Bruk av autolog fettavledet stromal vaskulær fraksjon for å behandle artrose i kneet

Metoder:

Adipose Harvest. Ved bruk av ingen oral eller parenteral sedasjon ble standard fukteoppløsning (1 liter Lactated Ringer's, 50 milligram 1% lidokain og 1 cc 1:1000 adrenalin) infundert gjennom små snitt laget med spissen av et #11 skalpellblad i magen eller flanke ved hjelp av en standard flerhullsinfusjonskanyle. En super-våt pluss-teknikk (2 volumer fukteoppløsning til 1 volum foreslått fettaspirat) ble brukt for å infundere oppløsningen i de dype og overfladiske fettrommene. Tjue minutter ble tillatt for maksimal vasokonstriktiv effekt av adrenalin. Fett ble høstet ved bruk av standard Suctioned-Assisted Liposuction (SAL) metode med en 3 mm kanyle ved ca. 0,5 - 0,7 atmosfære vakuum, aspirering av ca. 200-300 cc lipoaspirat inn i en steril vevsbehandlingsbeholder (GID SVF-1, Lousiville, CO) for hvert kne som skal behandles.

Fettbehandlingsmetode. Lipoapirat ble høstet og behandlet hele veien til generering av SVF i ​​en enkelt GID SVF-1 steril engangsenhet. GID SVF-1-enheten inneholder vaskemekanismen, nettingfilteret og sentrifugekapasiteten i samme enhet. Etter høsting ble lipoaspiratet vasket tre ganger med 37C Lactated Ringer's Solution med 20 mg Cipro og 5000 enheter heparin per liter, og væskedelen ble fjernet ved bruk av mesh-filtersystemet, og etterlot tørt fett inne i beholderen. Beholderen ble veid for å bestemme mengden tørt fett som var tilgjengelig for videre behandling. Det vaskede fettet ble disaggregert ved bruk av type I kollagenase (Worthington, Lakewood, NJ) i en konsentrasjon på 200 CDU/ml totalt katalytisk volum der totalt katalytisk volum er volumet av fettvevet pluss et likt volum av 37C Lactated Ringer's Solution. Kollagenasen ble injisert inn i beholderen gjennom en steril .22 mikron filter (Millex-MP, Millipore, Cork, Irland). Enheten med fett, buffer og kollagenase ble deretter plassert i en inkubert rister i 40 minutter ved 38C ved 150 RPM, se figur 1. Etter disaggregering ble human albuminløsning tilsatt for å oppnå en konsentrasjon på 2,5 % og stoppe eventuell ytterligere kollagenaseaktivitet. Anordningen ble deretter sentrifugert ved 800 g i 10 minutter. Supernatanten, inkludert alle flytende celler og rusk og den vandige fasen, ble fjernet ved å bruke en port på toppen av anordningen og kastet. SVF-pelleten i bunnen ble resuspendert i 10 ml steril LR som ble åpnet via den sentrale porten på enheten ved bruk av en 14G 5,5 tommers spinalnål (Abbocath-T, Hospira, Sligo, Irland). En prøve på 0,5 ml av resuspensjonen ble samlet i et 1,5 cc Eppendorf-rør for å brukes til celletelling og analyse. De resuspenderte SVF-cellene ble konsentrert til en 3 ml dose ved bruk av et sterilt 15 ml Falcon-rør ved 400 g i 4 minutter.

SVF tellemetode. SVF-celletall og levedyktighet ble vurdert ved bruk av et ADAM MC bildecytometrisystem (Bulldog Bio, Portsmouth, NH). ADAM MC bruker propidiumjodidfarging for å telle levedyktige og ikke-levedyktige kjerneholdige celler. En 100 µL alikvot av analyseprøven ble fortynnet med et forhold på 1:5 (1 del prøve til 5 deler sterilt LR) for å justere prøven innenfor driftsgrensene til ADAM MC. Differensialflekkene ble påført og alikvoter satt inn i engangskassetten som brukes med ADAM-enheten. Resultatene fra ADAM-telleenheten gir konsentrasjonen av SVF-celler i resuspensjonssprøyten og prosentvis levedyktighet. Det totale volumet av resuspensjonen i sprøyten ble multiplisert med konsentrasjonen for å gi det totale antallet resuspenderte mononukleerte celler (ingen fettceller, ingen RBC og ingen fragmenter inkludert i telleprosessen).

Injeksjons- og bildeveiledningsmetode. Pasienten ble plassert i ryggleie og området over den laterale suprapatellære regionen av kneet ble preparert på vanlig steril måte ved bruk av en jodprep-løsning (1 % jodofor) etterfulgt av en 70 % isopropylalkoholløsning. Denne plasseringen ble brukt på grunn av enkel tilgang til det intraartikulære rommet og for å unngå injeksjon i fettputen på kneet. Ingen sedasjon eller smertestillende medisiner ble gitt til pasienten. Et etylklorid lokalbedøvelse ble sprayet på sidekneet inntil hudfargen endret seg til hvit. Lidokain lokalbedøvelse ble injisert med en 25 gauge nål for å bedøve huden og subkutant vev. Ved å bruke et M-Turbo Sonosite ultralydsystem ble leddrommet identifisert, og under direkte ultralydveiledning ble kneet aspirert med en 18 gauge/1,5 tomme nål, hvis væsker var tilgjengelige for aspirasjon. Deretter ble alle de 3 cm3 bufret løsning av SVF sakte injisert inn i det intraartikulære rommet gjennom den samme 18 gauge/1,5 tomme nål. Nålen ble deretter fjernet og direkte trykk over injeksjonsstedet vil plasseres i omtrent ti (10) sekunder. Hemostase etter injeksjon ble bekreftet, og deretter ble injeksjonsstedet rengjort med en spritserviett og dekket med et sterilt plaster. Pasienten ble gitt krykker og bedt om å være ikke-vektbærende på det injiserte kneet i to (2) dager. Pasienten fikk bøye og bøye kneet så lenge ikke-vektbærende tilstand opprettholdes.

Smerte- og mobilitetsvurderingsmetoder. Vurdering av knesmerter ble gjort ved å bruke PROMIS smerteinstrumenter, et validert smerteskalasystem utviklet under finansiering av NIH. PROMIS (Patient Reported Outcomes Measurement Information System) er et system for målinger av pasientrapportert helsestatus for fysisk, mentalt og sosialt velvære, inkludert tre målinger av smerte (www.nihpromis.org). PROMIS Pain Intensity-instrumentet (3a) vurderer hvor vondt en person har. PROMIS Pain Behavior-instrumentet (Bank 1.0) måler atferd som indikerer for andre at en person opplever smerte. PROMIS Pain Interference-instrumentet (Bank 1.0) måler konsekvensene av smerte på relevante sider av ens liv. Pasientsvar konverteres til numeriske verdier i en validert skala. Svar på hvert spørsmål i et smerteinstrument varierer fra 1 til 5 (1=ikke i det hele tatt, 2=litt, 3=noe, 4=ganske mye, 5=veldig mye), og summeres over antall spørsmål i banken for å lage en råscore. Råpoengsummen konverteres til en standardisert poengsum ved bruk av en iterativ responsmetode med et gjennomsnitt på 50 og SD på 10, basert på et stort utvalg av den generelle befolkningen i USA. De validerte PROMIS smerteskalaene gir intervalldata og tillater beregning av gjennomsnitt og SD, og ​​bruk av t-tester av signifikans. Data ble registrert preoperativt (tid 0), og ved oppfølgingspunkter etter 2 uker, 4 uker, 6 uker og 12 uker.

I tillegg ble pasientene bedt om å svare på et smerte- og mobilitetsspørreskjema med ett spørsmål om smerte og ett spørsmål om mobilitet. Spørreskjemaet ba pasienten om å sammenligne deres økning/reduksjon i smerte og mobilitet i forhold til før operasjonen, ved å bruke en ± 1-5 skala, se figur 2. På denne skalaen tilsvarer negative tall avtagende smerte/mobilitet, og positive tall tilsvarer økende smerte/mobilitet. Dette spørreskjemaet gir ordinære data og tillater beregning av median og signifikans ved å bruke Wilcoxon-rangerte sums ikke-parametrisk testing.