オーデンセ小児コホート 1 におけるビタミン D と血管新生マーカー (VITAM)

全体: Odense Child Cohort Study (OCC) は人口ベースのコホート研究であり、2010 年 1 月 1 日から 2012 年 12 月 31 日の間に募集された妊婦で構成されています。 この期間にオーデンセ市で妊娠していたすべての女性が参加資格を持ち、6,707 人の女性に募集資料を直接提供しました。

この研究はヘルシンキ宣言に準拠し、南デンマークの地域科学倫理委員会によって承認されました。 S-20090130. すべての参加者は、インフォームド コンセントを与えた。 2012 年 12 月 31 日までに 6,707 人の妊婦の母集団ベースから、2,874 人 (42.9%) が OCC に登録しました。 子供たちは18歳まで追跡されます。

血清サンプルは、妊娠初期 (GA 2 ～ 25 週)、妊娠後期 (GA 26 ～ 30 週)、出生時の母体血清および臍帯血で採取され、3 か月、1 歳、3 歳での一般検査とともに子供から採取されました。年。

アンケートは、妊娠初期、妊娠後期、出産後、および子供の臨床検査時に家族によって記入されました。

健康変数に関する登録データは、デンマークの登録簿からさらに入手可能でした。

目的: ビタミン D と血管新生マーカーの研究 1 では、妊娠中の血清バイオマーカー 25(OH)D と可溶性 Fms 様キナーゼ 1 (sFlt-1) および胎盤成長因子 (PlGF) との関係と、有害転帰としての流産のリスクを調べます。妊娠初期に。

方法：

• 25(OH)D 分析: 液体クロマトグラフィー質量分析 (LC-MS/MS) による分析まで、血清を摂氏 -80 度で保存しました。 トリプル重水素標識 25(OH) ビタミン D3 を内部標準として血清サンプルに添加し、メタノール中の ZnSO4 で除タンパクし、2750 g で 10 分間遠心分離し、100 μl を LC-MS の TurboFlow カラム (Thermo Scientific) に注入しました。 /MS。 LC-MS/MS は、Thermo Scientific Vantage TSQ に接続された Thermo Scientific TLX1 システムで構成されていました。 25(OH)D2 と 25(OH)D3 を Thermo Scientific Cyclone P 50 x 1.0 mm カラムで濃縮し、分析カラム Phenomenex Gemini C18 50 x 3.0 mm でバックフラッシュし、分析カラムから勾配で溶出しました。 移動相は、A: 水中の 10 mM NH4Ac および B: メタノール中の 10 mM NH4Ac でした。 ヒト血清に適切な量の 25(OH)D2 および 25(OH)D3 をスパイクして、6 点検量線 (1/x2 の重量) と 3 レベルの QC サンプル (低、中、高) を作成しました。 このメソッドは、NIST 標準 972.25 に対して校正されています。 D3 の C3 エピマーは D3 と共に検出され、2 つを互いに区別することはできませんでした。 検出可能な最低濃度は、D2 と D3 の両方で 0.15 nM でした。 D2 と D3 の値は、6.5 nM を超える場合にのみ考慮されました。
• BRAHMS sFlt-1 および PIGF KRYPTOR アッセイの測定は、製造元の指示に従って、完全に自動化された KRYPTOR コンパクト プラス システム (KRYPTOR PlGF および KRYPTOR sFlt-1; Thermo Fisher Scientific) で実行されました。 BRAHMS sFlt-1 および PlGF KRYPTOR アッセイは、Trace テクノロジーに基づく均一サンドイッチ イムノアッセイです24。 アッセイの合計時間は 9 分 (sFlt-1) と 29 分 (PlGF) で、サンプル量はそれぞれ 9 μl と 70 μl です。 アッセイは、組換えヒトsFlt-1およびPIGFで較正され、Quantikine PIGF ELISA（R&D Systems Europe Ltd、アビンドン、英国）およびsFlt-1 Elecsysアッセイ（Elecsys、ペンツベルク、ドイツ）に対して標準化されています。 メーカーの使用説明書によると、KRYPTOR sFlt-1 アッセイは 22 ～ 90,000 pg/ml の測定範囲をカバーしていました。 検出限界は 22 pg/ml、定量限界 (機能感度) は 29 pg/ml です。 1540 pg/ml の sFlt-1 濃度でのアッセイ内およびアッセイ間の変動は、それぞれ 0.3% および 0.8% です。 2988 pg/ml で 0.5% および 1.1%。 9666 pg/ml では、それぞれ 0.5% と 1.0% です。 KRYPTOR PlGF アッセイは、3.6 ～ 7.000 の測定範囲をカバーします pg/ml。 検出限界は 3.6 pg/ml、定量限界は 6.9 pg/ml です。 35 pg/ml の PlGF 濃度でのアッセイ内およびアッセイ間の変動は、それぞれ 4.6% および 7.3% です。 103 pg/ml では 2.1% と 3.1%、430 pg/ml では 0.9% と 2.3% でした。
• Elecsys sFlt-1 および PIGF アッセイの測定は、製造元の指示に従って、完全に自動化された Elecsys システム (Elecsys、ペンツベルク、ドイツ) で実行されました。 Elecsys アッセイは、電気化学発光技術に基づくサンドイッチ イムノアッセイです。 アッセイの合計時間は 18 分で、サンプル容量は sFlt-1 で 20 μl、PIGF で 50 μl です。 アッセイを組換えヒトPIGFおよびsFlt-1で較正し、Quantikine PIGFおよび血管内皮増殖因子-R1 ELISA(R&D Systems, Minneapolis, MN)に対して標準化する。 メーカーの使用説明書によると、Elecsys sFlt-1 アッセイは 10 ～ 85,000 pg/ml の測定範囲をカバーし、Elecsys PIGF アッセイは 3 ～ 10,000 pg/ml の測定範囲をカバーしています。 検出限界は 10 pg/ml (sFlt-1) および 3 pg/ml (PIGF) です。 量子化の限界は、sFlt-1 で 15 pg/ml、PIGF で 10 pg/ml です。

ビタミン D と血管新生マーカー研究 1:

妊娠初期のビタミン D と血管新生マーカー。 疫学と妊娠初期の流産との関連

• 妊娠初期に採取した 1728 の血清サンプルで、血清 25(OH)D のレベルを LC-MS/MS で調査し、1720 のサンプルで sFlt-1 と PlGF のレベルをイムノアッセイで測定しました。 アンケートと医療ファイルの情報を使用して、妊娠初期の 25(OH)D レベルと sFlt/PlGF に影響を与えた要因を、多重線形回帰とロジスティック回帰によって決定しました。
• 妊娠期間 22 + 0 週より前に収集された 1675 の血清サンプルで、流産のバイオマーカーとしての sFlt-1 および PlGF レベルの予測特性を評価するために分析が行われました (n=59)。
• 妊娠期間 22+0 週より前に収集された 1684 の血清サンプルで、25(OH)D のレベルが、その後自然流産を起こした女性 (n=59) と残りの母集団の間で比較され、選択された共変量で補正されました。