射し、皮膚と皮下組織を麻痺させました。 M-Turbo Sonosite 超音波システムを使用して、関節腔を特定し、生の超音波ガイダンスの下で、18 ゲージ/1.5 を使用して膝を吸引しました。 液体が吸引に利用できる場合は、インチ針。 次に、3 cc の SVF の緩衝溶液のすべてを、同じ 18 ゲージ/1.5 を通して関節内腔にゆっくりと注入しました。 インチ針。 次に針を抜き、注射部位に約10秒間直接圧力をかけた。 注射後の止血を確認した後、注射部位をアルコールワイプで洗浄し、滅菌バンドエイドで覆った。 患者は松葉杖を与えられ、注射された膝に体重がかからないように 2 日間求められました。 体重がかからない状態が維持される限り、患者は膝を曲げたり曲げたりすることが許されました。

痛みと可動性の評価方法。 膝の痛みの評価は、NIH の資金提供を受けて開発された検証済みの痛み尺度システムである PROMIS 痛み測定器を使用して行われました。 PROMIS (Patient Reported Outcomes Measurement Information System) は、3 つの痛みの測定を含む、身体的、精神的、社会的幸福について患者が報告した健康状態を測定するためのシステムです (www.nihpromis.org)。 PROMIS 疼痛強度測定器 (3a) は、人がどれだけ痛むかを評価します。 PROMIS 疼痛行動測定器 (Bank 1.0) は、個人が痛みを経験していることを他者に示す行動を測定します。 PROMIS 疼痛干渉測定器 (Bank 1.0) は、人生の関連する側面に対する痛みの影響を測定します。 患者の反応は、検証済みの尺度で数値に変換されます。 疼痛測定器の各質問への回答は 1 から 5 の範囲 (1 = まったくない、2 = 少し、3 = ある程度、4 = かなり、5 = 非常に多い) であり、質問の数を合計します。生のスコアを作成します。 生のスコアは、米国の一般人口の大規模なサンプルに基づいて、平均 50、SD 10 の反復応答法を使用して標準化されたスコアに変換されます。 検証済みの PROMIS 疼痛スケールは間隔データを提供し、平均値と SD の計算、有意性の t 検定の使用を可能にします。 データは術前 (時間 0)、および 2 週間、4 週間、6 週間、12 週間の追跡時点で記録されました。

さらに、患者は、痛みに関する 1 つの質問と可動性に関する 1 つの質問で、痛みと可動性のアンケートに回答するよう求められました。 アンケートでは、± 1 ～ 5 のスケールを使用して、手術前と比較して痛みと可動性の増減を比較するよう患者に求めました。図 2 を参照してください。痛み/可動性。 このアンケートは序数データを提供し、Wilcoxon Ranked Sums ノンパラメトリック検定を使用して中央値と有意性を計算できます。