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魚油由来のN-3多価不飽和脂肪酸と細胞外小胞 (HI-FIVE)

2022年11月4日 更新者:Professor Parveen Yaqoob, MA, DPhil, RNutr, FAfN、University of Reading

魚油由来のN-3多価不飽和脂肪酸が細胞外小胞の生成と機能活性に及ぼす影響

N-3 多価不飽和脂肪酸 (n-3 PUFA) は、脂っこい魚や魚油に豊富に含まれており、さまざまなリスク要因を修正することで、心血管疾患 (CVD) のリスクを軽減する役割を果たしていることが示唆されています。血中脂肪、血液凝固、血管機能、炎症など。 細胞外小胞 (EV) は、さまざまな細胞が活性化または損傷したときに放出される小さな粒子です。 血液中のEVの数が多いと、CVDのリスクが高くなります。これは、CVDに関与する多くのプロセスに影響を与える可能性のある「生物活性」成分を運ぶためであると考えられています. ただし、n-3 PUFA の消費と循環 EV との関係を調査した臨床試験はほとんどありません。 この研究は、EVの生成と機能活動に対する食事n-3 PUFAの影響を調査することを目的としており、心血管の健康に対するn-3 PUFAの利点に関する新しい洞察を提供します。

調査の概要

詳細な説明

提案された研究は、無作為化、二重盲検、プラセボ対照のクロスオーバー介入です。 中等度の CVD リスクの被験者 (40 ~ 70 歳) には、魚油 (1.8 g/d n-3 PUFA) またはプラセボ (高オレイン酸ベニバナ油) を 12 週間補給します。 12 週間のウォッシュアウトの後、別の介入にクロスオーバーしてさらに 12 週間。 各介入の前後に血液サンプルを採取します。 n-3 PUFAの被験者の習慣的な摂取量を評価するために、食事頻度アンケートが実施されます。 被験者はまた、n-3 脂肪酸の低消費を維持し、すべてのサプリメントの使用を控え、研究中の体重を維持することが期待されます。 用量は、内皮由来 EV (EEV) の数の減少と血小板由来 EV (PEV) の数の減少の傾向を示した以前の研究に基づいており、n-3 PUFA の有益な効果が得られる用量プラークの安定性について報告されています。 実験的な作業は、2 つの主要なストランドに従います。 最初のストランドでは、n-3 PUFA 補給が血漿からの総 EV の特性と機能活性に及ぼす影響を調べます。 2 番目のストランドでは、被験者から採取され、in vitro で刺激された血小板からの PEV の生成に対する n-3 PUFA の影響を調べます。生成されたPEVは、その後、その組成と機能活性について評価されます。 この実験計画により、血液から直接採取した全 EV の組成と活性、および PEV の生成と活性の両方を同時に調査できます。 私たちの以前の研究に基づいて、5% の両側有意水準と 90% の検出力で魚油補給後の EV 数の 10% 減少を検出するには 27 人の被験者が必要であり、検出力には 34 人の被験者が必要です。 95%。 また、以前のデータに基づいて、血栓形成の 10% の違いを検出するために 22 人の被験者が 95% の検出力を与え、30 人の被験者が血小板凝集およびホスファチジルセリン (PS) 曝露に対する n-3 PUFA の有意な効果を検出する必要があります。 15%の脱落率を考慮し、EVの数を10%削減して95%のパワーを目指すと、合計40人の被験者を募集します。

研究の種類

介入

入学 (実際)

42

段階

  • 適用できない

連絡先と場所

このセクションには、調査を実施する担当者の連絡先の詳細と、この調査が実施されている場所に関する情報が記載されています。

研究場所

      • Reading、イギリス、RG6 6AP
        • University of Reading

参加基準

研究者は、適格基準と呼ばれる特定の説明に適合する人を探します。これらの基準のいくつかの例は、人の一般的な健康状態または以前の治療です。

適格基準

就学可能な年齢

40年~70年 (アダルト、OLDER_ADULT)

健康ボランティアの受け入れ

はい

受講資格のある性別

全て

説明

包含基準:

  • 40~70歳
  • 非喫煙者
  • 心血管疾患のリスクが中程度

    • リスクは、「QRISK2」と呼ばれるオンライン計算機によって評価されます。 このオンライン計算機 (https://qrisk.org/2016/)、 伝統的な危険因子(年齢、収縮期血圧、喫煙状況、総血清コレステロールと高密度リポタンパク質コレステロールの比率)を、肥満度指数、民族性、欠乏の測定、家族歴とともに使用すると、今後10年以内に心臓発作または脳卒中。
    • 10% ~ 20% の被験者は、中程度のリスクがあると見なされます。

除外基準:

  • BMI:<18.5kg/m2
  • 貧血(ヘモグロビン濃度が男性で12.5g/L未満、女性で11.5g/L未満)
  • 高脂血症(総コレステロール濃度>8mmol/L)
  • -糖尿病(診断または空腹時グルコース濃度> 7 mmol / L)またはその他の内分泌障害
  • -狭心症、脳卒中、または過去12か月の血管疾患
  • 腎臓、胃腸、呼吸器、肝臓または腸の病気
  • 炎症性疾患
  • 高血圧、高脂血症、炎症、うつ病、または甲状腺疾患の薬物治療を受けてください。
  • アスピリン、イブプロフェン、またはその他の非ステロイド性抗炎症薬 (NSAID) を月に 4 回以上、または研究の前の週に 1 回服用する
  • トリフルサール、クロピドグレル、ワルファリンなど、他の抗血小板薬または抗凝固薬を服用してください。
  • アレルギーがある
  • 喫煙(電子タバコとニコチン製品を含む)
  • アルコールの誤用または摂取は、男性で週21単位以上、女性で週15単位以上、またはアルコール乱用の履歴がある
  • 脂っこい魚や栄養補助食品を定期的に摂取する
  • 減量レジメンの開始または実行を計画している
  • 激しい有酸素運動 (>20 分、週 3 回)
  • 妊娠中、授乳中、または妊娠可能年齢に達していて、信頼できる避妊法(禁欲を含む)を使用していない女性
  • 過去3か月以内に別の臨床試験に参加したことがある

研究計画

このセクションでは、研究がどのように設計され、研究が何を測定しているかなど、研究計画の詳細を提供します。

研究はどのように設計されていますか?

デザインの詳細

  • 主な目的:防止
  • 割り当て:ランダム化
  • 介入モデル:クロスオーバー
  • マスキング:トリプル

武器と介入

参加者グループ / アーム
介入・治療
ACTIVE_COMPARATOR:介入
フィッシュオイルカプセル
各サービングには 360mg のエイコサペンタエン酸 (EPA)、270mg のドコサヘキサエン酸 (DHA) が含まれており、合計サプリメントは 1 日あたり 1.8 g です n-3 PUFA を 12 週間
PLACEBO_COMPARATOR:プラセボ
高オレインベニバナ油カプセル
高オレインベニバナ油カプセル 12 週間

この研究は何を測定していますか?

主要な結果の測定

結果測定
メジャーの説明
時間枠
ナノ粒子追跡分析 (NTA) によって検出された無血小板血漿 (PFP​​) 中の循環総 EV 数
時間枠:12週間の摂取期間後に国税庁が検出したPFPの循環総EV数の変化
Izon qEV カラム (Izon Science Ltd, Oxford, United Kingdom) を使用したサイズ排除クロマトグラフィー (SEC) により、循環 EV を最初に単離して画分 7 ~ 9 を得ました。 その後、NanoSight 300 (Malvern、エイムズベリー、英国) で分析する前に、粒子の推奨濃度範囲 (1 ~ 10*10^8 小胞/ml) を維持するために画分を PBS で希釈しました。 各分析では、カメラ レベル 13 で、それぞれ 60 秒間の 5 つのビデオがキャプチャされました。 最後に、小さなリポタンパク質による干渉を最小限に抑えるために、NTA のしきい値を 70 nm に設定しました。
12週間の摂取期間後に国税庁が検出したPFPの循環総EV数の変化
フローサイトメトリー (FCM) によって検出された無血小板血漿 (PFP​​) 中の総ホスファチジルセリン陽性 EV (PS + EV) の数
時間枠:12週間の摂取期間後にFCMによって検出されたPFPの合計PS + EV数の変化
5 μl の PFP を、5 μl の FcR ブロッキング試薬 (Miltenyi Biotec Ltd、サリー、イギリス) およびアネキシン V バッファーを含む粘着性のないマイクロ遠心チューブ (Alpha Laboratories Ltd、ハンプシャー、イギリス) に加え、暗所で 15 分間インキュベートしました。室温。 次いで、抗体およびアイソタイプが一致する対照を添加し、試料を暗所で室温でさらに15分間インキュベートした。 インキュベーション後、サンプルを 200 μl のアネキシン V バッファーで希釈し、FACS フロー チューブ (BD Biosciences, Wokingham, United Kingdom) に移し、FCM で分析できるようにしました。 PS + EVs は、APC 蛍光でトリガーすると、アネキシン V + EVs として識別されました。
12週間の摂取期間後にFCMによって検出されたPFPの合計PS + EV数の変化
蛍光 FCM によって検出された PFP における循環 EVs 亜集団の特徴付け
時間枠:摂取期間12週間後の蛍光FCMによるPFPの循環EVサブポピュレーション数の変化
5 μl の PFP を、5 μl の FcR ブロッキング試薬 (Miltenyi Biotec Ltd、サリー、イギリス) およびアネキシン V バッファーを含む粘着性のないマイクロ遠心チューブ (Alpha Laboratories Ltd、ハンプシャー、イギリス) に加え、暗所で 15 分間インキュベートしました。室温。 次いで、抗体およびアイソタイプが一致する対照を添加し、試料を暗所で室温でさらに15分間インキュベートした。 インキュベーション後、サンプルを 200 μl のアネキシン V バッファーで希釈し、FACS フロー チューブ (BD Biosciences, Wokingham, United Kingdom) に移し、FCM で分析できるようにしました。 血小板由来 EV (PDEV) は、APC 対 PE 象限プロットで CD41-PE についても陽性に染色されたアネキシン V + EV として識別され、内皮由来 EV (EDEV) は、CD105 についても陽性に染色されたアネキシン V + EV として識別されました。 - APC 対 PB 象限プロットの eFluor450。
摂取期間12週間後の蛍光FCMによるPFPの循環EVサブポピュレーション数の変化

二次結果の測定

結果測定
メジャーの説明
時間枠
PFP(トロンビン生成のラグタイム)における循環EVの血栓形成促進活動
時間枠:12週間の摂取期間後のPFPにおける循環EVの血栓形成促進活性(トロンビン生成のラグタイム)の変化
市販のプレートベースのトロンビン生成アッセイを使用して、標準のプールされた小胞および無血小板血漿(無小胞血漿またはVFPと呼ばれる)または同じVFPでのトロンビン生成を測定しましたが、被験者からの循環EVが追加されました介入研究。 これにより、介入研究からのサンプルにおける循環 EV に特に起因する TF 依存性トロンビン生成の評価が可能になりました。 結果は 5 つの変数として提示されました。 (ii) ピーク トロンビン濃度 (nM); (iii) ピークに達するまでの時間 (分); (iv) = [ピーク高さ/(ピークまでの時間 - 遅延時間)] として定義される速度指数、および (v) 内因性トロンビン ポテンシャル (ETP) として定義される曲線下面積 (nM トロンビン × 分として表される)
12週間の摂取期間後のPFPにおける循環EVの血栓形成促進活性(トロンビン生成のラグタイム)の変化
PFP(ピークトロンビン濃度)における循環EVの血栓形成促進活動
時間枠:12週間の摂取期間後のPFPにおける循環EVのプロトロンビン活性(ピークトロンビン濃度)の変化
市販のプレートベースのトロンビン生成アッセイを使用して、標準のプールされた小胞および無血小板血漿(無小胞血漿またはVFPと呼ばれる)または同じVFPでのトロンビン生成を測定しましたが、被験者からの循環EVが追加されました介入研究。 これにより、介入研究からのサンプルにおける循環 EV に特に起因する TF 依存性トロンビン生成の評価が可能になりました。 結果は 5 つの変数として提示されました。 (ii) ピーク トロンビン濃度 (nM); (iii) ピークに達するまでの時間 (分); (iv) = [ピーク高さ/(ピークまでの時間 - 遅延時間)] として定義される速度指数、および (v) 内因性トロンビン ポテンシャル (ETP) として定義される曲線下面積 (nM トロンビン × 分として表される)
12週間の摂取期間後のPFPにおける循環EVのプロトロンビン活性(ピークトロンビン濃度)の変化
PFP(トロンビン濃度がピークになるまでの時間)における循環EVの血栓形成促進活動
時間枠:12週間の摂取期間後のPFPにおける循環EVの血栓形成促進活性(トロンビン濃度がピークになるまでの時間)の変化
市販のプレートベースのトロンビン生成アッセイを使用して、標準のプールされた小胞および無血小板血漿(無小胞血漿またはVFPと呼ばれる)または同じVFPでのトロンビン生成を測定しましたが、被験者からの循環EVが追加されました介入研究。 これにより、介入研究からのサンプルにおける循環 EV に特に起因する TF 依存性トロンビン生成の評価が可能になりました。 結果は 5 つの変数として提示されました。 (ii) ピーク トロンビン濃度 (nM); (iii) ピークに達するまでの時間 (分); (iv) = [ピーク高さ/(ピークまでの時間 - 遅延時間)] として定義される速度指数、および (v) 内因性トロンビン ポテンシャル (ETP) として定義される曲線下面積 (nM トロンビン × 分として表される)
12週間の摂取期間後のPFPにおける循環EVの血栓形成促進活性(トロンビン濃度がピークになるまでの時間)の変化
PFP(速度指数)における循環EVの血栓形成促進活動
時間枠:12週間の摂取期間後のPFPにおける循環EVの血栓形成促進活性(速度指数)の変化
市販のプレートベースのトロンビン生成アッセイを使用して、標準のプールされた小胞および無血小板血漿(無小胞血漿またはVFPと呼ばれる)または同じVFPでのトロンビン生成を測定しましたが、被験者からの循環EVが追加されました介入研究。 これにより、介入研究からのサンプルにおける循環 EV に特に起因する TF 依存性トロンビン生成の評価が可能になりました。 結果は 5 つの変数として提示されました。 (ii) ピーク トロンビン濃度 (nM); (iii) ピークに達するまでの時間 (分); (iv) = [ピーク高さ/(ピークまでの時間 - 遅延時間)] として定義される速度指数、および (v) 内因性トロンビン ポテンシャル (ETP) として定義される曲線下面積 (nM トロンビン × 分として表される)
12週間の摂取期間後のPFPにおける循環EVの血栓形成促進活性(速度指数)の変化
PFP(内因性トロンビン電位)における循環EVの血栓形成促進活動
時間枠:12週間の摂取期間後のPFPにおける循環EVの血栓形成促進活性(内因性トロンビン電位)の変化
市販のプレートベースのトロンビン生成アッセイを使用して、標準のプールされた小胞および無血小板血漿(無小胞血漿またはVFPと呼ばれる)または同じVFPでのトロンビン生成を測定しましたが、被験者からの循環EVが追加されました介入研究。 これにより、介入研究からのサンプルにおける循環 EV に特に起因する TF 依存性トロンビン生成の評価が可能になりました。 結果は 5 つの変数として提示されました。 (ii) ピーク トロンビン濃度 (nM); (iii) ピークに達するまでの時間 (分); (iv) = [ピーク高さ/(ピークまでの時間 - 遅延時間)] として定義される速度指数、および (v) 内因性トロンビン ポテンシャル (ETP) として定義される曲線下面積 (nM トロンビン × 分として表される)
12週間の摂取期間後のPFPにおける循環EVの血栓形成促進活性(内因性トロンビン電位)の変化
プレートベースの血小板凝集アッセイによって検出された Ex Vivo アゴニスト刺激血小板活性化
時間枠:摂取期間12週間後のex vivo血小板活性化の変化
血小板機能に対する n-3 PUFA 補給の影響を調べるために、さまざまなアゴニストの幅広い濃度の試験を可能にする 96 ウェル ハイスループット凝集法を使用しました。 アゴニスト (ADP、EPI、TRAP-6、および U46619) を含む、事前に準備された 96 ウェル マイクロプレートを使用した血小板凝集アッセイでは、各研究訪問からの多血小板血漿 (PRP) および乏血小板血漿 (PPP) が使用されました。 各アゴニストに応じた用量反応曲線が得られ、結果はLogEC50(アゴニストの対数濃度、M、最大凝集と最小凝集の中間の反応を与える)として表された。
摂取期間12週間後のex vivo血小板活性化の変化
プレートベースの血小板凝集アッセイ (CRP-XL Log EC50) によって検出された Ex Vivo アゴニスト刺激血小板活性化
時間枠:摂取期間12週間後のex vivo血小板活性化の変化
血小板機能に対する n-3 PUFA 補給の影響を調べるために、さまざまなアゴニストの幅広い濃度の試験を可能にする 96 ウェル ハイスループット凝集法を使用しました。 アゴニスト (CRP-XL) を含む、事前に準備された 96 ウェル マイクロプレートを使用した血小板凝集アッセイでは、各研究訪問からの多血小板血漿 (PRP) および乏血小板血漿 (PPP) が使用されました。 各アゴニストに応じた用量反応曲線が得られ、結果はLogEC50(アゴニストの対数濃度、mg/ml、最大凝集と最小凝集の中間の反応を与える)として表された。
摂取期間12週間後のex vivo血小板活性化の変化
刺激された血小板の上清から調製された血小板由来細胞外小胞(PDEV)の血栓形成促進活性(血栓形成のエンドポイントと最大値)
時間枠:12週間の摂取期間後に刺激された血小板の上清から調製されたPEVの血栓形成促進活性(エンドポイントおよび血栓形成の最大値)の変化
エクスビボ血栓形成は、刺激された血小板からインビトロで生成されたPDEVを流動中の全血に添加することによって測定された。 結果は 3 つの変数として提示されました。(i) ex vivo 血栓形成 (FU) のエンドポイント。 (ii) ex vivo 血栓形成 (FU) のエンドポイント。 (iii) 曲線下面積。
12週間の摂取期間後に刺激された血小板の上清から調製されたPEVの血栓形成促進活性(エンドポイントおよび血栓形成の最大値)の変化
刺激された血小板の上清から調製された血小板由来細胞外小胞(PDEV)の血栓形成促進活性(曲線下面積)
時間枠:12週間の摂取期間後に刺激された血小板の上清から調製されたPEVの血栓形成促進活性(曲線下面積)の変化
エクスビボ血栓形成は、刺激された血小板からインビトロで生成されたPDEVを流動中の全血に添加することによって測定された。 結果は 3 つの変数として提示されました。(i) ex vivo 血栓形成 (FU) のエンドポイント。 (ii) ex vivo 血栓形成 (FU) のエンドポイント。 (iii) 曲線下面積。
12週間の摂取期間後に刺激された血小板の上清から調製されたPEVの血栓形成促進活性(曲線下面積)の変化
循環 EV 総脂質分析
時間枠:摂取期間12週間後のEVの総脂質の変化
凍結 PFP の 500 μl アリコートを、ローラー ミキサーを使用して室温で解凍し、EV の分離と精製のために SEC にかけました。 画分7~9を一緒にプールし、プールした画分800μlを全脂質抽出およびメチルエステル化のために調製した。 次に、EV 総脂質メチルエステルを、Hewlett-Packard 6890 シリーズ GC (Hewlett-Packard、カリフォルニア州、米国) のガスクロマトグラフィーにより、次のプロトコルで分析しました。血漿および EV 分析の分割比は 30:1 に設定されました。 注入量は、それぞれ血漿で 1μl、EV で 5μl でした。 インジェクターと検出器の両方の温度を 300°C に保ち、温度プログラムは初期温度 115°C で 2 分間、10°C/min で 200°C まで上昇させ、この温度で 16 分間保持し、最後に上昇させました。 60°C/min で 240°C まで 2 分間 (合計実行時間: 29.2 分)。 ChemStation ソフトウェアと Microsoft Excel を使用して、サンプルを分析しました。
摂取期間12週間後のEVの総脂質の変化
血漿総リン脂質分析
時間枠:摂取期間12週間後の血漿総リン脂質の変化
凍結PFPの400μlアリコートを解凍し、遠心分離して変性タンパク質を除去した。 400 μl の 0.9% NaCl を PFP サンプルに加えて合計 800 μl とし、30 μg のホスファチジルコリン (PC) と 15 μg のホスファチジルエタノールアミン (PE) 内部標準を定量分析のために加えました。 脂質抽出、PC と PE の分離、および血漿リン脂質抽出物のメチルエステル化の後、サンプルを GC で分析しました。
摂取期間12週間後の血漿総リン脂質の変化
血漿中の脂質プロファイルの濃度
時間枠:12週間の摂取期間後の血漿脂質プロファイルの濃度の変化
凍結PFPの250μlアリコートを、ローラーミキサーを使用して室温で解凍し、室温で500×gで5分間遠心分離した(Eppendorf Centrifuge 5415 R、DJBlabcare、英国)。 次に、サンプルをRANDOX臨床分析装置(RANDOX Daytona + Analyser、Randox Laboratories Ltd、英国)でTC、TAG、HDL-C、LDL-C、およびTC / HDL-C比の濃度について分析しました。
12週間の摂取期間後の血漿脂質プロファイルの濃度の変化
血漿中の TC/HDL-C 比の濃度
時間枠:摂取期間12週間後の血漿TC/HDL-C比濃度変化
凍結PFPの250μlアリコートを、ローラーミキサーを使用して室温で解凍し、室温で500×gで5分間遠心分離した(Eppendorf Centrifuge 5415 R、DJBlabcare、英国)。 次いで、試料をRANDOX臨床分析器(RANDOX Daytona+ Analyser、Randox Laboratories Ltd、英国)によってTC/HDL-C比について分析した。
摂取期間12週間後の血漿TC/HDL-C比濃度変化
血圧
時間枠:摂取期間12週間後の血圧変化
血圧測定前に被験者に 10 分間の安静を求めた後、血圧測定用カフを左上腕の肘から約 2 cm 上にしっかりと装着し、カフの指標マークを上腕動脈にかぶせて測定を開始しました。 被験者は腕を心臓の高さに置き、測定中に話したり足を組んだりしないでください。 測定は 3 回実行され、各読み取りの間に 2 分間待機しました ((Omron M2 Upper Arm Blood Pressure Monitor、OMRON Healthcare Europe BV、英国)。 最終結果を得るために、3回の測定値の平均を取った。
摂取期間12週間後の血圧変化

協力者と研究者

ここでは、この調査に関係する人々や組織を見つけることができます。

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捜査官

  • 主任研究者:Parveen Yaqoob, MA, DPhil, RNutr、University of Reading

出版物と役立つリンク

研究に関する情報を入力する責任者は、自発的にこれらの出版物を提供します。これらは、研究に関連するあらゆるものに関するものである可能性があります。

便利なリンク

研究記録日

これらの日付は、ClinicalTrials.gov への研究記録と要約結果の提出の進捗状況を追跡します。研究記録と報告された結果は、国立医学図書館 (NLM) によって審査され、公開 Web サイトに掲載される前に、特定の品質管理基準を満たしていることが確認されます。

主要日程の研究

研究開始 (実際)

2018年2月16日

一次修了 (実際)

2019年11月30日

研究の完了 (実際)

2021年3月30日

試験登録日

最初に提出

2017年6月23日

QC基準を満たした最初の提出物

2017年6月27日

最初の投稿 (実際)

2017年6月29日

学習記録の更新

投稿された最後の更新 (実際)

2022年11月7日

QC基準を満たした最後の更新が送信されました

2022年11月4日

最終確認日

2022年11月1日

詳しくは

本研究に関する用語

その他の研究ID番号

  • UREC 17/18

医薬品およびデバイス情報、研究文書

米国FDA規制医薬品の研究

いいえ

米国FDA規制機器製品の研究

いいえ

この情報は、Web サイト clinicaltrials.gov から変更なしで直接取得したものです。研究の詳細を変更、削除、または更新するリクエストがある場合は、register@clinicaltrials.gov。 までご連絡ください。 clinicaltrials.gov に変更が加えられるとすぐに、ウェブサイトでも自動的に更新されます。

フィッシュオイルカプセルの臨床試験

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