Verticale blootstelling aan het zikavirus en de gevolgen daarvan voor de neurologische ontwikkeling van kinderen (ZIKVIRUSIFF) (ZIKVIRUSIFF)

Het belangrijkste doel van de studie is om de natuurlijke geschiedenis van verticale ZIKV-overdracht vanaf de zwangerschap tot het einde van het derde levensjaar en het bestaan ​​van risicofactoren geassocieerd met de incidentie van klinische en neurologische aandoeningen, in het bijzonder microcefalie, te beoordelen.

Er zal een longitudinaal onderzoek worden uitgevoerd vanaf de zwangerschap tot het einde van het derde levensjaar, waarbij ZIKV-infectie de belangrijkste blootstelling zal zijn.

De steekproefomvang is 500 kinderen die zijn blootgesteld aan het zikavirus. De steekproefomvang werd berekend voor zeldzame gebeurtenissen op basis van de gebruikelijke prevalentie van microcefalie in Brazilië (2:10.000) en verwachte toename van het aantal gevallen bij zwangere vrouwen die zijn blootgesteld aan ZIKAV.

De studie zal worden uitgevoerd aan het Fernandes Figueira National Institute for Health of Women and Children (IFF). De zwangere vrouwen zullen worden geselecteerd in de prenatale zorgkliniek van IFF en in de Family Health Strategy-eenheden, in Centro de Saúde Escola Germano Sinval Faria (CDEGSF), beide van FioCruz/RJ. We zullen ook een zwangere vrouw rekruteren uit de klinische familie van SMS Rio de Janeiro.

Inclusiecriteria De onderzoekspopulatie zal bestaan ​​uit zwangere vrouwen die symptomen vertonen die passen bij een ZIKAV-infectie, met huiduitslag, artralgie-geassocieerde koorts, myalgie, niet-etterende conjunctivitis of hoofdpijn en asymptomatische zwangere vrouwen geïdentificeerd op hetzelfde moment van mogelijke blootstelling . We includeren patiënten met RT-PCR-positief.

Alle zwangere vrouwen die in de prenatale follow-up zitten bij IFF en CSGSF, ongeacht de zwangerschapsduur, komen in aanmerking als niet-blootgesteld in het begin.

Uitsluitingscriteria Zwangere vrouwen met chromosomale afwijkingen die tijdens het foetale leven of de geboorte worden ontdekt, worden uitgesloten.

Definitie van blootstelling Gezien de wetenschap dat ongeveer 80% van de ZIKAV-infecties asymptomatisch zijn, zal de blootstelling worden bevestigd door de positiviteit in diagnostische tests (PCR of serologische tests). Gezien de toekomstige beschikbaarheid van serologische tests, zullen sommige strategieën worden gebruikt om blootstellingsgroepen te definiëren, omdat tot nu toe alleen de PCR-test beschikbaar is, die alleen positief blijft in de acute fase van de ziekte.

Zoals hierboven beschreven, zullen de symptomatische vrouwen worden doorverwezen voor bevestiging van de infectie door middel van RT-PCR en serologische tests voor dengue, chikcungunha, CMV, toxoplasmose en rubella.

Vrouwen met en zonder symptomen zullen hun bloed laten afnemen voor serologische tests in de drie trimesters van de zwangerschap en bij de geboorte. Bloedmonsters worden opgeslagen in een biorepository voor ZIKA-serologische tests wanneer specifieke serologische tests beschikbaar zijn. Deze sequentiële monsters zullen ook worden gebruikt om serologische tests die zich in de ontwikkelingsfase bevinden te valideren.

De te vergelijken blootstellingsgroepen zullen worden samengesteld op basis van de resultaten van de serologische testen. De asymptomatische personen van wie de bloedmonsters in de toekomst de aanwezigheid van een Zika-infectie aangeven, zullen migreren naar de groep van blootgestelde personen.

De zwangere vrouwen in het cohort die positieve resultaten presenteren voor specifieke tests (PCR in de acute fase en serologische tests later) worden beschouwd als blootgesteld aan infectie, terwijl zwangere vrouwen met negatieve resultaten worden beschouwd als niet blootgesteld.

Deze tweede groep kan worden gecategoriseerd als asymptomatisch en symptomatisch. De derde groep zijn de normale kinderen geboren uit moeders zonder zika, bewezen door negatief IgG en IgM. Elk kind zal vanaf de geboorte gedurende drie jaar worden gevolgd.

Uitkomsten die moeten worden geanalyseerd De belangrijkste uitkomst is microcefalie en/of ontwikkelingsachterstand met Bayley Score 3e editie op een leeftijd van 12, 18 en 24-36 maanden.

De secundaire onderzoeksresultaten zullen als volgt zijn: status van zwangerschapsecho's, letsels aan de placenta, oog-, gehoor-, cardiale, voedingsstatus van kinderen en veranderingen in de neurologische ontwikkeling vanaf de geboorte tot drie jaar oud, overlijden bij zwangere vrouwen, abortus, foetale dood en overlijden tijdens de zwangerschap. eerste drie levensjaren.

Gegevensverzameling:

De opname van zwangere vrouwen zal plaatsvinden in de eerste 24 maanden van de studie. Om de resultaten te identificeren, wordt elk kind gevolgd vanaf de geboorte tot het einde van de chronologische leeftijd van drie jaar. De totale onderzoeksperiode voor gegevensverzameling zal 5 jaar zijn. Het onderzoek zal worden uitgevoerd in de periode januari 2016 - maart 2022.

Gegevens zullen worden verzameld door gezondheidswerkers die verbonden zijn aan gezondheidsdiensten en hulp bieden aan de onderzoekspopulatie.

Gegevens over zwangerschap, geboorte en de eerste drie levensjaren zullen worden verkregen uit een interview met elke vrouw met behulp van een vragenlijst na afspraak. Daarnaast worden gegevens voor de administratie verzameld in daartoe opgestelde formulieren.

Het gegevensverzamelingsformulier (CRF/DCF) zal in al zijn dimensies tussen de diensten worden opgebouwd en gevalideerd. POP's voor het studiestroomschema en per verrichting en zorgniveau worden opgesteld.

• Sociaal-economische kenmerken (opleiding, gezinsinkomen per hoofd van de bevolking, woonomstandigheden, sanitaire voorzieningen en afvalinzameling); gezondheidsproblemen (co-morbiditeiten).
• Geschiedenis van blootstelling aan ZIKAV: identificatie van familieleden, buren en collega's met Zika

Opvolging van de onderzoekspopulatie

Opvolging van de zwangere vrouwen:

De zwangere vrouwen die in het onderzoek zijn opgenomen, zullen worden gevolgd in de prenatale kliniek van het Fernandes Figueira National Brazilian Institute for Health of Women and Children.

Nadat de zwangere vrouwen in het onderzoek zijn opgenomen, vindt er maandelijks overleg plaats en worden de onderzoeken uitgevoerd volgens het volgende protocol:

• Foetale echografie bij elk trimester
• Serologische onderzoeken voor Zika, dengue, chikungunya, CMV, toxoplasmose en rubella elk trimester
• PCR voor Zika-virus als symptomatische zwangere vrouw
• Prenatale onderzoeken zoals aanbevolen door het Stork Network van de Braziliaanse minister van Volksgezondheid
• Prenataal onderzoek zoals aanbevolen door het Braziliaanse Stork Network Het vruchtwater kan worden afgenomen als er aanwijzingen zijn voor de aanwezigheid van aangeboren afwijkingen.

doppler:

De navelstreng zal worden gesonificeerd om een ​​echo van de navelstrengslagader te verkrijgen en zo de pulsatiliteitsindex (PI), weerstandsindex (RI) en piek systolische snelheid (PSV) te beoordelen.

Virusdetectie in serum en andere menselijke secreties Voor detectie van virus bij patiënten wordt RNA geëxtraheerd uit serum en/of urine (200 ml) met behulp van de RTP Pathogen (Stratec Biomedical AG, Birkenfeld, Duitsland) kit volgens de instructies van de fabrikant. Geïsoleerd RNA dient als een sjabloon in real-time /RT-PCR-reacties zoals beschreven door: Lanciotti et al., 2008 en Faye et al., 2013.

Virusdetectie in serum en andere menselijke secreties Voor genomische sequencing zullen specifieke regio's van het virusgenoom worden geamplificeerd met de RT-PCR-methode. De aldus verkregen producten worden gezuiverd door middel van agarosegelelektroforese en vervolgens uit de gel geëxtraheerd met behulp van de QIAquick Gel Extraction (Qiagen)-kit. Na extractie zal het materiaal worden gekwantificeerd in agarosegel door vergelijking tussen bandintensiteiten met behulp van de Low DNA Mass Ladder (Life Technologies) standaard. Het bedrag dat nodig is voor sequencing wordt doorgestuurd naar het Fiocruz-sequencingplatform. De sequenties worden handmatig bewerkt met behulp van de Bioedit (v. 7.0.5.3) programma, en de fylogenetische analyses zullen worden uitgevoerd met behulp van de MEGA (v. 5:05) programma.

Analyse van de placenta en immunohistochemie De verse placenta's worden doorgestuurd naar de afdeling Pathologische Anatomie en Cytopathologie (DAPC/DPAC) waar ze maximaal 48 uur in de koelkast worden bewaard. Ze worden beschreven, gewogen en gefotografeerd volgens de routine voor analyse van de placenta. Fragmenten van de chorionplaat, het koord en de membranen worden verwijderd en ingevroren in vloeibare stikstof. De placentaplaat (vijf gebieden), het koord (minstens twee gebieden) en het chorion (één fragment) worden gefixeerd in gebufferde formaline maximale tijd: 30 uur). Ze worden vervolgens gekliefd voor histologische verwerking en ingebed in paraffine.

Fenotypische karakterisering van placentacellen en maternale en navelstrengbloed en orale uitstrijkjes van kinderen door middel van flowcytometrie Placentafragmenten zullen worden verzameld en bewaard in steriel DMEM (Sigma; St. Louis, MO, [VS]) kweekmedium (4 °C) en gekliefd in verschillende fragmenten (dikte: 1-2 mm). Na splitsing worden ze gewassen in DMEM en onderworpen aan dissociatiecycli in collagenase 1A (Sigma; _) (300 U/mg; in 1% DMEM) enzym. Dissociatie vindt plaats in 6-8 cycli (milde agitatie; 37 °C, elk 10 min). De aldus verkregen celsuspensie wordt gecentrifugeerd (1000 rpm; 4 °C; 10 min) en de pellet wordt geplaatst/gesuspendeerd in DMEM met foetaal kalfsserum (FCS; 10%; Sigma; _; 4 °C) om/inactiveren/ remmen het collagenase enzym /actie /activiteit?. Het gedissocieerde materiaal zal [vervolgens] worden gefilterd /in /door?a membraan ([poriëndiameter:] 70 mm). Vervolgens worden de cellen geteld in een Neubauer-kamer voor gebruik in de volgende procedures. Het maternaal en navelstrengbloed zal worden afgenomen in /een bloed /een geschikte buis die EDTA als antistollingsmiddel bevat. Het serum wordt gebruikt voor virale detectie en de leukocytencellen worden gemarkeerd na lysis van rode bloedcellen.\

Necropsie van foetussen en doodgeboorte Histopathologische en immunohistochemische onderzoeken en beeldvormend morfogeneseonderzoek zullen worden uitgevoerd in de hersenen en andere organen van foetussen en doodgeborenen/als gevolg van ZIKAV-infectie. Naast de gebruikelijke histologische verwerking in paraffine, worden de andere organen ingevroren en onderworpen aan extractie van genetisch materiaal en onderzoek van viraal RNA. De oogbol zal ook worden geanalyseerd om mogelijke oculaire veranderingen te evalueren.

Follow-up van pasgeborenen:

Pasgeborenen worden gevolgd tot de leeftijd van 3 jaar in de polikliniek van IFF, waarvan de routine minimaal 6 bezoeken in het eerste jaar omvat, 4 bezoeken per jaar in het tweede en derde jaar. Zowel op de afdeling Infectieziekten Kindergeneeskunde als op de Kinderpolikliniek wordt een multidisciplinaire polikliniek ingericht om het cohort kinderen met kans op verticale blootstelling aan het ZIKA-virus te volgen. De polikliniek zal medisch personeel hebben en professionals op het gebied van fysiotherapie, fonoaudiologie, psychologie en sociale dienst. Het medisch team zal instaan ​​voor de opvolging van de patiënten, in samenwerking met specialismen als neurologie, kindercardiologie en oogheelkunde, en de dienst medische genetica. Opname van deze patiënten om [hetzij] de diagnose te stellen, ofwel de eerste benadering -{van het geval}, zal waar nodig plaatsvinden op de DIPe-afdeling.

De eerste evaluatie zoals aanbevolen voor patiënten waarvan bekend is dat ze zijn blootgesteld aan het virus of met microcefalie, zal bestaan ​​uit de volgende onderzoeken en/of evaluaties: neurologisch, oculair, gehoor, EEG indien nodig, ECG, navelstrengbloed voor RT-PCR en IgM. Antropometrische gegevens en lichamelijk onderzoek van de pasgeborene, met nadruk op nauwkeurige meting van de hoofdomtrek met behulp van de Intergrowth Curve (2014) als referentie, volgens zwangerschapsduur en geslacht van de patiënt. Evaluatie door de Genetica om dysmorfe kenmerken of aangeboren afwijkingen op te sporen die andere organen kunnen aantasten/aantasten.

Beeldvormende onderzoeken:

1. transfontanelle echografie (USTF), als eerste keuze
2. craniale tomografie (CT) zonder contrast, als TF technisch niet mogelijk is
3. Abdominale echografie
4. Echocardiogram
5. Hersenen met magnetische resonantie, indien geïndiceerd. g) Gehoorscreening bij pasgeborenen (TAN):

1. Evoked opto-akoestische emissies (EOAE); 24-48 uur van het leven 2. Auditory Evoked Potential of Brain Stem (PEATE/ABR): tot 1 maand van het leven bij kinderen met microcefalie. In geval van mislukking moet binnen 30 dagen opnieuw worden getest. In geval van een mislukte hertest, stuur [de NB] dan onmiddellijk door [naar _].

h) Oculaire neonatale screening (TON):

1. Inspectie en testen van retinale rode reflectie.
2. Eye Fund-examen (fundoscopie)
3. Documentatie met RetCam

In de vervolgconsulten blijven de klinische follow-up, PC-meting, ontwikkelingsevaluatie (inclusief vroege stimulatie) door fysiotherapie en morbiditeits- en mortaliteitsevaluatie behouden. In het eerste levensjaar wordt PEATE om de drie maanden uitgevoerd. De daaropvolgende kliniekbezoeken zullen maandelijks plaatsvinden tot de leeftijd van 6 maanden, elke twee maanden in de periode van 6-12 maanden en elke drie maanden tot drie levensjaren. De oftalmologische evaluatie (funduscopisch onderzoek) wordt bij elke terugkeer gehouden.

De neurologische follow-up zal afhangen van de begintoestand van de patiënt. Patiënten zonder microcefalie worden geëvalueerd bij de geboorte, 30 dagen en 2, 4, 6, 9, 12, 18, 24 en 36 maanden. Patiënten met microcefalie worden geëvalueerd bij de geboorte, 30 dagen en elke 2 of 3 maanden, of vaker indien nodig.

Evaluatie van de motorische ontwikkeling zal worden gedaan door het Dubowitz-onderzoek (in de eerste 72 uur), Alberta Infant Motor Scale (AIMS; elke drie maanden totdat het kind loopt of 18 levensmaanden voltooit) en Bayley Test-3e editie op 12, 18 en tussen 12-36 maanden oud.

Evaluatie van de taalontwikkeling zal worden uitgevoerd op 12, 24 en 36 maanden, met betrekking tot mogelijke effecten op de neurologische ontwikkeling, cognitieve ontwikkeling en taalvaardigheid.