Hormonerstatningsterapi på postmenopausalt endometrium

Emner

Friske postmenopausale kvinner, amenoré i 1-10 år, i alderen 45-60 år og i bruk av follikkelstimulerende hormon > 30 mille-International unit/milliliter (mIU/mL), vil delta i studien.

Alle kvinner vil bli informert om rettssaken og signert de informerte samtykkedokumentene, kvalifikasjonen ble bestemt basert på sykehistorien og på generell fysisk og gynekologisk undersøkelse. Alle kvinner ble informert av en lege om risikoen og mulige fordeler ved hormonbehandling (HRT). Ved inkludering ble transvaginal ultralyd (TV-US) utført for å evaluere tykkelsen på endometriet ved baseline. Ved studiens endepunkt vil en endometriebiopsi bli utført med en Pipelle endometrieprøvetaker for å undersøke histologiske og immunhistokjemiske parametere. Vitale tegn, blodtrykk, vekt, celleprøver, mammografi, rutinemessige kliniske kjemianalyser (inkludert kolesterol, lipoproteinkolesterol med høy tetthet, lipoproteinkolesterol med lav tetthet, triglyserider) og hematologi vil også bli evaluert ved screening.

Behandlingsgrupper Av de 100 kvinnene som først ble evaluert, oppfylte 32 ikke inklusjons- og eksklusjonskriteriene, mens åtte nektet å delta, noe som ga en endelig total på 60 pasienter for inkludering i studien. De seksti postmenopausale kvinnene ble tilfeldig fordelt i tre grupper: Gruppe I: kontrollgruppe bestående av 20 pasienter (ingen hormonbehandling); Gruppe II: omfatter også 20 pasienter, til hvem en kontinuerlig kombinert behandling med drospirenon 2 mg og 17β-østradiol 1 mg (DRSP/E2) vil bli administrert daglig; og gruppe III: omfatter også 20 pasienter, til hvem behandling med tibolon 1,25 mg (Tib) vil bli administrert daglig. Alle behandlinger vil bli gitt i en 24-ukers periode. DRSP/E2 ble kjøpt fra "Bayer Schering Pharma™", Brasil og Tib fra "Biolab™", Brasil. Varigheten av behandlingen vil være 6 sykluser, som hver varer i 28 dager (gjennomført i totalt 24 uker). Randomisering vil skje ved hjelp av dataprogramvare for å forhindre skjevhet i utvelgelsesprosessen.

Mål: En prospektiv randomisert kontrollert studie vil bli utført for å evaluere effekten av lav dose tibolon og østradiol/drospirenon på histologien, ekspresjonen av østrogen (ER) og progesteronreseptorer (PR) og Bcl-2-protein, i endometrium hos postmenopausale kvinner .

Effektene på endometrietykkelse vil bli bestemt ved transvaginal ultralyd (TV-USG) ved studiens baseline og igjen etter 6 behandlingssykluser hos alle kvinnelige deltakere. Skanninger ble utført med en sanntidsskanner, "Hitachi 405" ultralydsystem utstyrt med en 5,0-megahertz (MHz) vaginal transduser, ved "Vale do Sapucai University". En endometrietykkelse < 4 millimeter (mm) vil bli tolket som ikke å støtte en diagnose av endometriekreft.

Endometriebiopsi og prøvetaking vil bli utført på slutten av behandlingsforløpet ved bruk av en "Pipelle Curette" de Cornier, plassert høyt inn i øvre fundus av livmoren. En alikvot av endometrieprøven skyves fra pipetten inn i et polypropylenbeholder. Hetteglasset vil bli lokk, umiddelbart frosset, og deretter lagret ved -20º Celsius til sending i tørris til Institutt for patologi ved "Vale do Sapucai University", regissert av en av forfatterne, for måling av gestagenreseptor (PR) og østrogenreseptor (ER) reseptorer samt Bcl-2 protein. Det gjenværende endometrievevet vil fiksere i 10 % nøytralt bufret formalin i 6-48 timer og deretter behandles til parafinblokker.

Histologisk og immunhistokjemisk vurdering Histologisk klassifisering vil bli utført av to patologer. Begge patologene vil gjøre en blindlesing av forskjellige vevssnitt av samme blokkprøve. Etter farging med hematoxylin/eosin og Schiff Periodic Acid (PAS), ble hver prøve klassifisert i en av følgende kategorier: vev utilstrekkelig for diagnose, atrofisk og/eller inaktivt endometrium, proliferativt eller svakt proliferativt endometrium og progestogent .

Immunhistokjemisk påvisning av Bcl-2-protein vil bli utført av to patologer. Etter antigeninnhenting og blokkering av ikke-spesifikke steder med normalt serum ved bruk av Avidin/Biotin Blocking-settet (Vector Laboratories, Inc, California, USA), vil seksjonene inkuberes over natten ved 4º Celsius med anti-Bcl-2 muse monoklonalt antistoff ( 1:100, Clone 124, DAKO, Danmark). Det vevsbundne antistoffet vil bli inkubert i 30 minutter ved romtemperatur med Envision System. Farging vil bli visualisert ved bruk av Envision (Kit N1587, DAKO, Danmark). Det cellulære fargemønsteret for dette antistoffet er cytoplasmatisk. Tilstedeværelsen av ER og PR vil bli oppdaget som beskrevet tidligere. De cellulære fargingsmønstrene for disse antistoffene er nukleære. En brystkreftprøve vil bli brukt som en positiv kontroll for steroidreseptorene.

Undersøkelser og fotografering vil utføres med et "Axioskop 40 - Zeiss" lysmikroskop utstyrt med et Canon™ D30 digitalkamera (Tokyo, Japan) og videomonitor (LG 14" LCD) i henhold til prosedyrene til patologiavdelingen fra Santa Casa i Sao Paulo Medical School, Sao Paulo, Brasil.

Den morfometriske teknikken for immunhistokjemi-kvantifisering vil bli gjort ved hjelp av et Neubauer-gradert kammer. Dette består av et glassglass, tykkere enn et vanlig objektglass, som hver har et rutenettdesign som deler det inn i firkanter med kjente dimensjoner, kun visualisert gjennom et optisk mikroskop. Neubauer-tellekammeret er delt inn i 9 store firkanter, hver med 1 mm sider, ved hjelp av trippellinjer (dermed arealet av en stor firkant = 1 mm²). Hver stor firkant inneholder 16 (4 x 4) mellomstore firkanter. Hver mellomstor firkant er videre delt med trippellinjer i 25 (5 x 5) mindre firkanter, hver med en sidelengde på 1/5 mm. Dermed er arealet til et enkelt lite kvadrat 0,05 x 0,05 mm = 0,0025 mm² og 0,1 mm dypt.

Bildet observert gjennom mikroskoplinsene vil bli fanget av videokameraet og vist på den valgte skjermen. Neubauer-kammeret vil deretter bli plassert under det optiske mikroskopet, ved å bruke et objektiv som forstørrer den opprinnelige størrelsen på objektet med 400x eller med en annen forstørrelse valgt av forskeren. Til slutt estimeres området under høyforstørrelsesfeltet (400x forstørrelse) i mm² ved å telle det totale antallet individuelle små 0,0025 mm² kvadrater i kammeret innenfor det valgte forstørrelsesområdet. Det totale arealet under høy forstørrelse tilsvarte 0,094 mm².

Ved å bruke denne tilnærmingen vil hver seksjon utarbeidet av den immunhistokjemiske metoden bli evaluert under lysmikroskopet. Antall celler i studien vil telles ved 400x forstørrelse. En telling på 10 felter vil bli utført i de ulike situasjonene som vurderes. Gjennomsnittlig antall celler tilstede i denne 10-felts tellingen representerte et område på 0,094 mm². Ved hjelp av en enkel treregel vil antall celler konverteres til 1 mm²-tellinger. Celletallet vil uttrykkes som numerisk tetthet, dvs. antall positive celler per kvadratmillimeter epitel.

Antallet Bcl-2-positive celler og immunreaktivitet for PR- og ER-ekspresjon vil kvantifiseres manuelt av to trente observatører, blinde for eksperimentet, og vil evaluere separat for kjertel- og stromaceller. Den immunhistokjemiske fargeindeksen (numerisk tetthet) vil bli definert som gjennomsnittlig antall positive immunekspresjonsceller per mm², beregnet i 10 forskjellige felt.

Statistisk analyse Statistisk analyse vil bli utført ved å bruke "StatistiXL Package™" (Statistical Power for Microsoft Excel versjon 1.8, 2007). Forskjeller i demografiske parametere, immunhistokjemisk fargeindeks for ER-, PR- og Bcl-2-proteinekspresjon (numerisk tetthet), samt baseline og behandlingsendepunkt endometrial tykkelse, vil bli analysert av den sammenkoblede Students t-test i de forskjellige gruppene. Forholdet mellom ER, PR og Bcl-2 proteinekspresjon i stroma og kjertelepitel vil bli analysert ved bruk av Spearmans test.

Statistisk signifikans vil settes til p < 0,05. Data vil uttrykkes som gjennomsnitt + standardavvik (SD).