GCF および血清中の MMP-8 レベルの推定値と、冠状動脈弁が進行したフラップおよび上皮下結合組織移植片を移植した後の創傷治癒および臨床転帰との相関、不況欠損の根元被覆: 臨床生化学的研究

調査の必要性:

上皮下結合組織移植 (CAF+SCTG) 技術を用いた冠状に進行した皮弁は、歯根を覆う最も成功したモダリティの 1 つであることが証明されています。 あらゆる外科的処置の成功は、創傷治癒にかかっています。

外科的処置後の創傷治癒は、複雑で高度に調整されたイベントであり、止血段階、炎症段階、新しい組織形成段階、最終的なリモデリング段階を含み、コラーゲンが豊富な細胞外マトリックス (ECM) と高密度で安定した組織が残ります.2 創傷治癒中、血栓は将来の ECM の基礎を提供します。 ECM は、細胞の移動、接着、創傷収縮、および上皮化を促進するために重要な役割を果たします。 ECM のこの重要な役割は、まとめてマトリックス メタロプロテイナーゼ (MMP) として知られる酵素のグループによって維持されます。 MMP は創傷治癒において中心的な役割を果たします.3,4 これらの MMP の調節の失敗は、不完全な創傷治癒と相関しています.3,4 MMP（つまり コラゲナーゼ、ゼラチナーゼ、マトリライシン、ストロメリシン、および膜型 MMP) は、創傷治癒において細胞外マトリックス (ECM) を切断できる亜鉛依存性エンドペプチダーゼのファミリーです.3 MMP-8 は、主に好中球によって産生され、口腔上皮細胞、形質細胞、線維芽細胞などの他の細胞によっても産生されます.7 MMP-8 は、骨髄における PMN (多形核細胞) 前駆細胞の発生の骨髄細胞段階で発現します。 PMN.30 の特定の顆粒内に潜在酵素 (pro-mmp-8) として保存されます。 プロ MMP-8 は、脱顆粒中の活性化 PMN から急速に放出され 31、システイン スイッチ機構を介して活性化され、活性型の酵素を生成します 29。コラーゲンおよび歯肉の結合組織に豊富に見られる III 型コラーゲン5。 MMP-8 は、ゼラチンタイプ VII、VIII、および X コラーゲンを分解します。 MMP-8 は、急性創傷治癒に重要であることが示唆されています.6 手術後の創傷治癒進行の評価は重要です。 現在、プロービングなどの鈍い代理マーカーが使用されています。 これらのマーカーの制限は、それが進行中の活動ではなく、治癒の歴史を表すことです. 治癒の特徴はコラーゲンのリモデリングであるため、創傷治癒に関連するサイトカイン プロファイルを研究することは興味深いことです。 このような知識は、治癒の表現型を反映したより良い方法で創傷治癒を研究するための新しい診断戦略につながる可能性があります。

歯周外科手術後の通常の創傷治癒におけるコラゲナーゼの機能は、この分野での研究が不足しているため、比較的明確に定義されていません.10 ほとんどの研究は、歯周病の病因中の MMP-8 の特徴付けと歯周治療後の MMP-8 レベルの変化に集中しています。

Nwomehらは、閉塞包帯から創傷浸出液を収集することにより、皮膚創傷治癒からのMMP-8を研究しました. 彼は、MMP-8 が 4 日目にピークに達し、約 1 週間持続したことを指摘しました。 MMP-8 の過剰発現は、治癒不良につながります.5 慢性創傷は、急性創傷の 30 倍の MMP を持っています。 これらの創傷における過剰なプロテアーゼ発現を阻害することで、将来の創傷治癒治療が可能になる可能性があります.5 口腔粘膜の軟部組織治癒の細胞面についてはほとんどわかっていません。 口腔治癒が皮膚創傷に類似しているという仮定は、皮膚創傷の瘢痕形成の減少2、口腔創傷におけるIL-1の役割、および皮膚創傷におけるIL-1の欠如11、皮膚創傷におけるより速い治癒などの特定の微妙な違いがあるため、混乱を引き起こす可能性があります。口腔創傷、治癒を助ける唾液の存在など。 全体として、口腔創傷の独特の治癒パターンの違いについては、まだ憶測とあいまいさの問題です.

分子レベルで創傷治癒を理解することは、治癒の遅れを防ぐことができる治療戦略を開発するための詳細な基礎を提供します.2 歯周病学に関する第 10 回ヨーロッパ ワークショップのコンセンサス レポートで推奨されているように、より良い再生アプローチのためにサイトカイン、ケモカイン、および細胞内シグナル伝達ネットワークを特定するために、細胞レベルでより多くの研究が必要である 10、現在の臨床試験が計画されました。

歯周研究のこの分野ではかなりの裂孔があるため、この研究は、不況をカバーするために CAF + SCTG 手術後の術後治癒中の MMP-8 レベルを評価し、創傷治癒に関与するメカニズムをよりよく特定するために計画されています。 この情報は、通常の外科的創傷の治癒経験の変化を防ぐために使用できます。

6.2 文献のレビュー: Sanctis et al. (2011) 根の被覆における結合組織移植片 (CTG) の使用を決定するための研究を実施しました。 結果は、SCTG に関連する CAF が不況の欠陥の治療における有効なアプローチであることを証明しました。 ( 1999 ) コラゲナーゼ (MMP-8、MMP-1) の供給源と、正常な治癒する創傷および慢性の非治癒性潰瘍におけるそれらの活性を評価しました。 結果は、MMP-8 が正常治癒創傷に存在する主要なコラゲナーゼであることを示し、慢性非治癒潰瘍では MMP-1,8 のレベルが増加し、TIMP-1 のレベルが減少した Armstrong ら (2002) は、主要なコラゲナーゼとしての創傷治癒。 彼は、正常な創傷治癒中の 4 日目と 7 日目の MMP-8 のピークレベルの発現を詳しく説明しました。

Hammerle et al (2014) は、口腔内の軟部組織創傷治癒の生物学的プロセスをレビューしたコンセンサス レポートで、歯、インプラント、および無歯顎における口腔軟部組織の治癒は、皮膚の創傷治癒およびヒトの組織学的データと同じ段階に従うことを発見しました。限定。

Sorsa et al (2010) は、歯肉溝液マトリックスメタロプロテイナーゼ (MMP-8) 検出のための 4 つの方法、すなわち、免疫蛍光アッセイ、ディップスティックテスト、dentoAnalyser 免疫ブロットアッセイ、および ELISA キットを研究で比較し、すべてのアッセイは同等であり、dentoAnalyser は同等であると結論付けました。歯周およびインプラント周囲の診断と研究における最初の定量的 MMP-8 チェアサイド テスト デバイスの 1 つです。

Fernandez et al (2007) は、皮膚の創傷治癒における MMP_8 の役割を調査する研究を実施しました。 彼らは、MMP-8 -/- マウスの創傷閉鎖の大幅な遅延と、創傷の炎症反応の変化を観察しました。 彼らは、MMP-8が炎症の解消による創傷修復に関与し、創傷治癒欠陥を治療するための新しい戦略を開発する可能性を開くことを示しました.

Mohd H et al (1999)19 は、MMP-8 および MMP-3 の定量化のために GCF (Gingival Crevicular Fluid) サンプルを評価することにより、誘導組織再生手順に続く早期治癒段階での MMP-8 および MMP-3 のレベルを評価しました。 彼らは、膜の存在が MMP-3 および -8 のレベルを増加させ、宿主系による生体再吸収性膜の再吸収に関連しているように見えることを発見しました。

Dickinson et al (2013) は、組織学的および免疫学的手法を使用して、イヌの歯槽骨上歯周欠損モデルにおける歯周再生の初期イベントを研究し、歯周創傷再生における細胞再生イベントの活性化は急速であると結論付けました。 、歯周靭帯、および結合組織) は、14 日以内に大まかに概説されます。

Shaw et al (2009) は、創傷修復の概要を概説し、創傷修復の複雑なプロセスを説明しました。 彼は、細胞外マトリックスのリモデリングが MMP の微妙なバランスによって達成されることを強調しました。

Teles et al (2010) は、歯周病の健康な被験者と歯周炎の被験者の GCF バイオマーカーと歯肉縁下の細菌種のレベルを測定しました。 彼は、歯周炎被験者の臨床的に健康な部位は、健康な被験者の部位よりも高いレベルの GCF バイオマーカーと歯周病原体を示すと結論付けました。

6.3 研究の目的: この研究の主な目的は、GCF および血清中の MMP-8 レベルに対するミラーズ クラス I および II 歯肉退縮部位の歯根被覆に対する CAF+SCTG の効果と影響を評価することです。

二次的な目的は、カテゴリ的に評価された治療結果を予測する際のベースライン MMP-8 レベルの有用性をテストし、ルート カバレッジの CAF + SCTG 後の早期創傷治癒パターンと相関させることです。

材料および方法：

7.1 データのソース:

外来の歯周病学科、クリシュナデヴァラヤ歯科科学大学および病院を訪れ、包含および除外基準を満たす患者は、研究のためにスクリーニングおよび選択されます。

実験計画は、包含および除外基準に従って研究のために募集される合計 15 ～ 20 のサイトで構成されます。 患者は、研究に使用される外科的処置および材料について知らされ、インフォームドコンセントが患者から得られる。

7.2 データの収集方法:

サンプルサイズ：

この前向き研究は、上顎前弓にミラーのクラス I および II 後退欠損を有する 15 ～ 20 人の患者を対象とした単一の盲検比較臨床対照試験です。

サンプリング技術

• 初期段階でのスクリーニング検査の後、各被験者は、口腔衛生の指示、スケーリング、および超音波スケーラーと手動キュレットを使用した根の計画のセッションを受けます。
• 退縮欠損の外科的治療は、患者が歯肉縁上のプラークコントロールの適切な基準を示すことができるまで予定されません (プラークスコア <20% O Leary 1972)。 以下の臨床パラメーターは、UNC-15 プローブ (ノースカロライナ大学 -15 歯周プローブ - Hu Friedy、シカゴ、イリノイ州、米国) を使用して最も近いミリメートルで記録され、測定プローブを配置するための咬合ステントを測定します。アルジネートの印象から得られた鋳造モデルの低温硬化アクリル樹脂。 それは、治療される歯の咬合面と、近心方向および遠位方向の少なくとも1本の歯の咬合面を覆うように構築されます。 また、歯の​​冠状 3 分の 1 を覆うために、頬側および舌側の表面で根尖方向に拡張されます。 3 つの溝は、基準点 15 として近頬側、中央頬側、および遠位頬側の部位でステントにマークされます。月。
• GCF サンプルは、ルート カバレッジ プロシージャに指定された歯の歯肉溝 (ネガティブ コントロール) および臨床的に健康な歯肉を持つ別の歯 (ポジティブ コントロール) から収集されます。 サンプルは、ベースライン時およびその後の術後フォローアップ時 (4 日目、7 日目、および 6 か月間) に収集されます。

臨床測定:

次の臨床測定値は、ベースライン時および 6 か月後に記録されます。

1. 歯肉退縮深度 (GRD)。CEJ と歯肉縁の間の距離として測定されます。
2. 歯肉退縮幅 (GRW)、近心歯肉縁と遠位歯肉縁の間の距離として測定されます。
3. プロービング深度 (PD) は、歯肉縁から歯肉溝の基部までの距離として測定されます.17
4. クリニカル アタッチメント レベル (CAL)、CEJ (セメントエナメル接合部) から歯肉溝の基部までの測定値.17
5. 粘膜歯肉接合部から歯肉縁までの距離として測定された角化組織のアピコ冠状幅 (KTW)。
6. 創傷治癒指数 (WHI) は、4 日目と 7 日目に評価されます ( Lien-Hui Huang、2005 年)。
7. Plaque Index (Sillness and Loe, 1964)
8. 歯肉指数 (Loe and Silness, 1963)
9. 歯肉出血指数（アイナモとベイ、1975）

外科的処置:

• 手術を開始する前に、バッカル アタッチメント ロスに近い歯根表面にミニ 5 グレイシー キュレットを装着し、滑らかで硬い歯根表面が得られたら、機械的治療を終了します.16
• No. 15 BP (Bard Parker) ブレードを使用した 2% リグノカイン塩酸塩 (Ligox 2%、Indoco Remedies Ltd、ゴア、インド) による局所麻酔下で、治療した歯の頬側で縁下切開を行い、3 mm 延長します。近心および遠心歯間歯肉で水平に。 関与する歯の頬側で溝内切開が行われます。 粘膜歯肉接合部を越えて伸びる、2 つの斜めの分岐解放切開が続きます。
• 小さな骨膜エレベーターを使用して、MGJ (粘膜歯肉接合部) まで全層フラップを持ち上げます。 続いて、部分的な厚さのフラップが粘膜歯肉接合部を超えて持ち上げられ、緊張することなく CEJ を完全に覆うフラップの受動的な冠状変位が可能になります.16
• 根の計画は鋭いキュレットを使用して行われます。治療された歯に隣接する乳頭は脱上皮化され、SCTG が配置されるレシピエント ベッドの出血面が作成されます。
• 厚さ 2 mm の口蓋結合組織移植片からなるドナー サイトは、「トラップ ドア」技術を使用して、小臼歯から第 1 大臼歯領域まで採取されます。 結合組織移植片は、受容部位に 4-0 吸収性縫合糸で所定の位置に固定されます。
• フラップは、4-0 吸収性縫合糸を使用して頂端 - 冠状方向に切開を解放する際に結節縫合が続き、冠状位置でスリング縫合で安定化されます.14
• 手術部位は、非オイゲノール歯周ドレッシング材で保護されます。 術後の指示は、0.2% クロルヘキシジン洗口液を 1 日 3 回、3 週間、イブプロフェン 600 mg を 3 日間の疼痛管理のために使用することです。 33
• 縫合糸は手術の7日後に除去され、この後、患者は柔らかい歯ブラシを使用して治療された歯の機械的洗浄を再指導されます.33
• 口腔衛生指導の想起と強化は 2 か月ごとに行われます。

歯肉溝液 (GCF) サンプリングと ELISA:

• 被験者は歯科用椅子に直立姿勢で快適に座り、選択した部位は十分に照らされます。
• GCFサンプルは、プラークインデックスの後、サンプルの組織刺激や血液汚染を引き起こす他の臨床記録の前に収集されます.19 手術後 4 日目と 7 日目の経過観察中に、歯周包帯を優しく取り除き、歯肉溝から GCF サンプルを採取します。
• 風でやさしく乾かした後、辺縁の歯肉に触れずに歯肉縁上のプラークを取り除きます。 領域は、唾液の混入を防ぐためにコットンロールで隔離され、軽度の抵抗が30秒間感じられるまで、標準的な紙片（ペリオ紙; oraflow Inc.、Smithtown、NY、USA）を隙間に挿入することによってGCFが収集されます.19
• ＧＣＦサンプル容量は、較正された器具（Ｐｅｒｉｏｔｒｏｎ ８０００ Ｐｒｏｆｌｏｗ Ｉｎｃ．、Ａｍｉｔｙｖｉｌｌｅ、ＮＹ、ＵＳＡ）ＴＭで測定され、その後、標準曲線を参照することによって読み値が実際の容量（μｌ）に変換される。 選択した部位からのストリップは、200(μl)のリン酸緩衝生理食塩水を含むマイクロ遠心チューブに移されます.19

血清サンプリング:

• 朝、12時間絶食した後、20ゲージ針と2ml注射器を使用して前肘窩から8ミリリットル(8ml)の血液を採取し、直ちに実験室に移す。
• 血液サンプルを室温で 1 時間凝固させ、3000 rpm で 15 分間遠心分離することにより血液から血清を抽出します。 血清サンプルを直ちにプラスチック製バイアルに移し、酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）キットを使用してアッセイ 34 を実施するまで、-80℃で保存します。

結果：

測定される主要な結果は次のとおりです。

• ベースライン時の GCF および血清中の MMP-8 レベルと、その後の CAF+SCTG 手順後の術後フォローアップ (4、7、および 6 か月)。
• ベースラインおよび手術後 4、7、6 か月後の GCF サンプルの定量分析。
• ベースラインおよび手術後 4、7、6 か月後の GCF 値と血清 MMP-8 値の相関。

測定される二次的結果は次のようになります。

1. 創傷治癒指数（WHI）は4日目と7日目に評価されます
2. 歯肉後退の深さ (GRD)
3. 歯肉後退幅 (GRW)
4. プロービング深度 (PD)
5. クリニカル アタッチメント レベル (CAL)
6. 角化組織のアピコ冠状幅 (KTW)
7. プラーク指数、歯肉指数、歯肉出血指数

上記のすべてのパラメーターは、MMP-8 レベルと相関します。

統計分析

得られた値は、ANOVA テストを使用して GCF と血清の間で比較されます。 ベースライン値からの異なる時間間隔での平均差は、マンホイットニー U 検定を使用して個別に検定されます。 < 0.05 の「p」値は、統計的に有意と見なされます。