Uso de fracción vascular estromal derivada de tejido adiposo autólogo para tratar la osteoartritis de rodilla

Métodos:

Cosecha Adiposa. Sin sedación oral o parenteral, se infundió una solución humectante estándar (1 litro de lactato de Ringer, 50 miligramos de lidocaína al 1 % y 1 cc de epinefrina 1:1000) a través de pequeñas incisiones creadas con la punta de una hoja de bisturí n.º 11 en el abdomen. o el flanco usando una cánula de infusión estándar de orificios múltiples. Se utilizó una técnica superhúmeda plus (2 volúmenes de solución humectante por 1 volumen de aspirado de grasa propuesto) para infundir la solución en los compartimentos de grasa profundos y superficiales. Se permitieron veinte minutos para el máximo efecto vasoconstrictor de la epinefrina. La grasa se recolectó utilizando el método estándar de liposucción asistida por succión (SAL) con una cánula de 3 mm a aproximadamente 0,5 - 0,7 atmósferas de vacío, aspirando aproximadamente 200-300 cc de lipoaspirado en un recipiente de procesamiento de tejido estéril (GID SVF-1, Lousiville, CO) para cada rodilla a tratar.

Método de procesamiento adiposo. El lipoaspirado se recolectó y procesó hasta la generación del SVF dentro de un solo dispositivo desechable estéril GID SVF-1. La unidad GID SVF-1 contiene el mecanismo de lavado, el filtro de malla y la capacidad de centrifugado en el mismo dispositivo. Después de la cosecha, el lipoaspirado se lavó tres veces con solución de Ringer lactato 37C con 20 mg de Cipro y 5000 unidades de heparina por litro y la porción líquida se eliminó usando el sistema de filtro de malla, dejando tejido adiposo seco dentro del recipiente. Se pesó el recipiente para determinar la cantidad de tejido adiposo seco disponible para su posterior procesamiento. El tejido adiposo lavado se desagregó utilizando colagenasa tipo I (Worthington, Lakewood, NJ) a una concentración de 200 CDU/ml de volumen catalítico total, donde el volumen catalítico total es el volumen del tejido adiposo más un volumen igual de solución de Ringer lactato 37C. La colagenasa se inyectó en el recipiente a través de un .22 estéril filtro de micras (Millex-MP, Millipore, Cork, Irlanda). Luego, el dispositivo con tejido adiposo, tampón y colagenasa se colocó en un agitador incubado durante 40 minutos a 38 °C a 150 RPM, consulte la Figura 1. Después de la disgregación, se añadió solución de albúmina humana para alcanzar una concentración del 2,5% y detener cualquier actividad de colagenasa adicional. A continuación, el dispositivo se centrifugó a 800 g durante 10 minutos. El sobrenadante, incluidas todas las células flotantes y los desechos y la fase acuosa, se eliminó utilizando un puerto en la parte superior del dispositivo y se descartó. El sedimento de SVF en la parte inferior se resuspendió en 10 ml de LR estéril al que se accedió a través del puerto central del dispositivo utilizando una aguja espinal de 14G de 5,5 pulgadas (Abbocath-T, Hospira, Sligo, Irlanda). Se recogió una muestra de 0,5 ml de la resuspensión en un tubo Eppendorf de 1,5 cc para utilizarla para el recuento y ensayo de células. Las células SVF resuspendidas se concentraron en una dosis de 3 ml usando un tubo Falcon estéril de 15 ml a 400 g durante 4 minutos.

Método de conteo SVF. El recuento de células SVF y la viabilidad se evaluaron utilizando un sistema de citometría de imágenes ADAM MC (Bulldog Bio, Portsmouth, NH). El ADAM MC utiliza la tinción con yoduro de propidio para contar las células nucleadas viables y no viables. Se diluyó una alícuota de 100 µl de la muestra de ensayo con una proporción de 1:5 (1 parte de muestra por 5 partes de LR estéril) para ajustar la muestra dentro de los límites operativos del ADAM MC. Se aplicaron las tinciones diferenciales y se cargaron alícuotas en el casete desechable que se utiliza con el dispositivo ADAM. Los resultados del dispositivo de recuento ADAM proporcionan la concentración de células SVF en la jeringa de resuspensión y el porcentaje de viabilidad. El volumen total de la resuspensión en la jeringa se multiplicó por la concentración para dar el número total de células mononucleadas resuspendidas (sin células adiposas, sin glóbulos rojos y sin fragmentos incluidos en el proceso de recuento).

Método de inyección y guía de imagen. Se colocó al paciente en decúbito supino y se preparó el área sobre la región suprarrotuliana lateral de la rodilla de la manera estéril habitual utilizando una solución de preparación de yodo (yodóforo al 1 %) seguida de una solución de alcohol isopropílico al 70 %. Se utilizó esta ubicación debido a la facilidad de acceso al espacio intraarticular y para evitar la inyección en la almohadilla grasa de la rodilla. No se administraron sedantes ni analgésicos al paciente. Se roció un anestésico tópico de cloruro de etilo en el lateral de la rodilla hasta que el color de la piel cambió a blanco. El anestésico local de lidocaína se inyectó con una aguja de calibre 25 para adormecer la piel y los tejidos subcutáneos. Usando un sistema de ultrasonido M-Turbo Sonosite, se identificó el espacio articular y, bajo la guía de ultrasonido en vivo, se aspiró la rodilla usando un calibre 18/1.5 aguja de una pulgada, si había líquidos disponibles para la aspiración. Luego, los 3 cc de solución tamponada de SVF se inyectaron lentamente en el espacio intraarticular a través del mismo calibre 18/1,5 aguja de pulgada. Luego se retiró la aguja y se colocó presión directa sobre el lugar de la inyección durante aproximadamente diez (10) segundos. Se confirmó la hemostasia después de la inyección y luego se limpió el lugar de la inyección con una toallita con alcohol y se cubrió con una tirita estéril. Al paciente se le dieron muletas y se le pidió que no cargara peso sobre la rodilla inyectada durante dos (2) días. Se permitió al paciente doblar y flexionar la rodilla siempre que se mantuviera la condición de no carga de peso.

Métodos de evaluación del dolor y la movilidad. La evaluación del dolor de rodilla se realizó utilizando los instrumentos de dolor PROMIS, un sistema de escala de dolor validado desarrollado con fondos del NIH. PROMIS (Sistema de información de medición de resultados informados por el paciente) es un sistema para medir el estado de salud informado por el paciente para el bienestar físico, mental y social, incluidas tres medidas de dolor (www.nihpromis.org). El instrumento PROMIS Pain Intensity (3a) evalúa cuánto duele una persona. El instrumento PROMIS Pain Behavior (Banco 1.0) mide los comportamientos que indican a los demás que una persona está experimentando dolor. El instrumento PROMIS Pain Interference (Banco 1.0) mide las consecuencias del dolor en aspectos relevantes de la vida. Las respuestas de los pacientes se convierten en valores numéricos en una escala validada. Las respuestas a cada pregunta en un instrumento de dolor varían de 1 a 5 (1 = nada, 2 = un poco, 3 = algo, 4 = bastante, 5 = mucho), y se suman sobre el número de preguntas. en el banco para crear una puntuación en bruto. La puntuación bruta se convierte en una puntuación estandarizada utilizando un método de respuesta iterativo con una media de 50 y SD de 10, basado en una muestra grande de la población general de los Estados Unidos. Las escalas de dolor PROMIS validadas proporcionan datos de intervalo y permiten el cálculo de la media y la DE, y el uso de pruebas t de significación. Los datos se registraron antes de la operación (tiempo 0) y en los puntos de seguimiento a las 2 semanas, 4 semanas, 6 semanas y 12 semanas.

Además, se pidió a los pacientes que respondieran a un cuestionario sobre dolor y movilidad con una pregunta sobre dolor y otra sobre movilidad. El cuestionario le pedía al paciente que comparara su aumento/disminución del dolor y la movilidad en relación con antes de la cirugía, utilizando una escala de ± 1-5, véase la Figura 2. En esta escala, los números negativos corresponden a una disminución del dolor/movilidad, y los números positivos corresponden a un aumento de la movilidad. dolor/movilidad. Este cuestionario proporciona datos ordinales y permite el cálculo de la mediana y la significación utilizando la prueba no paramétrica Wilcoxon Ranked Sums.