Hormonikorvaushoito postmenopausaalisella kohdun limakalvolla

Aiheet

Tutkimukseen osallistuvat terveet postmenopausaaliset naiset, kuukautiset 1-10 vuotta, iältään 45-60 vuotta ja joilla on käytössä follikkelia stimuloivaa hormonia > 30 mille-kansainvälistä yksikköä/millilitraa (mIU/ml).

Kaikille naisille tiedotetaan kokeesta ja he allekirjoittavat suostumusasiakirjat, kelpoisuus määritettiin sairaushistorian sekä yleisen fyysisen ja gynekologisen tutkimuksen perusteella. Lääkäri kertoi kaikille naisille hormonikorvaushoidon riskeistä ja mahdollisista eduista. Lisäyksen jälkeen suoritettiin transvaginaalinen ultraääni (TV-US) endometriumin paksuuden arvioimiseksi lähtötasolla. Tutkimuksen loppuvaiheessa kohdun limakalvon biopsia suoritetaan Pipellen kohdun limakalvonäytteenottimella histologisten ja immunohistokemiallisten parametrien tutkimiseksi. Elintoiminnot, verenpaine, paino, Papa-koe, mammografia, rutiininomaiset kliinisen kemian määritykset (mukaan lukien kolesteroli, korkean tiheyden lipoproteiinikolesteroli, matalatiheyksinen lipoproteiinikolesteroli, triglyseridit) ja hematologia arvioidaan myös seulonnassa.

Hoitoryhmät Alun perin arvioiduista 100 naisesta 32 ei täyttänyt sisällyttämis- ja poissulkemiskriteerejä, kun taas kahdeksan kieltäytyi osallistumasta, jolloin tutkimukseen otettiin yhteensä 60 potilasta. Kuusikymmentä postmenopausaalista naista jaettiin satunnaisesti kolmeen ryhmään: Ryhmä I: kontrolliryhmä, joka käsitti 20 potilasta (ei hormonaalista hoitoa); Ryhmä II: sisältää myös 20 potilasta, joille annetaan jatkuvaa yhdistelmähoitoa 2 mg drospirenonilla ja 1 mg 17p-estradiolilla (DRSP/E2) päivittäin; ja ryhmä III: sisältää myös 20 potilasta, joille 1,25 mg:n (Tib) tibolonia annetaan päivittäin. Kaikki hoidot annetaan 24 viikon ajan. DRSP/E2 ostettiin yhtiöltä "Bayer Schering Pharma™", Brasilia, ja Tib "Biolab™:lta", Brasilia. Hoidon kesto on 6 sykliä, joista jokainen kestää 28 päivää (yhteensä 24 viikkoa). Satunnaistaminen tehdään tietokoneohjelmiston avulla, jotta valintaprosessissa vältytään puolueellisuudesta.

Tavoite: Suoritetaan prospektiivinen satunnaistettu kontrolloitu koe, jolla arvioidaan pienen tibolonin ja estradiolin/drospirenonin annoksen vaikutusta histologiaan, estrogeeni- (ER) ja progesteronireseptorien (PR) ja Bcl-2-proteiinin ilmentymiseen postmenopausaalisten naisten endometriumissa. .

Vaikutukset kohdun limakalvon paksuuteen määritetään transvaginalisella ultraäänellä (TV-USG) tutkimuksen alussa ja uudelleen kuuden hoitojakson jälkeen kaikilla osallistuneilla naisilla. Skannaukset suoritettiin reaaliaikaisella skannerilla, "Hitachi 405" -ultraäänijärjestelmällä, joka oli varustettu 5,0 megahertsin (MHz) emättimen anturilla, "Vale do Sapucai Universityssä". Kohdun limakalvon paksuus < 4 millimetriä (mm) tulkitaan siten, että se ei tue kohdun limakalvon syövän diagnoosia.

Kohdun limakalvon biopsia ja näytteenotto suoritetaan hoitojakson lopussa käyttämällä "Pipelle Curette" de Cornieria, joka sijoitetaan korkealle kohdun yläpohjaan. Osa endometriumin näytteestä työnnetään pipetistä polypropeenipulloon. Injektiopullo suljetaan, pakastetaan välittömästi ja varastoidaan sitten -20 celsiusasteessa, kunnes se toimitetaan kuivajäässä "Vale do Sapucai Universityn" patologian laitokselle, jota ohjasi yksi kirjoittajista progestiinireseptorin (PR) mittaamista varten. ja estrogeenireseptori (ER) -reseptorit sekä Bcl-2-proteiini. Jäljelle jäänyt kohdun limakalvokudos kiinnittyy 10 % neutraaliin puskuroituun formaliiniin 6-48 tunnin ajan ja prosessoituu sitten parafiinilohkoiksi.

Histologinen ja immunohistokemiallinen arviointi Histologisen luokituksen suorittaa kaksi patologia. Molemmat patologit tekevät sokkolukemisen saman lohkonäytteen eri kudososista. Hematoksyliini/eosiini- ja Schiff-jaksohapolla (PAS) värjäyksen jälkeen jokainen näyte luokiteltiin johonkin seuraavista luokista: kudos, joka ei riitä diagnoosiin, atrofinen ja/tai inaktiivinen kohdun limakalvo, proliferatiivinen tai heikosti proliferatiivinen endometriumi ja progestogeeninen.

Kaksi patologia suorittaa Bcl-2-proteiinin immunohistokemiallisen havaitsemisen. Kun antigeeni on haettu ja epäspesifiset kohdat on estetty normaalilla seerumilla käyttämällä Avidin/Biotin Blocking Kit -pakkausta (Vector Laboratories, Inc, California, USA), leikkeitä inkuboidaan yön yli 4 ºC:ssa hiiren monoklonaalisen anti-Bcl-2-vasta-aineen kanssa ( 1:100, klooni 124, DAKO, Tanska). Kudokseen sitoutunutta vasta-ainetta inkuboidaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa Envision Systemin kanssa. Värjäys visualisoidaan käyttämällä Envisionia (Kit N1587, DAKO, Tanska). Tämän vasta-aineen solujen värjäytymiskuvio on sytoplasminen. ER:n ja PR:n läsnäolo havaitaan edellä kuvatulla tavalla. Näiden vasta-aineiden solujen värjäytymiskuviot ovat tumallisia. Rintasyövän näytettä käytetään positiivisena kontrollina steroidireseptoreille.

Tutkimukset ja valokuvaus suoritetaan "Axioskop 40 - Zeiss" -valomikroskoopilla, joka on varustettu Canon™ D30 -digitaalikameralla (Tokio, Japani) ja videomonitorilla (LG 14" LCD) Santa Casa of Saon patologian osaston menettelyjen mukaisesti. Paulon lääketieteellinen koulu, Sao Paulo, Brasilia.

Morfometrinen tekniikka immunohistokemian kvantifiointiin tehdään Neubauer-asteikkokammion avulla. Tämä koostuu lasilevystä, joka on tavallista objektilasia paksumpi, ja jokaisessa on ruudukkorakenne, joka jakaa sen neliöiksi, joilla on tunnetut mitat ja jotka näkyvät vain optisella mikroskoopilla. Neubauer-laskentakammio on jaettu 9 suureen neliöön, joista jokaisessa on 1 mm:n sivut, kolminkertaisten viivojen avulla (siis suuren neliön pinta-ala = 1 mm²). Jokainen suuri neliö sisältää 16 (4 x 4) keskikokoista ruutua. Jokainen keskikokoinen neliö jaetaan edelleen kolminkertaisilla viivoilla 25 (5 x 5) pienempään ruutuun, joiden jokaisen sivun pituus on 1/5 mm. Siten yksittäisen pienen neliön pinta-ala on 0,05 x 0,05 mm = 0,0025 mm² ja 0,1 mm syvä.

Mikroskoopin linssien läpi havaittu kuva tallennetaan videokameraan ja näytetään valitulla näytöllä. Neubauer-kammio asetetaan sitten optisen mikroskoopin alle käyttämällä objektiivia, joka suurentaa kohteen alkuperäisen koon 400x tai millä tahansa muulla tutkijan valitsemalla suurennuksella. Lopuksi suuren suurennuskentän (400x suurennus) alla oleva pinta-ala arvioidaan mm²:nä laskemalla kammion yksittäisten pienten 0,0025 mm² neliöiden kokonaismäärä valitulla suurennusalueella. Suuren suurennoksen kokonaispinta-ala vastasi 0,094 mm².

Tätä lähestymistapaa käyttämällä jokainen immunohistokemiallisella menetelmällä valmistettu osa arvioidaan valomikroskoopin alla. Tutkimuksessa olevien solujen lukumäärä lasketaan 400-kertaisella suurennuksella. 10 kentän laskenta suoritetaan eri arvioiduissa tilanteissa. Keskimääräinen solujen lukumäärä tässä 10 kentän määrässä edusti aluetta 0,094 mm². Yksinkertaisen kolmen säännön avulla solujen määrä muunnetaan 1 mm²:n luvuiksi. Solumäärä ilmaistaan ​​numeerisena tiheytenä, eli positiivisten solujen lukumääränä epiteelin neliömillimetriä kohti.

Bcl-2-positiivisten solujen lukumäärä ja immunoreaktiivisuus PR- ja ER-ilmentymiselle kvantifioidaan manuaalisesti kahden koulutetun tarkkailijan toimesta, jotka ovat sokeita kokeelle, ja arvioivat erikseen rauhas- ja stroomasolut. Immunohistokemiallinen värjäytymisindeksi (numeerinen tiheys) määritellään positiivisten immunoekspressiosolujen keskimääräisenä lukumääränä per mm², laskettuna 10 eri kentässä.

Tilastollinen analyysi Tilastollinen analyysi suoritetaan käyttämällä "StatistiXL Package™" (Statistical Power for Microsoft Excel versio 1.8, 2007) avulla. Demografisten parametrien erot, ER:n, PR- ja Bcl-2-proteiinin ilmentymisen immunohistokemiallinen värjäytymisindeksi (numeerinen tiheys) sekä lähtötilanteen ja hoidon loppupisteen kohdun limakalvon paksuus analysoidaan Studentin t-testillä eri ryhmissä. ER-, PR- ja Bcl-2-proteiinin ilmentymisen väliset suhteet stroomassa ja rauhasepiteelissä analysoidaan Spearmanin testillä.

Tilastollinen merkitsevyys asetetaan arvoon p < 0,05. Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona + keskihajonta (SD).