Hormonothérapie substitutive sur l'endomètre post-ménopausique

Sujets

Les femmes ménopausées en bonne santé, aménorrhéiques depuis 1 à 10 ans, âgées de 45 à 60 ans et utilisant une hormone folliculostimulante > 30 mille unités internationales/millilitres (mUI/mL), participeront à l'étude.

Toutes les femmes seront informées de l'essai et signeront les documents de consentement éclairé, l'éligibilité a été déterminée sur la base des antécédents médicaux et d'un examen physique et gynécologique général. Toutes les femmes ont été informées par un médecin des risques et des avantages possibles du traitement hormonal substitutif (THS). À l'inclusion, une échographie transvaginale (TV-US) a été réalisée pour évaluer l'épaisseur de l'endomètre au départ. À la fin de l'étude, une biopsie endométriale sera réalisée avec un échantillonneur endométrial Pipelle pour examiner les paramètres histologiques et immunohistochimiques. Les signes vitaux, la tension artérielle, le poids, le test Pap, la mammographie, les tests de chimie clinique de routine (y compris le cholestérol, le cholestérol à lipoprotéines de haute densité, le cholestérol à lipoprotéines de basse densité, les triglycérides) et l'hématologie seront également évalués lors du dépistage.

Groupes de traitement Sur les 100 femmes initialement évaluées, 32 ne répondaient pas aux critères d'inclusion et d'exclusion, tandis que huit ont refusé de participer, soit un total final de 60 patientes à inclure dans l'étude. Les soixante femmes ménopausées ont été réparties au hasard en trois groupes : Groupe I : groupe témoin comprenant 20 patientes (pas de traitement hormonal) ; Groupe II : comprenant également 20 patientes, auxquelles sera administré quotidiennement un traitement combiné continu par drospirénone 2 mg et 17β-estradiol 1 mg (DRSP/E2) ; et Groupe III : comprenant également 20 patients, auxquels un traitement par tibolone 1,25 mg (Tib) sera administré quotidiennement. Tous les traitements seront administrés pendant une période de 24 semaines. DRSP/E2 a été acheté auprès de "Bayer Schering Pharma™", Brésil et Tib de "Biolab™", Brésil. La durée du traitement sera de 6 cycles, chacun d'une durée de 28 jours (menés pendant un total de 24 semaines). La randomisation sera effectuée à l'aide d'un logiciel informatique afin d'éviter tout biais dans le processus de sélection.

Objectif : Un essai contrôlé randomisé prospectif sera mené pour évaluer l'effet d'une faible dose de tibolone et d'estradiol/drospirénone sur l'histologie, l'expression des récepteurs des œstrogènes (ER) et de la progestérone (PR) et de la protéine Bcl-2, dans l'endomètre des femmes ménopausées. .

Les effets sur l'épaisseur de l'endomètre seront déterminés par échographie transvaginale (TV-USG) au départ de l'étude et à nouveau après 6 cycles de traitement chez toutes les femmes participantes. Les scans ont été effectués avec un scanner en temps réel, système d'échographie "Hitachi 405" équipé d'un transducteur vaginal de 5,0 mégahertz (MHz), à l'Université "Vale do Sapucai". Une épaisseur de l'endomètre < 4 millimètres (mm) sera interprétée comme ne supportant pas un diagnostic de cancer de l'endomètre.

Une biopsie et un prélèvement de l'endomètre seront effectués à la fin du traitement à l'aide d'une "Pipelle Curette" de Cornier, placée haut dans le fond supérieur de l'utérus. Une aliquote de l'échantillon d'endomètre sera poussée de la pipette dans un flacon en polypropylène. Le flacon sera bouché, immédiatement congelé, puis stocké à -20º Celsius jusqu'à son expédition dans de la neige carbonique au Département de pathologie de l'Université "Vale do Sapucai", dirigé par l'un des auteurs, pour la mesure du récepteur progestatif (PR) et les récepteurs des récepteurs aux œstrogènes (ER) ainsi que la protéine Bcl-2. Le tissu endométrial restant se fixera dans du formol tamponné neutre à 10 % pendant 6 à 48 h, puis sera transformé en blocs de paraffine.

Bilan histologique et immunohistochimique Le classement histologique sera réalisé par deux pathologistes. Les deux pathologistes effectueront une lecture à l'aveugle de différentes sections de tissus du même bloc-échantillon. Après coloration à l'hématoxyline/éosine et à l'acide périodique de Schiff (PAS), chaque échantillon a été classé dans l'une des catégories suivantes : tissu insuffisant pour le diagnostic, endomètre atrophique et/ou inactif, endomètre prolifératif ou faiblement prolifératif et progestatif .

La détection immunohistochimique de la protéine Bcl-2 sera effectuée par deux pathologistes. Après récupération de l'antigène et blocage des sites non spécifiques avec du sérum normal à l'aide du kit de blocage Avidine/Biotine (Vector Laboratories, Inc, Californie, États-Unis), les coupes seront incubées pendant une nuit à 4º Celsius avec un anticorps monoclonal de souris anti-Bcl-2 ( 1:100, Clone 124, DAKO, Danemark). L'anticorps lié au tissu sera incubé pendant 30 min à température ambiante avec le système Envision. La coloration sera visualisée à l'aide d'Envision (Kit N1587, DAKO, Danemark). Le motif de coloration cellulaire pour cet anticorps est cytoplasmique. La présence de ER et PR sera détectée comme décrit précédemment. Les modèles de coloration cellulaire pour ces anticorps sont nucléaires. Un échantillon de cancer du sein sera utilisé comme contrôle positif pour les récepteurs stéroïdiens.

Les examens et photographies seront effectués à l'aide d'un microscope optique "Axioskop 40 - Zeiss" équipé d'un appareil photo numérique Canon™ D30 (Tokyo, Japon) et d'un moniteur vidéo (LCD LG 14") selon les procédures du Département de Pathologie de Santa Casa de Sao École de médecine de Paulo, Sao Paulo, Brésil.

La technique morphométrique de quantification en immunohistochimie se fera à l'aide d'une chambre graduée Neubauer. Il s'agit d'une lame de verre, plus épaisse qu'une lame ordinaire, chacune ayant une conception de grille la divisant en carrés de dimensions connues, visualisées uniquement à travers un microscope optique. La chambre de comptage de Neubauer est divisée en 9 grands carrés de 1 mm de côté chacun, au moyen de traits triples (donc aire d'un grand carré = 1 mm²). Chaque grand carré contient 16 (4 x 4) carrés de taille moyenne. Chaque carré de taille moyenne est ensuite divisé par des lignes triples en 25 (5 x 5) petits carrés, chacun avec une longueur de côté de 1/5 de mm. Ainsi, l'aire d'un petit carré individuel est de 0,05 x 0,05 mm = 0,0025 mm² et 0,1 mm de profondeur.

L'image observée à travers les lentilles du microscope sera capturée par la caméra vidéo et affichée sur le moniteur choisi. La chambre Neubauer sera ensuite placée sous le microscope optique, à l'aide d'un objectif qui agrandit la taille originale de l'objet de 400x ou de tout autre grossissement choisi par le chercheur. Enfin, la zone sous le champ de grossissement élevé (grossissement 400x) est estimée en mm² en comptant le nombre total de petits carrés individuels de 0,0025 mm² de la chambre dans la zone de grossissement choisie. La surface totale sous fort grossissement correspondait à 0,094 mm².

En utilisant cette approche, chaque section préparée par la méthode immunohistochimique sera évaluée au microscope optique. Le nombre de cellules dans l'étude sera compté à un grossissement de 400x. Un comptage de 10 champs sera effectué dans les différentes situations évaluées. Le nombre moyen de cellules présentes dans ce comptage de 10 champs représentait une surface de 0,094 mm². Au moyen d'une simple règle de trois, le nombre de cellules sera converti en comptes de 1 mm². Le nombre de cellules sera exprimé en densité numérique, c'est-à-dire le nombre de cellules positives par millimètre carré d'épithélium.

Le nombre de cellules Bcl-2-positives et l'immunoréactivité pour l'expression PR et ER seront quantifiés manuellement par deux observateurs formés, aveugles à l'expérience, et évalueront séparément les cellules glandulaires et stromales. L'indice de coloration immunohistochimique (densité numérique) sera défini comme le nombre moyen de cellules d'immunoexpression positive par mm², calculé dans 10 champs différents.

Analyse statistique L'analyse statistique sera effectuée à l'aide du "StatistiXL Package™" (Statistical Power for Microsoft Excel version 1.8, 2007). Les différences dans les paramètres démographiques, l'indice de coloration immunohistochimique de l'expression des protéines ER, PR et Bcl-2 (densité numérique), ainsi que l'épaisseur de l'endomètre de base et au point final du traitement, seront analysées par le test t de Student apparié dans les différents groupes. Les relations entre l'expression des protéines ER, PR et Bcl-2 dans le stroma et l'épithélium glandulaire seront analysées à l'aide du test de Spearman.

La signification statistique sera fixée à p < 0,05. Les données seront exprimées en moyenne + écart type (SD).