Autologisen rasvakudoksesta peräisin olevan stromaalisen vaskulaarifraktion käyttö polven nivelrikon hoitoon

Menetelmät:

Rasvan sato. Ilman oraalista tai parenteraalista rauhoittavaa standardia kostutusliuosta (1 litra Ringerin laktaattia, 50 milligrammaa 1 % lidokaiinia ja 1 cm3 1:1000 adrenaliinia) infusoitiin pienten viiltojen kautta, jotka tehtiin leikkausveitsen 11 kärjellä vatsaan. tai kyljessä käyttämällä tavallista monireikäistä infuusiokanyylia. Super-wet plus -tekniikkaa (2 tilavuutta kostutusliuosta kohti ehdotettua rasvaaspiraattia) käytettiin liuoksen infusoimiseksi syvään ja pinnalliseen rasvaosastoon. 20 minuuttia sallittiin epinefriinin maksimaalisen vasokonstriktiivisen vaikutuksen saavuttamiseksi. Rasva kerättiin tavanomaisella imuavusteisella rasvaimumenetelmällä (SAL) 3 mm:n kanyylillä noin 0,5 - 0,7 ilmakehän tyhjiössä, aspiroimalla noin 200-300 cc lipoaspiraattia steriiliin kudoskäsittelysäiliöön (GID SVF-1, Lousiville, CO) jokaiselle hoidettavalle polvelle.

Rasvan käsittelymenetelmä. Lipoaspiraatti kerättiin ja prosessoitiin aina SVF:n luomiseen yhdessä GID SVF-1 steriilissä kertakäyttöisessä laitteessa. GID SVF-1 -yksikkö sisältää pesumekanismin, verkkosuodattimen ja sentrifugitoiminnon samassa laitteessa. Keräyksen jälkeen lipoaspiraatti pestiin kolme kertaa 37C Ringerin laktaattiliuoksella, jossa oli 20 mg Ciproa ja 5 000 yksikköä hepariinia litrassa, ja nesteosa poistettiin käyttämällä verkkosuodatinjärjestelmää, jolloin kuivaa rasvaa jäi kanisterin sisään. Kanisteri punnittiin jatkokäsittelyyn käytettävissä olevan kuivan rasvan määrän määrittämiseksi. Pesty rasva hajotettiin käyttämällä tyypin I kollagenaasia (Worthington, Lakewood, NJ) pitoisuutena 200 CDU/ml katalyyttisen kokonaistilavuudesta, jossa katalyyttisen kokonaistilavuus on rasvakudoksen tilavuus plus yhtä suuri tilavuus 37C Ringerin laktaattiliuosta. Kollagenaasi injektoitiin kanisteriin steriilin .22:n läpi mikronin suodatin (Millex-MP, Millipore, Cork, Irlanti). Laite, jossa oli rasvaa, puskuria ja kollagenaasia, asetettiin sitten inkuboituun ravistimeen 40 minuutiksi 38 °C:ssa nopeudella 150 rpm, katso kuva 1. Hajoamisen jälkeen lisättiin ihmisen albumiiniliuosta 2,5 %:n pitoisuuden saavuttamiseksi ja kaiken kollagenaasiaktiivisuuden lopettamiseksi. Laitetta sentrifugoitiin sitten 800 g:ssä 10 minuuttia. Supernatantti, mukaan lukien kaikki kelluvat solut ja roskat sekä vesifaasi, poistettiin käyttämällä laitteen päällä olevaa aukkoa ja heitettiin pois. Pohjassa oleva SVF-pelletti suspendoitiin uudelleen 10 ml:aan steriiliä LR:ää, johon päästiin laitteen keskiportin kautta käyttämällä 14G 5,5 tuuman selkäydinneulaa (Abbocath-T, Hospira, Sligo, Irlanti). 0,5 ml:n näyte uudelleensuspensiosta kerättiin 1,5 cm3:n Eppendorf-putkeen käytettäväksi solujen laskennassa ja määrityksessä. Uudelleensuspendoidut SVF-solut konsentroitiin 3 ml:n annokseen käyttämällä steriiliä 15 ml:n Falcon-putkea 400 g:lla 4 minuutin ajan.

SVF-laskentamenetelmä. SVF-solujen määrä ja elinkelpoisuus arvioitiin käyttämällä ADAM MC -kuvasytometriajärjestelmää (Bulldog Bio, Portsmouth, NH). ADAM MC käyttää propidiumjodidivärjäystä elävien ja elottomien tumallisten solujen laskemiseen. 100 ul:n alikvootti määritysnäytettä laimennettiin suhteessa 1:5 (1 osa näytettä 5 osaan steriiliä LR:ää) näytteen säätämiseksi ADAM MC:n toimintarajojen sisälle. Erotusvärit levitettiin ja erät ladattiin kertakäyttöiseen kasettiin, jota käytetään ADAM-laitteen kanssa. ADAM-laskentalaitteen tulokset osoittavat SVF-solujen pitoisuuden resuspendointiruiskussa ja elinkelpoisuuden prosenttiosuuden. Uudelleensuspendoinnin kokonaistilavuus ruiskussa kerrottiin pitoisuudella, jolloin saatiin uudelleen suspendoitujen yksitumaisten solujen kokonaismäärä (ei rasvasoluja, ei punasoluja eikä laskentaprosessiin otettuja fragmentteja).

Injektio ja kuvan ohjausmenetelmä. Potilas asetettiin makuuasentoon ja polven lateraalisen suprapatellaarisen alueen yli oleva alue valmistettiin tavalliseen steriiliin tapaan käyttämällä jodiprep-liuosta (1 % jodoforia), jota seurasi 70 % isopropyylialkoholiliuosta. Tätä sijaintia käytettiin, koska nivelensisäiseen tilaan oli helppo päästä ja jotta vältyttiin ruiskeelta polven rasvatyynyyn. Potilaalle ei annettu rauhoittavaa tai kipulääkettä. Etyylikloridi-paikallinen anestesia ruiskutettiin lateraaliseen polveen, kunnes ihon väri muuttui valkoiseksi. Lidokaiini-paikallinen anestesia ruiskutettiin 25 gaugen neulalla ihon ja ihonalaisten kudosten turruttamiseksi. M-Turbo Sonosite -ultraäänijärjestelmällä niveltila tunnistettiin ja polvi aspiroitiin live-ultraääniohjauksessa käyttämällä 18 gauge/1,5 tuuman neula, jos nesteitä oli saatavilla imua varten. Sitten kaikki 3 cc puskuroitua SVF-liuosta injektoitiin hitaasti nivelensisäiseen tilaan saman 18 gauge/1,5 tuumainen neula. Sen jälkeen neula poistettiin ja suoraa painetta pistoskohtaan kohdistetaan noin kymmenen (10) sekunnin ajaksi. Hemostaasi injektion jälkeen varmistettiin, ja sitten pistoskohta puhdistettiin alkoholipyyhkeellä ja peitettiin steriilillä sideaineella. Potilaalle annettiin kainalosauvat ja häntä pyydettiin olemaan painoton injektoidun polven päällä kahden (2) päivän ajan. Potilaan annettiin taivuttaa ja taivuttaa polvea niin kauan kuin ei-painoa kantava tila säilyy.

Kivun ja liikkuvuuden arviointimenetelmät. Polvikivun arviointi tehtiin PROMIS-kipuinstrumenteilla, validoidulla kipuasteikkojärjestelmällä, joka on kehitetty NIH:n rahoituksella. PROMIS (Patient Reported Outcomes Measurement Information System) on järjestelmä, jolla mitataan potilaan ilmoittamaa terveydentilaa fyysisen, henkisen ja sosiaalisen hyvinvoinnin kannalta, mukaan lukien kolme kivun mittausta (www.nihpromis.org). PROMIS Pain Intensity instrumentti (3a) arvioi kuinka paljon henkilö sattuu. PROMIS Pain Behavior -instrumentti (pankki 1.0) mittaa käyttäytymistä, joka osoittaa muille, että henkilö kokee kipua. PROMIS Pain Interference -instrumentti (Pankki 1.0) mittaa kivun seurauksia elämän oleellisille osa-alueille. Potilaan vasteet muunnetaan numeerisiksi arvoiksi validoidulla asteikolla. Vastaukset jokaiseen kysymykseen kipuinstrumentissa vaihtelevat 1-5 (1 = ei ollenkaan, 2 = vähän, 3 = jonkin verran, 4 = melko vähän, 5 = erittäin paljon), ja ne lasketaan yhteen kysymysten lukumäärästä pankissa luodaksesi raakapisteet. Raaka pistemäärä muunnetaan standardoiduksi pistemääräksi käyttämällä iteratiivista vastemenetelmää, jonka keskiarvo on 50 ja SD 10, joka perustuu suureen otokseen Yhdysvaltojen yleisestä väestöstä. Validoidut PROMIS-kipuasteikot tarjoavat intervallitietoja ja mahdollistavat keskiarvon ja SD:n laskemisen sekä merkitsevien t-testien käytön. Tiedot tallennettiin ennen leikkausta (aika 0) ja seurantapisteissä 2 viikon, 4 viikon, 6 viikon ja 12 viikon kohdalla.

Lisäksi potilaita pyydettiin vastaamaan kipua ja liikkuvuutta koskevaan kyselyyn yhdellä kysymyksellä kipua ja yhdellä kysymyksellä liikkuvuudesta. Kyselylomakkeessa potilasta pyydettiin vertaamaan kivun ja liikkuvuuden lisääntymistä/vähenemistä ennen leikkausta ± 1-5 asteikolla, katso kuva 2. Tällä asteikolla negatiiviset luvut vastaavat kivun/liikkuvuuden vähenemistä ja positiiviset luvut lisääntymistä. kipu/liikkuvuus. Tämä kyselylomake tarjoaa järjestystiedot ja mahdollistaa mediaanin ja merkitsevyyden laskemisen käyttämällä Wilcoxon Ranked Sums ei-parametrista testausta.