源自鱼油的 N-3 多不饱和脂肪酸和细胞外囊泡 (HI-FIVE)
2022年11月4日 更新者：Professor Parveen Yaqoob, MA, DPhil, RNutr, FAfN、University of Reading
鱼油衍生的 N-3 多不饱和脂肪酸对细胞外囊泡生成和功能活动的影响
富含油性鱼和鱼油的 N-3 多不饱和脂肪酸 (n-3 PUFA) 被认为可以通过改变多种风险因素来降低心血管疾病 (CVD) 的风险，例如如血脂、凝血、血管功能和炎症。
细胞外囊泡 (EV) 是各种细胞在被激活或损坏时释放的小颗粒。
血液中大量的 EV 与 CVD 的高风险相关，人们认为这是因为它们携带的“生物活性”成分会影响 CVD 中涉及的许多过程。
然而，很少有临床试验研究 n-3 PUFA 的消耗与循环 EV 之间的关系。
本研究旨在研究膳食 n-3 PUFA 对 EV 的产生和功能活动的影响，这将为 n-3 PUFA 对心血管健康的益处提供新的见解。
研究概览
详细说明
拟议的研究将是一项随机、双盲、安慰剂对照的交叉干预。
中度 CVD 风险的受试者（40-70 岁）将补充鱼油（1.8 g/d n-3 PUFA）或安慰剂（高油酸红花油），持续 12 周。
经过 12 周的清除期后，再交叉进行其他干预 12 周。
每次干预前后都会采集血样。
将进行食物频率调查表以评估受试者对 n-3 PUFA 的习惯摄入量。
受试者还应保持低 n-3 脂肪酸消耗，避免使用所有补充剂，并在研究期间保持体重。
该剂量基于我们之前的工作，该工作证明了内皮衍生 EV (EEV) 数量的减少和血小板衍生 EV (PEV) 数量减少的趋势，以及 n-3 PUFA 产生有益效果的剂量关于斑块稳定性的报道。
实验工作将遵循两个主要方向。
第一部分将检查 n-3 PUFA 补充剂对血浆总 EV 的特性和功能活动的影响。
第二部分将检查 n-3 PUFA 对从受试者身上提取并在体外刺激的血小板生成 PEV 的影响；随后将评估生成的 PEV 的组成和功能活动。
该实验设计将允许同时研究直接从血液中提取的总 EV 的组成和活性，以及 PEV 的产生和活性。
根据我们之前的工作，需要 27 名受试者检测补充鱼油后 EV 数量减少 10%，双侧显着性水平为 5%，功效为 90%，需要 34 名受试者才能达到95%。
同样基于以前的数据，22 名受试者将提供 95% 的能力来检测血栓形成中 10% 的差异，并且需要 30 名受试者来检测 n-3 PUFA 对血小板聚集和磷脂酰丝氨酸 (PS) 暴露的显着影响。
考虑到 15% 的辍学率，并以 EV 数量减少 10% 为基础的 95% 功效为目标，因此我们将总共招募 40 名受试者。
研究类型
介入性
注册 (实际的)
42
阶段
- 不适用
联系人和位置
本节提供了进行研究的人员的详细联系信息，以及有关进行该研究的地点的信息。
学习地点
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Reading、英国、RG6 6AP
- University of Reading
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参与标准
研究人员寻找符合特定描述的人，称为资格标准。这些标准的一些例子是一个人的一般健康状况或先前的治疗。
资格标准
适合学习的年龄
40年 至 70年 (成人、OLDER_ADULT)
接受健康志愿者
是的
有资格学习的性别
全部
描述
纳入标准：
- 40-70岁
- 非吸烟者
中度心血管疾病风险
- 风险将通过名为“QRISK2”的在线计算器进行评估。 这个在线计算器 (https://qrisk.org/2016/)， 它使用传统的风险因素（年龄、收缩压、吸烟状况和总血清胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇的比率）以及体重指数、种族、剥夺措施、家族史，将提供一定比例的患未来 10 年内心脏病发作或中风。
- 具有 10%-20% 的受试者将被视为中等风险
排除标准：
- 体重指数：<18.5 公斤/平方米
- 贫血（男性血红蛋白浓度<12.5 g/L，女性<11.5 g/L）
- 高脂血症（总胆固醇浓度 >8 mmol/L）
- 糖尿病（确诊或空腹血糖浓度 >7 mmol/L）或其他内分泌失调
- 过去 12 个月内有心绞痛、中风或任何血管疾病
- 肾脏、胃肠道、呼吸道、肝脏或肠道疾病
- 炎症性疾病
- 服用治疗高血压、高血脂、炎症、抑郁症或甲状腺病的药物。
- 每月服用阿司匹林、布洛芬或其他非甾体类抗炎药 (NSAIDs) > 4 次，或在研究前一周服用一次
- 服用任何其他抗血小板或抗凝药物，如三氟柳钠、氯吡格雷和华法林。
- 过敏
- 吸烟（包括电子烟和尼古丁产品）
- 男性酒精滥用或摄入量 >21 单位/周，女性 >15 单位/周，或有酒精滥用史
- 定期食用油性鱼类和/或膳食补充剂
- 计划开始或进行减肥方案
- 高强度有氧运动（>20 分钟，每周 3 次）
- 怀孕、哺乳或处于育龄且未使用可靠避孕方法（包括禁欲）的女性
- 在过去三个月内参加过另一项临床试验
学习计划
本节提供研究计划的详细信息，包括研究的设计方式和研究的衡量标准。
研究是如何设计的？
设计细节
- 主要用途：预防
- 分配：随机化
- 介入模型：跨界
- 屏蔽：三倍
武器和干预
参与者组/臂 |
干预/治疗 |
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ACTIVE_COMPARATOR：干涉
鱼油胶囊
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每份含有 360 毫克二十碳五烯酸 (EPA)、270 毫克二十二碳六烯酸 (DHA)，总补充量为每天 1.8 克 n-3 PUFA，持续 12 周
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PLACEBO_COMPARATOR：安慰剂
高油酸红花油胶囊
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高油酸红花油胶囊12周
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研究衡量的是什么？
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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通过纳米粒子跟踪分析 (NTA) 检测到的无血小板血浆 (PFP) 中的循环总 EV 数
大体时间：摄入 12 周后 NTA 检测到的 PFP 中循环总 EV 数的变化
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首先使用 Izon qEV 柱（Izon Science Ltd, Oxford, United Kingdom）通过尺寸排阻色谱法 (SEC) 分离循环 EV 以获得分数 7~9。
然后在 NanoSight 300（Malvern，Amesbury，United Kingdom）上进行分析之前，用 PBS 稀释馏分以维持推荐的颗粒浓度范围（1~10*10^8 个囊泡/ml）。
对于每个分析，在相机水平为 13 时拍摄了五个视频，每个视频持续 60 秒。使用仪器软件 NTA 3.20 分析数据，该软件可以识别单个粒子并根据 Stokes-Einstein 方程估计它们的大小。
最后，为 NTA 设置了 70nm 的阈值，以确保小脂蛋白的干扰最小。
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摄入 12 周后 NTA 检测到的 PFP 中循环总 EV 数的变化
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流式细胞术 (FCM) 检测到的无血小板血浆 (PFP) 中总磷脂酰丝氨酸阳性 EV (PS+EV) 的数量
大体时间：摄入 12 周后 FCM 检测到的 PFP 中 PS+EV 总数的变化
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将 5μl PFP 加入到非粘性微量离心管（Alpha Laboratories Ltd, Hampshire, United Kingdom）中，其中含有 5μl FcR 阻断剂（Miltenyi Biotec Ltd, Surrey, United Kingdom）和 Annexin V 缓冲液，并在黑暗中孵育 15 分钟。室内温度。
然后加入抗体和同种型匹配的对照，样品在室温下避光再孵育 15 分钟。
孵育后，用 200μl 膜联蛋白 V 缓冲液稀释样品并转移到 FACS 流管（BD Biosciences，Wokingham，英国），准备通过 FCM 进行分析。
当触发 APC 荧光时，PS+EV 被识别为 Annexin V+EV。
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摄入 12 周后 FCM 检测到的 PFP 中 PS+EV 总数的变化
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荧光 FCM 检测 PFP 中循环 EVs 亚群的特征
大体时间：摄入 12 周后荧光 FCM 对 PFP 中循环 EVs 亚群数量的变化
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将 5μl PFP 加入到非粘性微量离心管（Alpha Laboratories Ltd, Hampshire, United Kingdom）中，其中含有 5μl FcR 阻断剂（Miltenyi Biotec Ltd, Surrey, United Kingdom）和 Annexin V 缓冲液，并在黑暗中孵育 15 分钟。室内温度。
然后加入抗体和同种型匹配的对照，样品在室温下避光再孵育 15 分钟。
孵育后，用 200μl 膜联蛋白 V 缓冲液稀释样品并转移到 FACS 流管（BD Biosciences，Wokingham，英国），准备通过 FCM 进行分析。
血小板衍生的 EV (PDEV) 被鉴定为 Annexin V+EV，其在 APC 与 PE 象限图中也为 CD41-PE 染色阳性，内皮衍生的 EV (EDEV) 被鉴定为 Annexin V+EV，其也为 CD105 染色阳性- APC 与 PB 象限图中的 eFluor450。
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摄入 12 周后荧光 FCM 对 PFP 中循环 EVs 亚群数量的变化
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次要结果测量
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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PFP 中循环 EV 的促血栓形成活动（凝血酶生成的滞后时间）
大体时间：摄入 12 周后 PFP 中循环 EV 促血栓形成活性（凝血酶生成滞后时间）的变化
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一种市售的基于板的凝血酶生成测定用于测量标准的、混合的无囊泡和无血小板血浆（称为无囊泡血浆或 VFP）或相同 VFP 中的凝血酶生成，但添加了来自受试者的循环 EVs干预研究。
这使得能够评估依赖于 TF 的凝血酶生成，特别是归因于干预研究样本中的循环 EV。
结果显示为五个变量：（i）添加触发剂后开始凝血酶生成的滞后阶段（达到峰高的 1/6 的时间）（分钟）； (ii) 凝血酶峰值浓度 (nM)； (iii) 达到峰值的时间（分钟）； (iv) 速度指数，定义为 = [峰高/（达峰时间 - 滞后时间）] 和 (v) 曲线下面积，定义为内源性凝血酶潜能 (ETP)（表示为 nM 凝血酶 × min）
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摄入 12 周后 PFP 中循环 EV 促血栓形成活性（凝血酶生成滞后时间）的变化
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PFP 中循环 EV 的促血栓形成活性（凝血酶峰值浓度）
大体时间：摄入 12 周后 PFP 中循环 EV 促血栓形成活性（凝血酶峰值浓度）的变化
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一种市售的基于板的凝血酶生成测定用于测量标准的、混合的无囊泡和无血小板血浆（称为无囊泡血浆或 VFP）或相同 VFP 中的凝血酶生成，但添加了来自受试者的循环 EVs干预研究。
这使得能够评估依赖于 TF 的凝血酶生成，特别是归因于干预研究样本中的循环 EV。
结果显示为五个变量：（i）添加触发剂后开始凝血酶生成的滞后阶段（达到峰高的 1/6 的时间）（分钟）； (ii) 凝血酶峰值浓度 (nM)； (iii) 达到峰值的时间（分钟）； (iv) 速度指数，定义为 = [峰高/（达峰时间 - 滞后时间）] 和 (v) 曲线下面积，定义为内源性凝血酶潜能 (ETP)（表示为 nM 凝血酶 × min）
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摄入 12 周后 PFP 中循环 EV 促血栓形成活性（凝血酶峰值浓度）的变化
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PFP 中循环 EV 的促血栓形成活性（达到凝血酶浓度峰值的时间）
大体时间：摄入 12 周后 PFP 中循环 EV 促血栓形成活性（达到凝血酶浓度峰值的时间）的变化
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一种市售的基于板的凝血酶生成测定用于测量标准的、混合的无囊泡和无血小板血浆（称为无囊泡血浆或 VFP）或相同 VFP 中的凝血酶生成，但添加了来自受试者的循环 EVs干预研究。
这使得能够评估依赖于 TF 的凝血酶生成，特别是归因于干预研究样本中的循环 EV。
结果显示为五个变量：（i）添加触发剂后开始凝血酶生成的滞后阶段（达到峰高的 1/6 的时间）（分钟）； (ii) 凝血酶峰值浓度 (nM)； (iii) 达到峰值的时间（分钟）； (iv) 速度指数，定义为 = [峰高/（达峰时间 - 滞后时间）] 和 (v) 曲线下面积，定义为内源性凝血酶潜能 (ETP)（表示为 nM 凝血酶 × min）
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摄入 12 周后 PFP 中循环 EV 促血栓形成活性（达到凝血酶浓度峰值的时间）的变化
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PFP 中循环 EV 的促血栓形成活动（速度指数）
大体时间：摄入 12 周后 PFP 中循环 EV 促血栓形成活性（速度指数）的变化
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一种市售的基于板的凝血酶生成测定用于测量标准的、混合的无囊泡和无血小板血浆（称为无囊泡血浆或 VFP）或相同 VFP 中的凝血酶生成，但添加了来自受试者的循环 EVs干预研究。
这使得能够评估依赖于 TF 的凝血酶生成，特别是归因于干预研究样本中的循环 EV。
结果显示为五个变量：（i）添加触发剂后开始凝血酶生成的滞后阶段（达到峰高的 1/6 的时间）（分钟）； (ii) 凝血酶峰值浓度 (nM)； (iii) 达到峰值的时间（分钟）； (iv) 速度指数，定义为 = [峰高/（达峰时间 - 滞后时间）] 和 (v) 曲线下面积，定义为内源性凝血酶潜能 (ETP)（表示为 nM 凝血酶 × min）
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摄入 12 周后 PFP 中循环 EV 促血栓形成活性（速度指数）的变化
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PFP 中循环 EV 的促血栓形成活性（内源性凝血酶潜能）
大体时间：摄入 12 周后 PFP 中循环 EV 促血栓形成活性（内源性凝血酶潜能）的变化
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一种市售的基于板的凝血酶生成测定用于测量标准的、混合的无囊泡和无血小板血浆（称为无囊泡血浆或 VFP）或相同 VFP 中的凝血酶生成，但添加了来自受试者的循环 EVs干预研究。
这使得能够评估依赖于 TF 的凝血酶生成，特别是归因于干预研究样本中的循环 EV。
结果显示为五个变量：（i）添加触发剂后开始凝血酶生成的滞后阶段（达到峰高的 1/6 的时间）（分钟）； (ii) 凝血酶峰值浓度 (nM)； (iii) 达到峰值的时间（分钟）； (iv) 速度指数，定义为 = [峰高/（达峰时间 - 滞后时间）] 和 (v) 曲线下面积，定义为内源性凝血酶潜能 (ETP)（表示为 nM 凝血酶 × min）
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摄入 12 周后 PFP 中循环 EV 促血栓形成活性（内源性凝血酶潜能）的变化
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通过基于板的血小板聚集测定检测离体激动剂刺激的血小板活化
大体时间：摄入 12 周后体外血小板活化的变化
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96 孔高通量聚集测定技术允许测试各种浓度的不同激动剂，用于检查 n-3 PUFA 补充剂对血小板功能的影响。
来自每次研究访问的富血小板血浆 (PRP) 和贫血小板血浆 (PPP) 用于血小板聚集测定，使用预先制备的 96 孔微孔板，其中包含激动剂（ADP、EPI、TRAP-6 和 U46619）。
获得响应每种激动剂的剂量反应曲线，结果表示为 LogEC50（激动剂的对数浓度，M，给出最大和最小聚集之间的响应）。
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摄入 12 周后体外血小板活化的变化
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通过基于板的血小板聚集测定 (CRP-XL Log EC50) 检测离体激动剂刺激的血小板活化
大体时间：摄入 12 周后体外血小板活化的变化
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96 孔高通量聚集测定技术允许测试各种浓度的不同激动剂，用于检查 n-3 PUFA 补充剂对血小板功能的影响。
来自每次研究访视的富血小板血浆 (PRP) 和贫血小板血浆 (PPP) 用于血小板聚集测定，使用预先制备的含有激动剂 (CRP-XL) 的 96 孔微孔板。
获得响应每种激动剂的剂量-反应曲线，结果表示为 LogEC50（激动剂的对数浓度，mg/ml，给出最大和最小聚集之间的响应）。
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摄入 12 周后体外血小板活化的变化
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从受刺激血小板的上清液中制备的血小板衍生细胞外囊泡 (PDEV) 的促血栓形成活性（血栓形成的终点和最大值）
大体时间：摄入 12 周后，由刺激血小板上清液制备的 PEV 的促血栓形成活性（血栓形成的终点和最大值）的变化
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通过将体外产生的 PDEV 从刺激的血小板添加到流动的全血中来测量离体血栓形成。
结果显示为三个变量：(i) 离体血栓形成 (FU) 的终点； (ii) 体外血栓形成 (FU) 的终点； (iii) 曲线下面积。
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摄入 12 周后，由刺激血小板上清液制备的 PEV 的促血栓形成活性（血栓形成的终点和最大值）的变化
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从受刺激的血小板上清液中制备的血小板衍生细胞外囊泡 (PDEV) 的促血栓形成活性（曲线下面积）
大体时间：摄入 12 周后，从刺激的血小板上清液中制备的 PEV 的促血栓形成活性（曲线下面积）的变化
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通过将体外产生的 PDEV 从受刺激的血小板添加到流动的全血中来测量离体血栓形成。
结果显示为三个变量：(i) 离体血栓形成 (FU) 的终点； (ii) 体外血栓形成 (FU) 的终点； (iii) 曲线下面积。
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摄入 12 周后，从刺激的血小板上清液中制备的 PEV 的促血栓形成活性（曲线下面积）的变化
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循环 EV 总脂质分析
大体时间：摄入 12 周后 EV 总脂质的变化
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使用滚筒混合器在室温下解冻 500 μl 冷冻 PFP 等分试样，并进行 SEC 以分离和纯化 EV。
将 7~9 的级分合并在一起，并准备 800 μl 的合并级分用于总脂质提取和甲酯化。
然后在 Hewlett-Packard 6890 系列 GC（美国加利福尼亚州惠普）上通过气相色谱法分析 EV 总脂质甲酯，协议如下：血浆和 EV 分析的分流比设置为 30:1。
注射体积分别为血浆 1μl 和 EVs 5μl。
进样器和检测器温度均保持在300°C，升温程序为初始温度115°C 2分钟，以10°C / min升温至200°C并在此温度下保持16分钟，最后升温以 60°C/分钟升温至 240°C，持续 2 分钟（总运行时间：29.2 分钟）。
使用 ChemStation 软件和 Microsoft Excel 分析样品。
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摄入 12 周后 EV 总脂质的变化
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血浆总磷脂分析
大体时间：摄入12周后血浆总磷脂的变化
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将 400 μl 冷冻 PFP 等分试样解冻并离心以去除变性蛋白质。
将400μl 0.9% NaCl加入PFP样品中，使总量达到800μl，然后加入30μg磷脂酰胆碱(PC)和15μg磷脂酰乙醇胺(PE)内标进行定量分析。
在脂质提取、PC 和 PE 分离以及血浆磷脂提取物甲酯化后，样品通过 GC 进行分析。
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摄入12周后血浆总磷脂的变化
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血浆中脂质分布的浓度
大体时间：摄入 12 周后血浆脂质浓度的变化
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使用滚筒混合器在室温下解冻冷冻 PFP 的 250μl 等分试样，并在室温下以 500xg 离心 5 分钟（Eppendorf Centrifuge 5415 R，DJBlabcare，英国）。
然后通过 RANDOX 临床分析仪（RANDOX Daytona+ Analyser，Randox Laboratories Ltd，United Kingdom）分析样品的 TC、TAG、HDL-C、LDL-C 浓度和 TC/HDL-C 比率。
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摄入 12 周后血浆脂质浓度的变化
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血浆中 TC/HDL-C 比率的浓度
大体时间：摄入 12 周后血浆 TC/HDL-C 比率浓度的变化
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使用滚筒混合器在室温下解冻冷冻 PFP 的 250μl 等分试样，并在室温下以 500xg 离心 5 分钟（Eppendorf Centrifuge 5415 R，DJBlabcare，英国）。
然后通过 RANDOX 临床分析仪（RANDOX Daytona+ Analyser，Randox Laboratories Ltd，United Kingdom）分析样品的 TC/HDL-C 比率。
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摄入 12 周后血浆 TC/HDL-C 比率浓度的变化
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血压
大体时间：服用 12 周后血压变化
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测量血压前要求受试者休息10分钟，然后将血压袖带牢固地套在左上臂肘部上方约2cm处，袖带上的指示标记越过肱动脉开始测量。
测量时，被测者应将双臂置于心脏水平，不得说话和交叉双腿。
测量进行了三次，每次读数之间等待 2 分钟（（欧姆龙 M2 上臂血压监测仪，欧姆龙医疗欧洲有限公司，英国）。
取三个读数的平均值以获得最终结果。
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服用 12 周后血压变化
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合作者和调查者
在这里您可以找到参与这项研究的人员和组织。
调查人员
- 首席研究员：Parveen Yaqoob, MA, DPhil, RNutr、University of Reading
出版物和有用的链接
负责输入研究信息的人员自愿提供这些出版物。这些可能与研究有关。
有用的网址
研究记录日期
这些日期跟踪向 ClinicalTrials.gov 提交研究记录和摘要结果的进度。研究记录和报告的结果由国家医学图书馆 (NLM) 审查，以确保它们在发布到公共网站之前符合特定的质量控制标准。
研究主要日期
学习开始 (实际的)
2018年2月16日
初级完成 (实际的)
2019年11月30日
研究完成 (实际的)
2021年3月30日
研究注册日期
首次提交
2017年6月23日
首先提交符合 QC 标准的
2017年6月27日
首次发布 (实际的)
2017年6月29日
研究记录更新
最后更新发布 (实际的)
2022年11月7日
上次提交的符合 QC 标准的更新
2022年11月4日
最后验证
2022年11月1日
更多信息
与本研究相关的术语
药物和器械信息、研究文件
研究美国 FDA 监管的药品
不
研究美国 FDA 监管的设备产品
不
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鱼油胶囊的临床试验
-
Assiut UniversitySouth Egypt Cancer Institute完全的
-
Translational Drug DevelopmentStand Up To Cancer; American Association for Cancer Research; Scottsdale Healthcare完全的