무릎 골관절염 치료를 위한 자가 지방 유래 간질 혈관 분획의 사용

행동 양식:

지방 수확. 경구 또는 비경구 진정제를 사용하지 않고 표준 습윤 용액(1리터 Lactated Ringer's, 50mg의 1% 리도카인 및 1cc의 1:1000 에피네프린)을 복부의 #11 메스 날 끝으로 만든 작은 절개를 통해 주입했습니다. 또는 표준 다중 구멍 주입 캐뉼라를 사용하여 측면. 슈퍼 습식 플러스 기술(제안된 지방 흡인액 1부피에 습윤 용액 2부피)을 사용하여 깊고 표재성 지방 구획에 용액을 주입했습니다. 에피네프린의 최대 혈관수축 효과를 위해 20분이 허용되었습니다. 지방은 약 0.5 - 0.7 기압의 진공에서 3mm 캐뉼라가 있는 표준 흡인 보조 지방흡입(SAL) 방법을 사용하여 약 200-300cc의 지방 흡입을 멸균 조직 처리 용기(GID SVF-1, Lousiville, CO) 치료할 각 무릎에 대해.

지방 처리 방법. Lipoaspirate는 단일 GID SVF-1 멸균 일회용 장치 내에서 SVF 생성까지 수확 및 처리되었습니다. GID SVF-1 장치에는 동일한 장치에 세척 메커니즘, 메쉬 필터 및 원심분리기 기능이 포함되어 있습니다. 수확 후 지방흡입물을 리터당 20 mg 시프로 및 5,000 단위 헤파린이 포함된 37C Lactated Ringer's Solution으로 3회 세척하고 유체 부분을 메쉬 필터 시스템을 사용하여 제거하여 캐니스터 내부에 건조 지방을 남겼습니다. 캐니스터의 무게를 측정하여 추가 처리에 사용할 수 있는 건조 지방의 양을 결정했습니다. 세척된 지방은 200 CDU/ml의 총 촉매 부피의 농도에서 유형 I 콜라게나제(Worthington, Lakewood, NJ)를 사용하여 분해되었으며, 여기서 총 촉매 부피는 지방 조직의 부피와 동일한 부피의 37C Lactated Ringer's Solution을 더한 것입니다. 콜라게나아제는 멸균된 .22 미크론 필터(Millex-MP, Millipore, Cork, Ireland). 지방, 완충액 및 콜라게나아제가 포함된 장치를 38C, 150RPM에서 40분 동안 배양된 진탕기에 넣었습니다(그림 1 참조). 분해 후 인간 알부민 용액을 첨가하여 2.5%의 농도를 달성하고 더 이상의 콜라게나제 활성을 중지했습니다. 그런 다음 장치를 800g에서 10분 동안 원심분리했습니다. 모든 부유 세포 및 찌꺼기 및 수성 상을 포함하는 상청액을 장치 상단의 포트를 사용하여 제거하고 폐기했습니다. 바닥에 있는 SVF 펠릿을 14G 5.5인치 척추 바늘(Abbocath-T, Hospira, Sligo, Ireland)을 사용하여 장치의 중앙 포트를 통해 액세스되는 멸균 LR 10ml에 재현탁했습니다. 0.5ml의 재현탁액 샘플을 1.5cc Eppendorf 튜브에 수집하여 세포 계수 및 분석에 사용했습니다. 재현탁된 SVF 세포를 멸균된 15ml Falcon 튜브를 사용하여 4분 동안 400g에서 3ml 용량으로 농축했습니다.

SVF 계산 방법. SVF 세포 수와 생존력은 ADAM MC 이미지 세포측정 시스템(Bulldog Bio, Portsmouth, NH)을 사용하여 평가되었습니다. ADAM MC는 요오드화 프로피듐 염색법을 사용하여 생존 가능 유핵 세포와 생존 불가능 유핵 세포를 계수합니다. 분석 시료의 100µL 분량을 1:5 비율(시료 1부 대 멸균 LR 5부)로 희석하여 ADAM MC의 작동 한계 내에서 시료를 조정했습니다. 차등 염색을 적용하고 분취량을 ADAM 장치와 함께 사용되는 일회용 카세트에 넣었습니다. ADAM 계수 장치의 결과는 재현탁 주사기의 SVF 세포 농도와 생존율을 제공합니다. 주사기 내 재현탁액의 총 부피에 농도를 곱하여 재현탁된 단핵 세포의 총 수를 구했습니다(지방 세포 없음, RBC 없음, 계수 과정에 포함된 단편 없음).

주입 및 이미지 유도 방법. 환자를 앙와위 자세로 눕히고 요오드 준비 용액(1% Iodophor)과 70% 이소프로필 알코올 용액을 사용하여 일반적인 멸균 방식으로 무릎의 외측 슬개골 상부 영역을 준비했습니다. 이 위치는 관절 내 공간으로의 접근이 용이하고 무릎의 지방 패드에 주사하는 것을 피하기 위해 사용되었습니다. 환자에게 진정제나 진통제는 투여하지 않았다. 에틸클로라이드 국소 마취제를 피부색이 하얗게 변할 때까지 측면 무릎에 뿌렸습니다. 리도카인 국소 마취제를 25 게이지 바늘을 사용하여 주사하여 피부와 피하 조직을 마비시켰습니다. M-Turbo Sonosite 초음파 시스템을 사용하여 관절강을 확인하고 라이브 초음파 유도 하에 18 게이지/1.5를 사용하여 무릎을 흡인했습니다. 흡인에 유체가 있는 경우 인치 바늘. 그런 다음 SVF 완충액 3cc를 모두 동일한 18 게이지/1.5를 통해 천천히 관절 내 공간으로 주입했습니다. 인치 바늘. 그런 다음 바늘을 제거하고 주사 부위에 직접 압력을 약 10초 동안 가합니다. 주사 후 지혈을 확인한 후 주사 부위를 알코올 솜으로 닦고 멸균 반창고로 덮었다. 환자에게 목발을 짚고 2일 동안 주사한 무릎에 체중을 싣지 않도록 요청했습니다. 비체중 부하 상태가 유지되는 한 환자는 무릎을 구부리고 구부릴 수 있습니다.

통증 및 가동성 평가 방법. 무릎 통증 평가는 NIH의 자금 지원 하에 개발된 검증된 통증 척도 시스템인 PROMIS 통증 기기를 사용하여 수행되었습니다. PROMIS(Patient Reported Outcomes Measurement Information System)는 환자가 보고한 신체적, 정신적, 사회적 안녕에 대한 건강 상태를 측정하기 위한 시스템으로 통증의 세 가지 측정을 포함합니다(www.nihpromis.org). PROMIS 통증 강도 도구(3a)는 사람이 얼마나 아픈지 평가합니다. PROMIS 통증 행동 도구(Bank 1.0)는 개인이 고통을 겪고 있음을 다른 사람에게 나타내는 행동을 측정합니다. PROMIS Pain Interference 도구(Bank 1.0)는 삶의 관련 측면에 대한 통증의 결과를 측정합니다. 환자 응답은 검증된 척도의 숫자 값으로 변환됩니다. 통증 도구의 각 질문에 대한 응답 범위는 1에서 5까지이며(1=전혀 아님, 2=약간, 3=다소, 4=아주 많이, 5=매우 많이), 질문 수에 따라 합산됩니다. 은행에서 원시 점수를 생성합니다. 원시 점수는 미국 일반 인구의 대규모 표본을 기반으로 평균 50, SD 10의 반복 응답 방법을 사용하여 표준화된 점수로 변환됩니다. 검증된 PROMIS 통증 척도는 간격 데이터를 제공하고 평균 및 표준 편차를 계산하고 유의성 t-검정을 사용할 수 있습니다. 데이터는 수술 전(시간 0)과 2주, 4주, 6주 및 12주의 추적 시점에 기록되었습니다.

또한 환자는 통증에 대한 질문 1개와 이동성에 대한 질문 1개로 통증 및 이동성 설문지에 응답하도록 요청받았습니다. 설문지는 환자에게 ± 1-5 척도를 사용하여 수술 전과 비교하여 통증 및 이동성의 증가/감소를 비교하도록 요청했습니다(그림 2 참조). 이 척도에서 음수는 통증/이동성 감소에 해당하고 양수는 증가에 해당합니다. 통증/가동성. 이 설문지는 서수 데이터를 제공하며 Wilcoxon Ranked Sums 비모수 테스트를 사용하여 중앙값과 유의성을 계산할 수 있습니다.