閉経後の子宮内膜に対するホルモン補充療法

科目

健康な閉経後の女性、1～10 年間無月経、45～60 歳、使用中の卵胞刺激ホルモン > 30 ミリ国際単位/ミリリットル (mIU/mL) が研究に参加します。

すべての女性は治験について知らされ、インフォームドコンセント文書に署名され、適格性は病歴、および一般的な身体検査および婦人科検査に基づいて決定されます。 すべての女性は、ホルモン補充療法 (HRT) のリスクと考えられる利点について医師から説明を受けました。 含める際に、ベースラインでの子宮内膜の厚さを評価するために、経膣超音波（TV-US）が実行されました。 研究のエンドポイントで、子宮内膜生検は、組織学的および免疫組織化学的パラメーターを調べるために、Pipell子宮内膜サンプラーで実行されます。 バイタルサイン、血圧、体重、パップスメア、マンモグラフィー、定期的な臨床化学検査（コレステロール、高密度リポタンパク質コレステロール、低密度リポタンパク質コレステロール、トリグリセリドを含む）および血液学もスクリーニングで評価されます。

治療グループ 最初に評価された 100 人の女性のうち、32 人が包含および除外基準を満たしていませんでした。 閉経後の 60 人の女性が無作為に 3 つのグループに分けられました。グループ II: ドロスピレノン 2 mg と 17β-エストラジオール 1 mg (DRSP/E2) による継続的な併用治療が毎日投与される 20 人の患者も含まれます。グループ III: チボロン 1.25 mg (Tib) を毎日投与する 20 人の患者も含む。 すべての治療は24週間行われます。 ＤＲＳＰ／Ｅ２はブラジルの「Ｂａｙｅｒ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｐｈａｒｍａ（商標）」から購入し、Ｔｉｂはブラジルの「Ｂｉｏｌａｂ（商標）」から購入した。 治療期間は 6 サイクルで、各サイクルは 28 日間続きます (合計 24 週間)。 ランダム化は、選択プロセスの偏りを防ぐためにコンピューター ソフトウェアを使用して行われます。

目的: 閉経後の女性の子宮内膜における組織学、エストロゲン (ER) およびプロゲステロン受容体 (PR) の発現、および Bcl-2 タンパク質に対する低用量のチボロンおよびエストラジオール/ドロスピレノンの効果を評価するために、前向きランダム化比較試験が実施されます。 .

子宮内膜の厚さへの影響は、研究のベースラインで経膣超音波（TV-USG）によって決定され、すべての女性参加者で6サイクルの治療後に再び決定されます。 スキャンは、「Vale do Sapucai University」で、5.0 メガヘルツ (MHz) 膣変換器を備えたリアルタイム スキャナー「Hitachi 405」超音波システムで実行されました。 子宮内膜の厚さが 4 ミリメートル (mm) 未満の場合、子宮内膜がんの診断を裏付けるものではないと解釈されます。

子宮内膜の生検とサンプリングは、治療コースの最後に、子宮の上部底部の高い位置に配置された「ピペル キュレット」ド コルニエを使用して行われます。 子宮内膜サンプルのアリコートをピペットからポリプロピレン製バイアルに押し出します。 バイアルは、プロゲストゲン受容体 (PR) の測定のために、著者の 1 人が指示する「Vale do Sapucai University」の病理学科にドライアイスで発送されるまで、キャップをしてすぐに凍結し、摂氏 -20 度で保存されます。エストロゲン受容体 (ER) 受容体と Bcl-2 タンパク質。 残りの子宮内膜組織は、10% の中性緩衝ホルマリンで 6 ～ 48 時間固定され、その後パラフィン ブロックに処理されます。

組織学的および免疫組織化学的評価 組織学的分類は、2 人の病理学者によって行われます。 両方の病理学者は、同じブロック サンプルの異なる組織切片のブラインド リーディングを行います。 ヘマトキシリン/エオジンおよびシッフ過ヨウ素酸 (PAS) で染色した後、各標本を次のカテゴリのいずれかに分類しました: 診断に不十分な組織、萎縮性および/または不活性な子宮内膜、増殖性または弱増殖性子宮内膜、およびプロゲストゲン。

Bcl-2タンパク質の免疫組織化学的検出は、2人の病理学者によって行われます。 アビジン/ビオチン ブロッキング キット (Vector Laboratories, Inc, California, USA) を使用して正常血清で抗原回復および非特異的部位のブロッキングを行った後、切片を抗 Bcl-2 マウス モノクローナル抗体 ( 1:100、クローン 124、DAKO、デンマーク)。 組織に結合した抗体は、Envision System を使用して室温で 30 分間インキュベートします。 Envision (キット N1587、DAKO、デンマーク) を使用して染色を視覚化します。 この抗体の細胞染色パターンは細胞質です。 ER および PR の存在は、前述のように検出されます。 これらの抗体の細胞染色パターンは核です。 乳がん標本は、ステロイド受容体の陽性対照として使用されます。

検査と写真撮影は、Canon™ D30 デジタル カメラ (東京、日本) とビデオ モニター (LG 14" LCD) を備えた「Axioskop 40 - Zeiss」光学顕微鏡を使用して、Santa Casa of Sao の病理部門の手順に従って行われます。ブラジル、サンパウロのパウロ医科大学。

免疫組織化学的定量化のための形態計測技術は、ノイバウアーの目盛り付きチャンバーを使用して行われます。 これは、通常のスライドよりも厚いガラス スライドで構成され、それぞれが既知の寸法の正方形に分割されたグリッド デザインを持ち、光学顕微鏡でのみ視覚化されます。 ノイバウアー計数室は、3 本の線によって、各辺が 1 mm の 9 つの大きな正方形に分割されています (したがって、大きな正方形の面積 = 1 mm²)。 各大きな正方形には、16 (4 x 4) の中サイズの正方形が含まれます。 各中サイズの正方形は、3 本の線でさらに 25 (5 x 5) の小さな正方形に分割され、それぞれの辺の長さは 1/5 mm です。 したがって、個々の小さな正方形の面積は 0.05 x 0.05 mm= 0.0025 mm² で、深さは 0.1 mm です。

顕微鏡レンズを通して観察された画像は、ビデオ カメラによってキャプチャされ、選択したモニターに表示されます。 ノイバウアー チャンバーは、オブジェクトの元のサイズを 400 倍または研究者が選択した他の倍率で拡大する対物レンズを使用して、光学顕微鏡の下に配置されます。 最後に、高倍率視野 (倍率 400 倍) の下の領域は、選択した拡大領域内のチャンバーの個々の小さな 0.0025 mm² 正方形の総数を数えることによって mm² で推定されます。 高倍率での総面積は 0.094 mm² に相当します。

このアプローチを使用して、免疫組織化学的方法によって調製された各セクションは、光学顕微鏡下で評価されます。 研究中の細胞数は 400 倍の倍率でカウントされます。 評価されるさまざまな状況で、10 フィールドのカウントが実行されます。 この 10 フィールド カウントに存在する細胞の平均数は、0.094 mm² の面積を表します。 単純な 3 つのルールにより、細胞数は 1 mm² カウントに変換されます。 細胞数は、数値密度、すなわち上皮の平方ミリメートルあたりの陽性細胞の数として表されます。

Bcl-2 陽性細胞の数と PR および ER 発現に対する免疫反応性は、2 人の訓練された観察者によって手動で定量化され、実験を知らずに、腺細胞と間質細胞について別々に評価されます。 免疫組織化学染色指数 (数値密度) は、10 の異なるフィールドで計算された、1 mm² あたりの陽性免疫発現細胞の平均数として定義されます。

統計分析 統計分析は、「StatistiXL Package™」（Statistical Power for Microsoft Excel version 1.8、2007）を使用して実行されます。 人口統計学的パラメーター、ER、PR および Bcl-2 タンパク質発現の免疫組織化学的染色指数 (数値密度) の違い、ならびにベースラインおよび治療エンドポイントの子宮内膜の厚さは、異なるグループで対応のあるスチューデントの t 検定によって分析されます。 間質および腺上皮におけるER、PR、およびBcl-2タンパク質発現の間の関係は、スピアマンのテストを使用して分析されます。

統計的有意性は p < 0.05 に設定されます。 データは平均 + 標準偏差 (SD) として表されます。