Brug af autolog fedtafledt stromal vaskulær fraktion til behandling af slidgigt i knæet

Metoder:

Fedt høst. Uden at bruge oral eller parenteral sedation blev standard befugtningsopløsning (1 liter Lactated Ringer's, 50 milligram 1% lidocain og 1 cc 1:1000 epinephrin) infunderet gennem små snit skabt med spidsen af ​​et #11 skalpelblad i maven eller flankere ved hjælp af en standard multi-hul infusionskanyle. En super-våd plus-teknik (2 volumener befugtningsopløsning til 1 volumen foreslået fedtaspirat) blev brugt til at infundere opløsningen i de dybe og overfladiske fedtrum. Tyve minutter blev tilladt for maksimal vasokonstriktiv virkning af adrenalin. Fedt blev høstet ved hjælp af standard Suctioned-Assisted Liposuction (SAL) metode med en 3 mm kanyle ved ca. 0,5 - 0,7 atmosfære vakuum, aspiration af ca. 200-300 cc lipoaspirat ind i en steril vævsbehandlingsbeholder (GID SVF-1, Lousiville, CO) for hvert knæ, der skal behandles.

Fedtbehandlingsmetode. Lipoapirat blev høstet og behandlet hele vejen til genereringen af ​​SVF'en i en enkelt GID SVF-1 steril engangsanordning. GID SVF-1-enheden indeholder vaskemekanismen, netfilteret og centrifugekapaciteten i den samme enhed. Efter høst blev lipoaspiratet vasket tre gange med 37C Lactated Ringer's Solution med 20 mg Cipro og 5.000 enheder heparin pr. liter, og væskedelen blev fjernet ved hjælp af mesh-filtersystemet, hvilket efterlod tør fedt inde i beholderen. Beholderen blev vejet for at bestemme mængden af ​​tørt fedtstof, der var tilgængeligt til videre behandling. Det vaskede fedtstof blev adskilt under anvendelse af type I collagenase (Worthington, Lakewood, NJ) i en koncentration på 200 CDU/ml total katalytisk volumen, hvor total katalytisk volumen er volumen af ​​fedtvæv plus et lige så stort volumen 37C Lactated Ringer's Solution. Kollagenasen blev injiceret i beholderen gennem en steril .22 mikron filter (Millex-MP, Millipore, Cork, Irland). Indretningen med fedt, buffer og kollagenase blev derefter anbragt i en inkuberet ryster i 40 minutter ved 38°C ved 150 o/min, se figur 1. Efter disaggregering blev human albuminopløsning tilsat for at opnå en koncentration på 2,5% og standse enhver yderligere kollagenaseaktivitet. Indretningen blev derefter centrifugeret ved 800 g i 10 minutter. Supernatanten, inklusive alle flydende celler og affald og den vandige fase, blev fjernet ved hjælp af en port på toppen af ​​indretningen og kasseret. SVF-pelleten i bunden blev resuspenderet i 10 ml sterilt LR, som blev tilgået via den centrale port på indretningen under anvendelse af en 14G 5,5 tommer spinalnål (Abbocath-T, Hospira, Sligo, Irland). En prøve på 0,5 ml af resuspensionen blev opsamlet i et 1,5 cc Eppendorf-rør til brug til celletælling og assay. De resuspenderede SVF-celler blev koncentreret til en 3 ml dosis under anvendelse af et sterilt 15 ml Falcon-rør ved 400 g i 4 minutter.

SVF tællemetode. SVF-celleantallet og levedygtigheden blev vurderet under anvendelse af et ADAM MC billedcytometrisystem (Bulldog Bio, Portsmouth, NH). ADAM MC bruger propidiumiodid-farvning til at tælle levedygtige og ikke-levedygtige nukleerede celler. En 100 µL aliquot af assayprøven blev fortyndet med et forhold på 1:5 (1 del prøve til 5 dele sterilt LR) for at justere prøven inden for driftsgrænserne for ADAM MC. Differentialfarvningerne blev påført og alikvoter sat i engangskassetten, der bruges sammen med ADAM-anordningen. Resultaterne fra ADAM-tælleanordningen angiver koncentrationen af ​​SVF-celler i resuspensionssprøjten og den procentvise levedygtighed. Det totale volumen af ​​resuspensionen i sprøjten blev multipliceret med koncentrationen for at give det totale antal resuspenderede mononukleerede celler (ingen fedtceller, ingen RBC'er og ingen fragmenter inkluderet i tælleprocessen).

Injektions- og billedvejledningsmetode. Patienten blev anbragt i liggende stilling, og området over den laterale suprapatellære region af knæet blev klargjort på den sædvanlige sterile måde under anvendelse af en iodpræparationsopløsning (1% Iodophor) efterfulgt af en 70% isopropylalkoholopløsning. Denne placering blev brugt på grund af den lette adgang til det intraartikulære rum og for at undgå indsprøjtning i knæets fedtpude. Der blev ikke givet sedation eller smertestillende medicin til patienten. Et topisk bedøvelsesmiddel med ethylchlorid blev sprayet på det laterale knæ, indtil hudfarven ændrede sig til hvid. Lidokain lokalbedøvelse blev injiceret med en 25 gauge nål for at bedøve huden og det subkutane væv. Ved hjælp af et M-Turbo Sonosite ultralydssystem blev ledrummet identificeret, og under direkte ultralydsvejledning blev knæet aspireret ved hjælp af en 18 gauge/1,5 tomme nål, hvis væsker var tilgængelige til aspiration. Derefter blev alle de 3 cc bufferopløsning af SVF langsomt injiceret i det intraartikulære rum gennem den samme 18 gauge/1,5 tomme nål. Nålen blev derefter fjernet, og direkte tryk over injektionsstedet vil placeres i ca. ti (10) sekunder. Hæmostase efter injektion blev bekræftet, og derefter blev injektionsstedet renset med en spritserviet og dækket med et sterilt plaster. Patienten fik krykker og bedt om at være ikke-vægtbærende på det injicerede knæ i to (2) dage. Patienten fik lov til at bøje og bøje knæet, så længe den ikke-vægtbærende tilstand opretholdes.

Smerte- og mobilitetsvurderingsmetoder. Vurdering af knæsmerter blev udført ved hjælp af PROMIS smerteinstrumenter, et valideret smerteskalasystem udviklet under finansiering af NIH. PROMIS (Patient Reported Outcomes Measurement Information System) er et system til målinger af patientrapporteret helbredsstatus for fysisk, mentalt og socialt velvære, herunder tre målinger af smerte (www.nihpromis.org). PROMIS Pain Intensity-instrumentet (3a) vurderer, hvor meget en person har ondt. PROMIS Pain Behavior-instrumentet (Bank 1.0) måler adfærd, der indikerer over for andre, at en person oplever smerte. PROMIS Pain Interference-instrumentet (Bank 1.0) måler konsekvenserne af smerte på relevante aspekter af ens liv. Patientsvar konverteres til numeriske værdier i en valideret skala. Svarene på hvert spørgsmål i et smerteinstrument går fra 1 til 5 (1=slet ikke, 2=en lille smule, 3=noget, 4=temmelig lidt, 5=meget), og summeres over antallet af spørgsmål i banken for at skabe en råscore. Den rå score konverteres til en standardiseret score ved hjælp af en iterativ responsmetode med et gennemsnit på 50 og SD på 10, baseret på et stort udvalg af den generelle befolkning i USA. De validerede PROMIS smerteskalaer giver intervaldata og muliggør beregning af middelværdi og SD samt brug af t-test af signifikans. Data blev registreret præoperativt (tid 0) og ved opfølgningspunkter efter 2 uger, 4 uger, 6 uger og 12 uger.

Derudover blev patienterne bedt om at svare på et smerte- og mobilitetsspørgeskema med et spørgsmål om smerte og et spørgsmål om mobilitet. I spørgeskemaet blev patienten bedt om at sammenligne deres stigning/fald i smerte og mobilitet i forhold til før operationen ved at bruge en ± 1-5 skala, se figur 2. På denne skala svarer negative tal til faldende smerte/mobilitet, og positive tal svarer til stigende smerte/mobilitet. Dette spørgeskema giver ordinære data og gør det muligt at beregne medianen og signifikansen ved hjælp af Wilcoxon-rangerede summer uden parametrisk test.