폐경기 자궁내막에 대한 호르몬 대체 요법

과목

건강한 폐경 후 여성, 1-10년 동안 무월경, 45-60세, 난포 자극 호르몬 > 30 mille-International unit/ml(mIU/mL)을 사용 중인 여성이 연구에 참여합니다.

모든 여성에게 임상시험에 대한 정보를 제공하고 정보에 입각한 동의서에 서명할 것이며 자격은 병력과 일반적인 신체 및 부인과 검사를 기반으로 결정되었습니다. 모든 여성은 호르몬 대체 요법(HRT)의 위험과 가능한 이점에 대해 의사로부터 정보를 받았습니다. 포함 시 질식 초음파(TV-US)를 수행하여 기준선에서 자궁내막의 두께를 평가했습니다. 연구 종점에서 Pipelle 자궁내막 샘플러로 자궁내막 생검을 수행하여 조직학적 및 면역조직화학적 매개변수를 검사합니다. 활력 징후, 혈압, 체중, 세포진 검사, 유방조영술, 일상적인 임상 화학 검사(콜레스테롤, 고밀도 지단백 콜레스테롤, 저밀도 지단백 콜레스테롤, 트리글리세리드 포함) 및 혈액 검사도 스크리닝 시 평가됩니다.

치료 그룹 처음 평가된 100명의 여성 중 32명은 포함 및 제외 기준을 충족하지 않았고 8명은 참여를 거부하여 최종 총 60명의 환자가 연구에 포함되었습니다. 60명의 폐경 후 여성을 무작위로 세 그룹으로 나누었습니다: 그룹 I: 20명의 환자로 구성된 대조군(호르몬 치료 없음); 그룹 II: 드로스피레논 2 mg 및 17β-에스트라디올 1 mg(DRSP/E2)을 매일 연속적으로 병용 치료하는 20명의 환자로 구성됨; 및 그룹 III: 또한 티볼론 1.25 mg(Tib)을 사용한 치료가 매일 투여될 20명의 환자로 구성됨. 모든 치료는 24주 동안 시행됩니다. DRSP/E2는 브라질의 "Bayer Schering Pharma™"에서, Tib는 브라질의 "Biolab™"에서 구입했습니다. 치료 기간은 6주기이며, 각 주기는 28일 동안 지속됩니다(총 24주 동안 수행됨). 무작위화는 선택 과정에서 편견을 방지하기 위해 컴퓨터 소프트웨어의 도움으로 수행됩니다.

목표: 폐경 후 여성의 자궁내막에서 조직학, 에스트로겐(ER) 및 프로게스테론 수용체(PR) 및 Bcl-2 단백질의 발현에 대한 저용량 티볼론 및 에스트라디올/드로스피레논의 효과를 평가하기 위해 전향적 무작위 대조 시험을 실시할 예정입니다. .

자궁내막 두께에 미치는 영향은 연구 기준선에서 질식 초음파(TV-USG)에 의해 결정되고 모든 여성 참가자에서 6주기의 치료 후에 다시 결정됩니다. 스캔은 "Vale do Sapucai University"에서 5.0MHz 질 변환기가 장착된 초음파 시스템인 "Hitachi 405" 실시간 스캐너로 수행되었습니다. 자궁내막 두께 < 4 밀리미터(mm)는 자궁내막암 진단을 지지하지 않는 것으로 해석됩니다.

자궁 내막 생검 및 샘플링은 치료 과정이 끝날 때 자궁의 상부 안저에 높게 배치된 "Pipelle Curette" de Cornier를 사용하여 수행됩니다. 자궁내막 샘플의 일부를 피펫에서 폴리프로필렌 바이알로 밀어 넣습니다. 바이알은 캡을 씌우고 즉시 냉동한 다음 프로게스토겐 수용체(PR) 측정을 위해 저자 중 한 명이 지시하는 "Vale do Sapucai University"의 병리학과로 드라이아이스로 배송될 때까지 -20ºC에서 보관됩니다. 및 에스트로겐 수용체(ER) 수용체 및 Bcl-2 단백질. 나머지 자궁내막 조직은 6-48시간 동안 10% 중성 완충 포르말린으로 고정한 다음 파라핀 블록으로 처리합니다.

조직학적 및 면역조직화학적 평가 조직학적 분류는 2명의 병리학자에 의해 수행될 것이다. 두 병리학자는 동일한 블록 샘플의 서로 다른 조직 섹션을 블라인드 판독합니다. 헤마톡실린/에오신 및 쉬프 주기산(PAS)으로 염색한 후, 각 표본은 진단에 불충분한 조직, 위축 및/또는 비활성 자궁내막, 증식성 또는 약하게 증식하는 자궁내막 및 프로게스토겐성 범주 중 하나로 분류되었습니다.

Bcl-2 단백질의 면역조직화학적 검출은 2명의 병리학자에 의해 수행될 것이다. Avidin/Biotin Blocking kit(Vector Laboratories, Inc, California, USA)를 사용하여 정상 혈청으로 항원 검색 및 비특이적 부위를 차단한 후 절편을 항-Bcl-2 마우스 단클론 항체( 1:100, Clone 124, DAKO, 덴마크). 조직 결합 항체는 Envision System으로 실온에서 30분 동안 배양됩니다. 염색은 Envision(Kit N1587, DAKO, 덴마크)을 사용하여 가시화됩니다. 이 항체의 세포 염색 패턴은 세포질입니다. ER 및 PR의 존재는 앞에서 설명한 대로 감지됩니다. 이러한 항체의 세포 염색 패턴은 핵입니다. 유방암 표본은 스테로이드 수용체에 대한 양성 대조군으로 사용됩니다.

검사 및 촬영은 Sao Santa Casa의 병리과 절차에 따라 Canon™ D30 디지털 카메라(Tokyo, Japan) 및 비디오 모니터(LG 14" LCD)가 장착된 "Axioskop 40 - Zeiss" 광학 현미경을 사용하여 수행됩니다. 파울로 의과 대학, 상파울루, 브라질.

면역조직화학 정량화를 위한 형태 측정 기술은 Neubauer 등급 챔버의 도움으로 수행됩니다. 이것은 일반 슬라이드보다 두꺼운 유리 슬라이드로 구성되어 있으며 각 슬라이드는 광학 현미경을 통해서만 시각화되는 알려진 크기의 사각형으로 분할하는 그리드 디자인을 가지고 있습니다. Neubauer 계수실은 3개의 선으로 각각 1mm의 변을 가진 9개의 큰 정사각형으로 나뉩니다(따라서 큰 정사각형의 면적 = 1mm²). 각 큰 정사각형에는 중간 크기의 정사각형 16개(4 x 4)가 있습니다. 각각의 중간 크기 정사각형은 세 개의 선으로 25(5 x 5)개의 작은 정사각형으로 더 나뉘며 각 정사각형의 변 길이는 1/5mm입니다. 따라서 개별 작은 정사각형의 면적은 0.05 x 0.05mm= 0.0025mm²이고 깊이는 0.1mm입니다.

현미경 렌즈를 통해 관찰된 이미지는 비디오 카메라로 캡처되어 선택한 모니터에 표시됩니다. 그런 다음 물체의 원래 크기를 400배 또는 연구원이 선택한 다른 배율로 확대하는 대물렌즈를 사용하여 Neubauer 챔버를 광학 현미경 아래에 배치합니다. 마지막으로, 고배율 필드(400x 배율) 아래의 영역은 선택한 배율 영역 내에서 챔버의 개별 작은 0.0025mm² 사각형의 총 수를 계산하여 mm²로 추정됩니다. 고배율에서 총 면적은 0.094mm²에 해당합니다.

이 접근법을 사용하여 면역조직화학적 방법으로 준비된 각 섹션을 광학 현미경으로 평가합니다. 연구의 세포 수는 400x 배율로 계산됩니다. 평가된 여러 상황에서 10필드 카운트가 수행됩니다. 이 10필드 카운트에 존재하는 평균 셀 수는 0.094mm²의 면적을 나타냅니다. 3이라는 간단한 규칙에 따라 셀 수는 1mm² 개수로 변환됩니다. 세포 수는 수치 밀도, 즉 상피 제곱밀리미터당 양성 세포의 수로 표현됩니다.

Bcl-2 양성 세포의 수와 PR 및 ER 발현에 대한 면역 반응성은 실험에 대해 알지 못하는 두 명의 훈련된 관찰자가 수동으로 정량화하고 선 및 간질 세포에 대해 별도로 평가합니다. 면역조직화학 염색 지수(수치 밀도)는 mm²당 양성 면역발현 세포의 평균 수로 정의되며 10개의 다른 분야에서 계산됩니다.

통계 분석 통계 분석은 "StatistiXL Package™"(Statistical Power for Microsoft Excel 버전 1.8, 2007)를 사용하여 수행됩니다. 인구통계학적 매개변수, ER, PR 및 Bcl-2 단백질 발현의 면역조직화학적 염색 지수(수치 밀도), 기준선 및 치료 종점 자궁내막 두께의 차이는 서로 다른 그룹에서 짝을 이룬 스튜던트 t-테스트로 분석됩니다. 기질 및 선 상피에서 ER, PR 및 Bcl-2 단백질 발현 사이의 관계는 Spearman's test를 사용하여 분석될 것이다.

통계적 유의성은 p < 0.05로 설정됩니다. 데이터는 평균 + 표준 편차(SD)로 표현됩니다.