Использование аутологичной жировой стромальной сосудистой фракции для лечения остеоартрита коленного сустава

Методы:

Жировой урожай. Без пероральной или парентеральной седации стандартный смачивающий раствор (1 литр лактата Рингера, 50 миллиграммов 1% лидокаина и 1 мл адреналина 1:1000) вводили через небольшие разрезы, сделанные кончиком лезвия скальпеля № 11 в брюшной полости. или бок, используя стандартную инфузионную канюлю с несколькими отверстиями. Техника супервлажного плюс (2 объема смачивающего раствора на 1 объем предлагаемого аспирата жира) использовалась для инфузии раствора в глубокие и поверхностные жировые компартменты. Двадцать минут давали для максимального сосудосуживающего действия адреналина. Жир собирали с использованием стандартного метода липосакции с отсасыванием (SAL) с помощью 3-миллиметровой канюли при вакууме примерно 0,5–0,7 атмосферы, аспирируя примерно 200–300 мл липоаспирата в стерильный контейнер для обработки тканей (GID SVF-1, Лузивилль, США). CO) для каждого колена, подлежащего лечению.

Метод жировой обработки. Липоаспират собирали и обрабатывали вплоть до создания СВФ в одном стерильном одноразовом устройстве GID SVF-1. Установка ГИД СВФ-1 содержит моечный механизм, сетчатый фильтр и возможность центрифугирования в одном устройстве. После сбора липоаспират трижды промывали раствором лактата Рингера 37С с 20 мг ципро и 5000 единиц гепарина на литр, и жидкую часть удаляли с использованием системы сетчатых фильтров, оставляя сухой жир внутри контейнера. Канистру взвешивали для определения количества сухого жира, доступного для дальнейшей обработки. Промытый жир дезагрегировали с использованием коллагеназы I типа (Worthington, Lakewood, NJ) в концентрации 200 CDU/мл общего каталитического объема, где общий каталитический объем представляет собой объем жировой ткани плюс равный объем раствора Рингера с лактатом 37C. Коллагеназу вводили в канистру через стерильный шприц .22. микронный фильтр (Millex-MP, Millipore, Cork, Ирландия). Затем устройство с жировой тканью, буфером и коллагеназой помещали в шейкер-инкубатор на 40 минут при 38°C при 150 об/мин, см. рисунок 1. После дезагрегации добавляли раствор человеческого альбумина для достижения концентрации 2,5% и прекращения дальнейшей активности коллагеназы. Затем устройство центрифугировали при 800 g в течение 10 минут. Супернатант, включая все плавающие клетки и дебрис, а также водную фазу, удаляли через отверстие в верхней части устройства и выбрасывали. Осадок SVF на дне ресуспендировали в 10 мл стерильного LR, доступ к которому осуществлялся через центральный порт устройства с помощью спинальной иглы 14G 5,5 дюймов (Abbocath-T, Hospira, Sligo, Ирландия). Образец 0,5 мл ресуспензии собирали в пробирку Эппендорфа объемом 1,5 см3 и использовали для подсчета и анализа клеток. Ресуспендированные клетки SVF концентрировали в дозе 3 мл с использованием стерильной пробирки Falcon на 15 мл при 400 g в течение 4 минут.

Метод подсчета СВФ. Количество клеток SVF и их жизнеспособность оценивали с использованием системы цитометрии изображений ADAM MC (Bulldog Bio, Portsmouth, NH). ADAM MC использует окрашивание йодидом пропидия для подсчета жизнеспособных и нежизнеспособных ядерных клеток. Аликвоту 100 мкл образца для анализа разводили в соотношении 1:5 (1 часть образца на 5 частей стерильного LR), чтобы привести образец в рабочие пределы ADAM MC. Были нанесены дифференциальные красители, и аликвоты были загружены в одноразовую кассету, которая используется с устройством ADAM. Результаты счетчика ADAM показывают концентрацию клеток SVF в шприце для ресуспендирования и процент жизнеспособности. Общий объем ресуспензии в шприце умножали на концентрацию, чтобы получить общее количество ресуспендированных мононуклеарных клеток (без жировых клеток, без эритроцитов и без фрагментов, включенных в процесс подсчета).

Инъекционный и визуальный метод наведения. Пациента укладывали на спину, и область над латеральной надколенниковой областью колена препарировали обычным стерильным способом с использованием подготовительного раствора йода (1% йодофора), а затем 70% раствора изопропилового спирта. Это расположение было использовано из-за легкости доступа во внутрисуставное пространство и во избежание инъекции в жировую ткань колена. Седативные и обезболивающие препараты больному не вводили. Местный анестетик на основе этилхлорида распыляли на латеральную часть колена до тех пор, пока цвет кожи не изменился на белый. С помощью иглы калибра 25 вводили местный анестетик лидокаин для обезболивания кожи и подкожных тканей. С помощью ультразвуковой системы M-Turbo Sonosite была идентифицирована суставная щель, и под контролем ультразвука в реальном времени из коленного сустава была произведена аспирация с использованием 18 калибра/1,5. дюймовая игла, если жидкости были доступны для аспирации. Затем все 3 мл забуференного раствора СВФ медленно вводили во внутрисуставное пространство через тот же 18 калибр/1,5. дюймовая игла. Затем иглу удаляют и на место инъекции оказывают прямое давление примерно на десять (10) секунд. Гемостаз после инъекции подтверждали, после чего место инъекции очищали спиртовой салфеткой и заклеивали стерильным лейкопластырем. Пациенту дали костыли и попросили не нагружать инъецированное колено в течение двух (2) дней. Пациенту разрешалось сгибать и сгибать колено до тех пор, пока сохраняется состояние без нагрузки.

Методы оценки боли и подвижности. Оценка боли в колене проводилась с использованием инструментов PROMIS для оценки боли, утвержденной системы шкалы боли, разработанной при финансовой поддержке Национального института здравоохранения. PROMIS (Информационная система измерения исходов, сообщаемых пациентами) представляет собой систему для измерения состояния здоровья, сообщаемого пациентами, для физического, психического и социального благополучия, включая три измерения боли (www.nihpromis.org). Инструмент PROMIS Pain Intensity (3a) оценивает, насколько человеку больно. Инструмент PROMIS Pain Behavior (Bank 1.0) измеряет поведение, которое указывает другим на то, что человек испытывает боль. Инструмент PROMIS Pain Interference (Банк 1.0) измеряет последствия боли в соответствующих аспектах жизни. Ответы пациентов преобразуются в числовые значения по утвержденной шкале. Ответы на каждый вопрос в опроснике по оценке боли варьируются от 1 до 5 (1=совсем нет, 2=немного, 3=немного, 4=совсем немного, 5=очень сильно) и суммируются по количеству вопросов. в банке, чтобы создать необработанный счет. Необработанная оценка преобразуется в стандартизированную оценку с использованием метода итеративного ответа со средним значением 50 и стандартным отклонением 10 на основе большой выборки населения США в целом. Утвержденные шкалы боли PROMIS предоставляют данные об интервалах и позволяют вычислять среднее значение и стандартное отклонение, а также использовать t-тесты значимости. Данные записывались до операции (время 0) и в контрольных точках через 2 недели, 4 недели, 6 недель и 12 недель.

Кроме того, пациентов просили ответить на вопросник о боли и подвижности, задав один вопрос о боли и один вопрос о подвижности. В опроснике пациенту предлагалось сравнить увеличение/уменьшение боли и подвижности по сравнению с состоянием до операции, используя шкалу ± 1-5, см. рис. 2. По этой шкале отрицательные числа соответствуют уменьшению боли/подвижности, а положительные числа соответствуют увеличению боль/подвижность. Этот вопросник предоставляет порядковые данные и позволяет вычислить медиану и значимость с помощью непараметрического тестирования ранжированных сумм Уилкоксона.