Odense Child Cohort 1의 비타민 D 및 혈관신생 표지자 (VITAM)

종합: Odense 아동 코호트 연구(OCC)는 2010년 1월 1일부터 2012년 12월 31일 사이에 모집된 임산부로 구성된 인구 기반 코호트 연구입니다. 이 기간 동안 오덴세 시에서 임신한 모든 여성이 참여 자격이 있었고 6,707명의 여성이 모집 자료를 가지고 직접 접근했습니다.

이 연구는 헬싱키 선언을 준수했으며 덴마크 남부 지역 과학 윤리 위원회의 승인을 받았습니다. S-20090130. 모든 참가자는 사전 동의를 받았습니다. 6,707명의 임산부 인구 중 2,874명(42.9%)이 2012년 12월 31일까지 OCC에 등록했습니다. 아이들은 18세까지 따라다닐 것입니다.

혈청 샘플은 임신 초기(GA 2-25주), 임신 후기(GA 26-30주), 출생 시 산모 혈청 및 제대혈, 그리고 3개월, 1세, 3세에 일반 검사와 함께 소아로부터 채취되었습니다. 연령.

설문지는 임신 초기, 임신 후기, 출산 후, 소아 임상 검사 시에 가족이 작성했습니다.

건강 변수에 대한 등록 데이터는 덴마크 등록부에서 추가로 사용할 수 있습니다.

목적: 비타민 D 및 혈관신생 마커 연구 1은 임신 중 혈청 바이오마커 25(OH)D와 용해성 Fms 유사 키나아제 1(sFlt-1) 및 태반 성장 인자(PlGF) 사이의 관계와 불리한 결과로서의 유산 위험을 조사합니다. 임신 초기에.

방법:

• 25(OH)D 분석: 액체 크로마토그래피 질량분석법(LC-MS/MS)으로 분석을 수행하기 전까지 혈청을 -80ºC에서 보관했습니다. 25(OH)비타민 D3로 표시된 삼중 중수소를 내부 표준으로 혈청 샘플에 첨가하고 메탄올 내 ZnSO4로 단백질을 제거하고 2750g에서 10분 동안 원심분리한 다음 100μl를 LC-MS의 TurboFlow 컬럼(Thermo Scientific)에 주입했습니다. /MS. LC-MS/MS는 Thermo Scientific Vantage TSQ에 연결된 Thermo Scientific TLX1 시스템으로 구성되었습니다. 25(OH)D2 및 25(OH)D3를 Thermo Scientific Cyclone P 50 x 1.0mm 컬럼에서 농축하고 분석 컬럼 Phenomenex Gemini C18 50 x 3.0mm에서 백플러시하고 분석 컬럼에서 구배로 용출했습니다. 이동상은 A: 물 중 10mM NH4Ac 및 B: 메탄올 중 10mM NH4Ac이었다. 인간 혈청에 적절한 양의 25(OH)D2 및 25(OH)D3를 스파이킹하여 6개 포인트 보정 곡선(1/x2 무게 측정)과 3개 수준의 QC 샘플(낮음, 중간, 높음)을 생성했습니다. 방법은 NIST 표준 972.25에 대해 보정되었습니다. D3의 C3 에피머는 D3와 함께 검출되었으며 둘은 서로 구별할 수 없었다. 검출 가능한 최저 농도는 D2 및 D3 모두에 대해 0.15nM이었다. D2 및 D3의 값은 6.5nM 이상인 경우에만 고려되었습니다.
• BRAHMS sFlt-1 및 PIGF KRYPTOR 분석에 대한 측정은 제조업체의 지침에 따라 완전 자동화된 KRYPTOR compact Plus 시스템(KRYPTOR PlGF 및 KRYPTOR sFlt-1; Thermo Fisher Scientific)에서 수행되었습니다. BRAHMS sFlt-1 및 PlGF KRYPTOR 분석은 Trace 기술24을 기반으로 하는 균질 샌드위치 면역분석입니다. 분석의 총 기간은 9분(sFlt-1) 및 29분(PlGF)이고 샘플 부피는 각각 9μl 및 70μl입니다. 분석은 재조합 인간 sFlt-1 및 PIGF로 보정되고 Quantikine PIGF ELISA(R&D Systems Europe Ltd, Abingdon, UK) 및 sFlt-1 Elecsys 분석(Elecsys, Penzberg, Germany)에 대해 표준화됩니다. 제조업체의 사용 설명서에 따르면 KRYPTOR sFlt-1 분석은 22~90,000pg/ml의 측정 범위를 포함했습니다. 검출 한계는 22pg/ml이고 양자화 한계(기능적 감도)는 29pg/ml입니다. 1540pg/ml의 sFlt-1 농도에서 분석 내 및 분석 간 변동은 각각 0.3% 및 0.8%입니다. 2988pg/ml에서 0.5% 및 1.1%; 및 9666 pg/ml에서 각각 0.5% 및 1.0%. KRYPTOR PlGF 분석은 3.6-7.000의 측정 범위를 다룹니다. pg/ml. 검출 한계는 3.6pg/ml이고 정량 한계는 6.9pg/ml입니다. 35pg/ml의 PlGF 농도에서 분석 내 및 분석 간 변동은 각각 4.6% 및 7.3%입니다. 103pg/ml에서 2.1% 및 3.1%, 430pg/ml에서 각각 0.9% 및 2.3%.
• Elecsys sFlt-1 및 PIGF 분석에 대한 측정은 제조업체의 지침에 따라 전자동 Elecsys 시스템(Elecsys, Penzberg, Germany)에서 수행되었습니다. Elecsys 분석은 전기화학발광 기술을 기반으로 하는 샌드위치 면역분석입니다. 분석의 총 시간은 18분이며 샘플 부피는 sFlt-1의 경우 20µl, PIGF의 경우 50µl입니다. 분석은 재조합 인간 PIGF 및 sFlt-1로 보정되고 Quantikine PIGF 및 혈관 내피 성장 인자-R1 ELISA(R&D Systems, Minneapolis, MN)에 대해 표준화됩니다. 제조업체의 사용 지침에 따르면 Elecsys sFlt-1 분석은 10-85,000pg/ml의 측정 범위를, Elecsys PIGF 분석은 3-10,000pg/ml의 측정 범위를 다룹니다. 검출 한계는 10pg/ml(sFlt-1) 및 3pg/ml(PIGF)입니다. 양자화 한계는 sFlt-1의 경우 15pg/ml, PIGF의 경우 10pg/ml입니다.

비타민 D 및 혈관신생 표지자 연구 1:

임신 초기의 비타민 D 및 혈관 신생 마커. 임신 초기 유산에 대한 역학 및 연관성

• 임신 초기에 수집된 1728개의 혈청 샘플에서 혈청 25(OH)D 수준을 LC-MS/MS로 조사하고 sFlt-1 및 PlGF 수준을 면역분석법으로 결정했습니다. 임신초기 25(OH)D와 sFlt/PlGF에 영향을 미치는 요인을 다중선형회귀와 로지스틱회귀로 알아보기 위해 설문지와 의료파일 정보를 이용하였다.
• 재태 주령 22+0주 이전에 수집된 1675개의 혈청 샘플에서 유산의 바이오마커로서 sFlt-1 및 PlGF 수준의 예측 특성을 평가하기 위해 분석을 수행했습니다(n=59).
• 재태 연령 22+0주 이전에 수집된 1684개의 혈청 샘플에서 이후에 자연 유산을 겪은 여성(n=59)과 선택된 공변량에 대해 보정된 나머지 인구 사이의 25(OH)D 수준을 비교했습니다.