ジカウイルスへの垂直暴露と子供の神経発達への影響 (ZIKVIRUSIFF) (ZIKVIRUSIFF)

この研究の主な目的は、妊娠から生後 3 年の終わりまでの垂直 ZIKV 伝達の自然史、および臨床的および神経学的障害、特に小頭症の発生に関連する危険因子の存在を評価することです。

妊娠から生後3年の終わりまでの縦断研究が行われ、その間、ZIKV感染が主な暴露となります。

サンプルサイズは、ジカウイルスにさらされた500人の子供です。 サンプル サイズは、ブラジルでの通常の小頭症の有病率 (2:10.000) に基づいて、まれなイベントについて計算されました。 ZIKAV にさらされた妊婦の症例数の増加が予想されます。

この研究は、フェルナンデス フィゲイラ国立女性および子供の健康研究所 (IFF) で実施されます。 妊娠中の女性は、IFF の出生前ケア クリニックと、FioCruz/RJ の Centro de Saúde Escola Germano Sinval Faria (CDEGSF) の Family Health Strategy ユニットで選択されます。 また、SMS リオデジャネイロの臨床家系から妊婦を募集します。

包含基準 研究集団は、皮膚発疹、関節痛に関連する発熱、筋肉痛、非化膿性結膜炎、または頭痛を伴うZIKAV感染に適合する症状を示す妊婦と、暴露の可能性が同時に特定された無症候性の妊婦で構成されます。 . RT-PCR陽性の患者を含めます。

妊娠期間に関係なく、IFF および CSGSF で出生前フォローアップを行っているすべての妊婦は、最初は曝露されていないとして適格です。

除外基準 胎児期または出生時に染色体異常が認められた妊婦は除外する。

暴露の定義 ZIKAV 感染の約 80% が無症候性であるという知識を考慮すると、暴露は診断検査 (PCR または血清学的検査) での陽性によって確認されます。 血清学的検査が将来利用可能になることを考慮して、曝露グループを定義するためにいくつかの戦略が使用される予定です。これまでのところ、病気の急性期にのみ陽性を維持する PCR 検査しか利用できないためです。

上記のように、症状のある女性は、RT-PCRによる感染診断の確認、およびデング熱、チクングンハ、CMV、トキソプラズマ症、および風疹の血清学的検査のために紹介されます。

症状のある女性とない女性は、妊娠の3学期と出生時に血清学的検査のために血液を採取します. 特定の血清学的検査が利用可能な場合、血液サンプルは ZIKA 血清学的検査のためにバイオレポジトリに保存されます。 これらの連続したサンプルは、開発段階にある血清学的検査の検証にも使用されます。

比較する曝露グループは、血清学的検査の結果に基づいて構成されます。 血液サンプルが将来ジカ感染の存在を示す無症候性の個人は、暴露された人々のグループに移動します。

特定の検査 (急性期の PCR およびその後の血清学的検査) で陽性の結果を示すコホートの妊婦は、感染にさらされていると見なされますが、結果が陰性の妊婦は、暴露されていないと見なされます。

この 2 番目のグループは、無症候性と症候性に分類できます。 3 番目のグループは、負の IgG および IgM によって証明されたジカ熱のない母親から生まれた正常な子供です。各子供は、誕生から 3 年間追跡されます。

分析される結果 主な結果は、生後 12、18、および 24 ～ 36 か月での Bayley Score 第 3 版を使用した小頭症および/または発達の遅延です。

二次試験の結果は次のとおりです。妊娠中の超音波検査の状態、胎盤の損傷、眼、聴覚、心臓、子供の栄養状態、出生から 3 歳までの神経発達の変化、妊婦の死亡、中絶、胎児の死亡、妊娠中の死亡人生の最初の3年間。

データ収集：

妊娠中の女性の参加は、研究の最初の 24 か月に行われます。 結果を特定するために、各子供は出生から 3 歳まで追跡されます。 データ収集の合計調査期間は 5 年間です。 この調査は、2016 年 1 月から 2022 年 3 月までの期間に実施されます。

データは、医療サービスに関連し、研究集団を支援する医療専門家によって収集されます。

妊娠、出産、生後3年間のデータは、予約後にアンケートを使用して各女性とのインタビューから取得されます。 さらに、記録のためのデータは、この目的のために用意されたフォームで収集されます。

データ収集フォーム (CRF/DCF) が構築され、サービス間のすべての次元で検証されます。 スタディフローダイアグラムと各手順およびケアレベルの POP が作成されます。

• 社会経済的特徴 (教育、1 人当たりの世帯収入、住宅条件、衛生設備、ごみ収集);健康状態（合併症）。
• ZIKAV への曝露の歴史: 親族、隣人、職場の同僚のジカ熱の同定

研究集団のフォローアップ

妊婦のフォローアップ：

研究に含まれる妊婦は、Fernandes Figueira National Brazil Institute for Health of Women and Children の出生前クリニックで追跡されます。

妊娠中の女性を研究に含めた後、相談は毎月行われ、次のプロトコルに従って試験が行われます。

• 各学期での胎児の超音波検査
• ジカ熱、デング熱、チクングニア熱、CMV、トキソプラズマ症、風疹の血清学的検査を三半期ごとに実施
• 症状のある妊婦の場合、ジカウイルスの PCR
• コウノトリ ネットワークがブラジル保健大臣から推奨する出生前検査
• ブラジルのコウノトリ ネットワークが推奨する出生前検査 関連する先天性異常の存在によって示される場合、羊水を採取できます。

ドップラー:

臍帯は、臍帯動脈のソノグラムを取得し、拍動指数 (PI)、抵抗指数 (RI)、およびピーク収縮期速度 (PSV) を評価するために超音波処理されます。

血清およびその他のヒト分泌物中のウイルス検出 患者のウイルスを検出するために、RTP Pathogen (Stratec Biomedical AG、Birkenfeld、Germany) キットを製造元の指示に従って使用して、血清および/または尿 (200 ml) から RNA を抽出します。 単離された RNA は、次のようにリアルタイム /RT-PCR 反応のテンプレートとして機能します: Lanciotti et al., 2008 e Faye et al., 2013.

血清およびその他のヒト分泌物中のウイルス検出 ゲノム配列決定のために、ウイルスゲノムの特定の領域が RT-PCR 法によって増幅されます。 このようにして得られた産物は、アガロースゲル電気泳動によって精製され、次いでＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ（Ｑｉａｇｅｎ）キットを使用してゲルから抽出される。 抽出後、Low DNA Mass Ladder (Life Technologies) 標準を使用してバンド強度を比較することにより、材料をアガロースゲルで定量化します。 シーケンスに必要な量は、Fiocruz シーケンス プラットフォームに転送されます。 シーケンスは、Bioedit (v. 7.0.5.3) プログラム、系統解析は MEGA (v. 5:05) プログラム。

胎盤の分析および免疫組織化学 新鮮な胎盤は、病理解剖学および細胞病理学部門 (DAPC/DPAC) に転送され、そこで最大 48 時間冷蔵庫に保管されます。 それらは、胎盤の分析のルーチンに従って、記述、重量測定、および写真撮影されます。 絨毛膜板、コード、および膜からの断片を取り出し、液体窒素で凍結します。 胎盤板 (5 つの領域)、コード (少なくとも 2 つの領域)、および絨毛膜 (1 つのフラグメント) は、緩衝ホルマリン最大時間で固定されます: 30 h)。 その後、組織学的処理のために切断され、パラフィンに埋め込まれます。

フローサイトメトリーによる胎盤細胞、母体および臍帯血、小児の口腔スワブの表現型の特徴付け 胎盤断片を収集し、無菌 DMEM (Sigma; St. Louis, MO, [USA]) 培地 (4 °C) で維持し、切断します。いくつかの断片に (厚さ: 1-2 mm)。 切断後、それらを DMEM で洗浄し、コラゲナーゼ 1A (Sigma;_) (300 U/mg; 1% DMEM 中) 酵素中で解離サイクルにかけます。 解離は 6 ～ 8 サイクルで発生します (軽度の攪拌; 37 °C、各 10 分)。 このようにして得られた細胞懸濁液を遠心分離し (1000 rpm; 4 °C; 10 分)、ペレットを/不活化/コラゲナーゼ酵素/作用/活性を阻害します。 解離した物質は [その後] ろ過されます。 メンブレン ([孔径:] 70 mm)。 次に、次の手順で使用するために、細胞をノイバウアーチャンバーでカウントします。 母体および臍帯血は、/血液/抗凝固剤として EDTA を含む適切なチューブに採取されます。 血清はウイルスの検出に使用され、白血球細胞は赤血球の溶解後にマークされます.\

胎児および死産の剖検 組織病理学的および免疫組織化学的検査および画像形成形態形成研究は、ZIKAV 感染の結果として、胎児および死産の脳およびその他の臓器で実施されます。 パラフィンでの通常の組織学的処理に加えて、他の臓器は凍結され、遺伝物質の抽出とウイルス RNA の調査に提出されます。 眼球も分析して、眼の変化の可能性を評価します。

新生児のフォローアップ:

新生児は、IFF の外来診療所で 3 歳まで追跡されます。そのルーチンには、最初の年に少なくとも 6 回の訪問が含まれ、2 年目と 3 年目には年に 4 回の訪問が含まれます。 ジカウイルスへの垂直曝露の可能性がある子供たちのコホートを追跡するために、小児科の感染症ユニットと小児科外来クリニックの両方に学際的な外来診療所が設立されます。 外来診療所には、医療関係者と、理学療法、音声聴覚学、心理学、および社会福祉の分野の専門家がいます。 医療チームは、神経学、小児心臓病学および眼科、医療遺伝学サービスなどの専門分野と協力して、患者を追跡する責任を負います。 必要に応じて、これらの患者の入院は、診断または初期ア​​プローチのいずれかを確立するために、DIPe 病棟で行われます。

ウイルスにさらされていることがわかっている患者または小頭症の患者に推奨される初期評価は、次の検査および/または評価で構成されます: 神経学的、眼科、聴覚、必要に応じて脳波、心電図、RT-PCR 用の臍帯血、および IgM。 妊娠期間と患者の性別に応じて、Intergrowth Curve (2014) を参照として頭囲を正確に測定することに重点を置いた、新生児の人体計測データと身体検査。 遺伝学による評価により、他の臓器を危険にさらす/影響を与える可能性のある異形の特徴または先天異常を検出します。

画像検査:

1. トランスフォンタネル超音波検査（USTF）が第一選択
2. TF が技術的に不可能な場合は、造影剤を使用しない頭蓋断層撮影 (CT)
3. 腹部超音波
4. 心エコー図
5. 必要に応じて、脳磁気共鳴画像法。 g) 新生児聴覚スクリーニング (TAN):

1. 誘発光音響放射 (EOAE);生後 24 ～ 48 時間 2. 脳幹の聴覚誘発電位 (PEATE/ABR): 小頭症の子供の生後 1 か月まで。 失敗した場合は、30 日以内に再テストを行う必要があります。 再テストに失敗した場合は、[NB] をすぐに [_ に] 転送します。

h) 目の新生児スクリーニング (TON):

1. 網膜赤色反射の検査とテスト。
2. アイファンド検査（眼底検査）
3. RetCam によるドキュメンテーション

その後の診察では、臨床経過観察、PC測定、理学療法による発達評価（初期刺激を含む）、罹患率と死亡率の評価が維持されます。 生後 1 年目は、3 か月ごとに PEATE を行います。 その後の通院は、生後 6 か月までは毎月、生後 6 か月から 12 か月までは 2 か月ごと、3 歳までは 3 か月ごとに行われます。 眼科検査（眼底検査）は再来の都度行います。

神経学的フォローアップは、患者の初期状態によって異なります。 小頭症のない患者は、生後30日、および2、4、6、9、12、18、24、および36か月で評価されます。 小頭症の患者は、出生時、生後 30 日、2 か月または 3 か月ごと、または必要に応じてより頻繁に評価されます。

運動発達の評価は、Dubowitz検査（最初の72時間）、Alberta Infant Motor Scale（AIMS;子供が歩くか、生後18か月を完了するまで3か月ごと）、および12歳のBayley Test-3rd editionによって行われます。 18 歳で生後 12 ～ 36 か月。

言語発達の評価は、神経発達、認知発達、および言語スキルへの影響の可能性に関して、12、24、および 36 か月で行われます。