Utilisation de la fraction vasculaire stromale dérivée de la graisse autologue pour traiter l'arthrose du genou

Méthodes :

Récolte adipeuse. Sans sédation orale ou parentérale, une solution de mouillage standard (1 litre de Ringer lactate, 50 milligrammes de lidocaïne à 1% et 1 cc d'épinéphrine à 1: 1000) a été infusée à travers de petites incisions créées avec la pointe d'une lame de scalpel # 11 dans l'abdomen ou le flanc à l'aide d'une canule de perfusion multi-trous standard. Une technique super-humide plus (2 volumes de solution de mouillage pour 1 volume d'aspiration de graisse proposée) a été utilisée pour infuser la solution dans les compartiments graisseux profonds et superficiels. Vingt minutes ont été accordées pour un effet vasoconstricteur maximal de l'épinéphrine. La graisse a été récoltée en utilisant la méthode standard de liposuccion assistée par aspiration (SAL) avec une canule de 3 mm à environ 0,5 à 0,7 atmosphère de vide, en aspirant environ 200 à 300 cc de lipoaspirat dans un récipient de traitement de tissu stérile (GID SVF-1, Lousiville, CO) pour chaque genou à traiter.

Méthode de traitement adipeux. Le lipoaspirate a été récolté et traité jusqu'à la génération du SVF dans un seul dispositif jetable stérile GID SVF-1. L'unité GID SVF-1 contient le mécanisme de lavage, le filtre à mailles et la capacité de centrifugation dans le même appareil. Après la récolte, le lipoaspirat a été lavé trois fois avec une solution de Ringer lactate 37C avec 20 mg de Cipro et 5 000 unités d'héparine par litre et la partie liquide a été retirée à l'aide du système de filtre à mailles, laissant de la graisse sèche à l'intérieur de la cartouche. La cartouche a été pesée pour déterminer la quantité de graisse sèche disponible pour un traitement ultérieur. Le tissu adipeux lavé a été désagrégé à l'aide de collagénase de type I (Worthington, Lakewood, NJ) à une concentration de 200 CDU/ml de volume catalytique total où le volume catalytique total est le volume du tissu adipeux plus un volume égal de solution de Ringer lactate 37C. La collagénase a été injectée dans la cartouche à travers un stérilet .22 filtre micron (Millex-MP, Millipore, Cork, Irlande). Le dispositif avec adipeux, tampon et collagénase a ensuite été placé dans un agitateur incubé pendant 40 minutes à 38 °C à 150 tr/min, voir figure 1. Après désagrégation, une solution d'albumine humaine a été ajoutée pour atteindre une concentration de 2,5 % et arrêter toute autre activité de collagénase. Le dispositif a ensuite été centrifugé à 800 g pendant 10 minutes. Le surnageant, y compris toutes les cellules flottantes et les débris et la phase aqueuse, a été retiré à l'aide d'un port sur le dessus du dispositif et jeté. Le culot SVF au fond a été remis en suspension dans 10 ml de LR stérile accessible via le port central de l'appareil à l'aide d'une aiguille spinale 14G de 5,5 pouces (Abbocath-T, Hospira, Sligo, Irlande). Un échantillon de 0,5 ml de la remise en suspension a été recueilli dans un tube Eppendorf de 1,5 cc à utiliser pour le comptage et le dosage des cellules. Les cellules SVF remises en suspension ont été concentrées en une dose de 3 ml en utilisant un tube Falcon stérile de 15 ml à 400 g pendant 4 minutes.

Méthode de comptage SVF. Le nombre et la viabilité des cellules SVF ont été évalués à l'aide d'un système de cytométrie d'image ADAM MC (Bulldog Bio, Portsmouth, NH). L'ADAM MC utilise la coloration à l'iodure de propidium pour compter les cellules nucléées viables et non viables. Une aliquote de 100 µL de l'échantillon de test a été diluée avec un rapport de 1:5 (1 partie d'échantillon pour 5 parties de LR stérile) pour ajuster l'échantillon dans les limites de fonctionnement de l'ADAM MC. Les colorations différentielles ont été appliquées et des aliquotes chargées dans la cassette jetable qui est utilisée avec le dispositif ADAM. Les résultats du dispositif de comptage ADAM fournissent la concentration de cellules SVF dans la seringue de remise en suspension et le pourcentage de viabilité. Le volume total de la remise en suspension dans la seringue a été multiplié par la concentration pour donner le nombre total de cellules mononucléées remises en suspension (pas de cellules adipeuses, pas de globules rouges et pas de fragments inclus dans le processus de comptage).

Méthode d'injection et de guidage d'image. Le patient a été placé en décubitus dorsal et la zone située au-dessus de la région suprapatellaire latérale du genou a été préparée de la manière stérile habituelle en utilisant une solution de préparation d'iode (1 % d'iodophore) suivie d'une solution d'alcool isopropylique à 70 %. Cet emplacement a été utilisé en raison de la facilité d'accès à l'espace intra-articulaire et pour éviter l'injection dans le coussinet adipeux du genou. Aucun sédatif ni analgésique n'a été administré au patient. Un anesthésique topique au chlorure d'éthyle a été pulvérisé sur le côté latéral du genou jusqu'à ce que la couleur de la peau vire au blanc. Un anesthésique local à la lidocaïne a été injecté à l'aide d'une aiguille de calibre 25 pour engourdir la peau et les tissus sous-cutanés. À l'aide d'un système d'échographie M-Turbo Sonosite, l'espace articulaire a été identifié et sous guidage échographique en direct, le genou a été aspiré à l'aide d'un calibre 18/1,5. aiguille de pouce, si des fluides étaient disponibles pour l'aspiration. Ensuite, tous les 3 cc de solution tamponnée de SVF ont été lentement injectés dans l'espace intra-articulaire à travers le même calibre 18/1,5 aiguille de pouce. L'aiguille a ensuite été retirée et une pression directe sur le site d'injection sera appliquée pendant environ dix (10) secondes. L'hémostase après injection a été confirmée, puis le site d'injection a été nettoyé avec une lingette imbibée d'alcool et recouvert d'un pansement stérile. Le patient a reçu des béquilles et on lui a demandé de ne pas porter de poids sur le genou injecté pendant deux (2) jours. Le patient a été autorisé à plier et à fléchir le genou tant que la condition de non-portance est maintenue.

Méthodes d'évaluation de la douleur et de la mobilité. L'évaluation de la douleur au genou a été effectuée à l'aide des instruments de douleur PROMIS, un système d'échelle de douleur validé développé sous financement par le NIH. PROMIS (Patient Reported Outcomes Measurement Information System) est un système de mesures de l'état de santé déclaré par les patients pour le bien-être physique, mental et social, y compris trois mesures de la douleur (www.nihpromis.org). L'instrument PROMIS Pain Intensity (3a) évalue l'intensité de la douleur d'une personne. L'instrument PROMIS Pain Behavior (Bank 1.0) mesure les comportements qui indiquent aux autres qu'une personne éprouve de la douleur. L'instrument PROMIS Pain Interference (Bank 1.0) mesure les conséquences de la douleur sur les aspects pertinents de la vie. Les réponses des patients sont converties en valeurs numériques dans une échelle validée. Les réponses à chaque question dans un instrument de douleur vont de 1 à 5 (1=pas du tout, 2=un peu, 3=quelque peu, 4=assez, 5=beaucoup), et sont additionnées sur le nombre de questions dans la banque pour créer un score brut. Le score brut est converti en un score standardisé à l'aide d'une méthode de réponse itérative avec une moyenne de 50 et un écart-type de 10, basé sur un large échantillon de la population générale des États-Unis. Les échelles de douleur PROMIS validées fournissent des données d'intervalle et permettent le calcul de la moyenne et de l'écart-type, ainsi que l'utilisation de tests t de signification. Les données ont été enregistrées en préopératoire (temps 0) et aux points de suivi à 2 semaines, 4 semaines, 6 semaines et 12 semaines.

De plus, les patients ont été invités à répondre à un questionnaire sur la douleur et la mobilité avec une question sur la douleur et une question sur la mobilité. Le questionnaire demandait au patient de comparer son augmentation/diminution de la douleur et de la mobilité par rapport à avant la chirurgie, en utilisant une échelle de ± 1-5, voir Figure 2. Sur cette échelle, les nombres négatifs correspondent à une diminution de la douleur/mobilité, et les nombres positifs correspondent à une augmentation de la douleur/mobilité. douleur/mobilité. Ce questionnaire fournit des données ordinales et permet de calculer la médiane et la signification à l'aide des tests non paramétriques des sommes classées de Wilcoxon.