垂直暴露于寨卡病毒及其对儿童神经发育的影响 (ZIKVIRUSIFF) (ZIKVIRUSIFF)

该研究的主要目标是评估寨卡病毒垂直传播从怀孕到 3 岁末的自然史，以及与临床和神经系统疾病（特别是小头畸形）发病率相关的风险因素的存在。

将从妊娠期到生命的第三年结束进行纵向研究，在此期间 ZIKV 感染将是主要暴露。

样本量为 500 名暴露于寨卡病毒的儿童。 根据巴西常见的小头畸形患病率 (2:10.000) 计算罕见事件的样本量 预计暴露于寨卡病毒的孕妇病例数会增加。

该研究将在 Fernandes Figueira 国家妇女和儿童健康研究所 (IFF) 进行。 孕妇将在 IFF 的产前护理诊所和 Centro de Saúde Escola Germano Sinval Faria (CDEGSF) 的家庭健康战略部门中挑选，这两个部门均来自 FioCruz/RJ。 我们还将从 SMS 里约热内卢的临床家庭中招募孕妇。

纳入标准 研究人群将由出现与寨卡病毒感染相符的症状、有皮疹、关节痛相关发热、肌痛、非化脓性结膜炎或头痛的孕妇和同时确定有暴露可能性的无症状孕妇组成. 我们将包括 RT-PCR 阳性的患者。

所有在 IFF 和 CSGSF 进行产前随访的孕妇，无论孕龄如何，都可以作为一开始未暴露。

排除标准排除在胎儿生命或出生期间检测到染色体异常的孕妇。

暴露的定义 鉴于约 80% 的 ZIKAV 感染是无症状的，暴露将通过诊断测试（PCR 或血清学测试）的阳性来确认。 考虑到血清学检测的未来可用性，一些策略将用于定义暴露组，因为到目前为止只有 PCR 检测可用，它仅在疾病的急性期保持阳性。

如上所述，将转诊有症状的女性，通过 RT-PCR 进行感染诊断确认，并进行登革热、基孔肯雅热、巨细胞病毒、弓形体病和风疹的血清学检测。

有和没有症状的妇女将在怀孕的三个三个月和出生时进行血液采样以进行血清学检测。 当特定的血清学测试可用时，血液样本将储存在生物储存库中用于 ZIKA 血清学测试。 这些顺序样本还将用于验证处于开发阶段的血清学测试。

将根据血清学测试的结果组成要比较的暴露组。 那些血液样本显示未来存在寨卡病毒感染的无症状个体，将迁移到暴露人群中。

特定测试（急性期 PCR 和随后的血清学测试）呈阳性结果的队列中的孕妇将被视为已暴露于感染，而结果为阴性的孕妇将被视为未暴露。

第二组可分为无症状和有症状。 第三组将是正常的孩子，母亲没有寨卡病毒，IgG 和 IgM 证明是阴性的。每个孩子从出生后将被跟踪三年。

要分析的结果 主要结果是在 12、18 和 24-36 个月大时使用 Bayley 评分第 3 版得出的小头畸形和/或发育迟缓。

次要研究结果将如下：妊娠超声状况、胎盘损伤、眼、听、心脏、儿童从出生到三岁的营养状况和神经发育变化、孕妇死亡、流产、胎儿死亡和孕期死亡生命的前三年。

数据采集​​：

将在研究的前 24 个月内纳入孕妇。 为了确定结果，每个孩子将从出生到满三岁。 数据收集的总研究期为 5 年。 该研究将在 2016 年 1 月至 2022 年 3 月期间进行。

数据将由与卫生服务相关并为研究人群提供帮助的卫生专业人员收集。

关于妊娠、分娩和生命最初三年的数据将通过预约后使用问卷调查与每位妇女的访谈获得。 此外，将以为此目的准备的表格收集记录数据。

数据收集表 (CRF/DCF) 将在服务的所有维度上构建和验证。 将准备研究流程图以及每个程序和护理级别的持久性有机污染物。

• 社会经济特征（教育、人均家庭收入、住房条件、卫生和垃圾收集）；健康状况（合并症）。
• 寨卡病毒接触史：识别亲属、邻居和工作同事是否感染寨卡病毒

研究人群的随访

孕妇随访：

纳入研究的孕妇将在费尔南德斯菲盖拉巴西国家妇女儿童健康研究所的产前诊所接受随访。

将孕妇纳入研究后，将每月进行一次咨询，并根据以下方案进行检查：

• 每个孕期的胎儿超声检查
• 每三个月进行寨卡病毒、登革热、基孔肯雅热、巨细胞病毒、弓形体病和风疹的血清学检查
• 如果有症状的孕妇进行寨卡病毒 PCR
• 巴西卫生部长 Stork Network 推荐的产前检查
• 按照 Brazilian Stork Network 的建议进行产前检查 如果存在相关的先天性异常，则可以收集羊水。

多普勒：

脐带将被超声处理以获得脐动脉的声像图，从而评估搏动指数 (PI)、阻力指数 (RI) 和峰值收缩速度 (PSV)。

血清和其他人体分泌物中的病毒检测 为了检测患者体内的病毒，根据制造商的说明，使用 RTP 病原体（Stratec Biomedical AG，比肯费尔德，德国）试剂盒从血清和/或尿液 (200 ml) 中提取 RNA。 分离的 RNA 在实时 /RT-PCR 反应中用作模板，如 Lanciotti 等人，2008 年和 Faye 等人，2013 年所述。

血清和其他人体分泌物中的病毒检测 对于基因组测序，将通过 RT-PCR 方法扩增病毒基因组的特定区域。 由此获得的产物将通过琼脂糖凝胶电泳纯化，然后使用 QIAquick 凝胶提取 (Qiagen) 试剂盒从凝胶中提取。 提取后，将使用 Low DNA Mass Ladder (Life Technologies) 标准通过比较条带强度在琼脂糖凝胶中对材料进行定量。 测序所需的数量将被转发到 Fiocruz 测序平台。 序列将使用 Bioedit (v. 7.0.5.3) 程序，系统发育分析将使用 MEGA (v. 5:05) 节目。

胎盘和免疫组织化学分析 新鲜胎盘将被送到病理解剖学和细胞病理学系 (DAPC/DPAC)，在那里它们将在冰箱中保存长达 48 小时。 根据胎盘分析的常规对它们进行描述、称重和拍照。 绒毛膜板、索和膜的碎片将被取出并冷冻在液氮中。 胎盘板（五个区域）、脐带（至少两个区域）和绒毛膜（一个片段）将固定在缓冲福尔马林中，最长时间：30 小时）。 然后将它们切割以进行组织学处理并包埋在石蜡中。

通过流式细胞术对胎盘细胞和母体和脐带血以及儿童口腔拭子进行表型表征 将收集胎盘碎片并保存在无菌 DMEM（Sigma；圣路易斯，密苏里州，[美国]）培养基（4°C）中并切割分成几个片段（厚度：1-2 毫米）。 裂解后，它们在 DMEM 中洗涤，并在胶原酶 1A（Sigma；_）（300 U/mg；在 1% DMEM 中）酶中进行解离循环。 解离将在 6-8 个循环中发生（温和搅拌；37°C，每个循环 10 分钟）。 将由此获得的细胞悬浮液离心（1000 rpm；4°C；10 分钟）并将沉淀物置于/悬浮于含有胎牛血清（FCS；10%；Sigma；_；4°C）的 DMEM 中以/灭活/抑制胶原酶/作用/活性？。 解离的材料将[然后]过滤/进入/通过？a 膜（[孔径：] 70 mm）。 然后，将在 Neubauer 室中对细胞进行计数，以用于以下程序。 母体和脐带血将收集在含有 EDTA 作为抗凝剂的/血液/合适的试管中。 血清用于病毒检测，白细胞裂解红细胞后做标记。\

胎儿和死产的尸检组织病理学和免疫组织化学检查以及成像形态发生研究将在胎儿和死产的大脑和其他器官中进行/由于 ZIKAV 感染。 除了在石蜡中进行通常的组织学处理外，其他器官将被冷冻并提交遗传物质提取和病毒 RNA 研究。 还将分析眼球以评估可能的眼部变化。

新生儿随访：

新生儿将在 IFF 的门诊诊所接受随访直至 3 岁，其常规包括第一年至少 6 次就诊，第二年和第三年每年至少 4 次就诊。 将在儿科传染病科和儿科门诊部设立一个多学科门诊部，以跟踪可能垂直接触寨卡病毒的儿童队列。 门诊部将配备医务人员，以及物理治疗、听力学、心理学和社会服务领域的专业人员。 医疗团队将与神经病学、儿科心脏病学和眼科以及医学遗传学服务等专业合作，负责跟踪患者。 必要时，这些患者将在 DIPe 病房入院以确立 [either] 诊断或初始方法 - {病例}。

建议对已知暴露于病毒或患有小头畸形的患者进行的初步评估将包括以下检查和/或评估：神经系统、眼部、听力、脑电图（如有必要）、心电图、用于 RT-PCR 的脐带血和 IgM。 新生儿的人体测量数据和体格检查，重点是根据胎龄和患者性别，使用Intergrowth Curve（2014）作为参考精确测量头围。 遗传学评估以检测可能危及/影响其他器官的畸形特征或先天性异常。

影像学检查：

1. transfontanelle sonography (USTF)，作为首选
2. 如果 TF 在技术上不可行，则进行无对比的头颅断层扫描 (CT)
3. 腹部超声
4. 超声心动图
5. 脑磁共振成像，当有指征时。 g) 新生儿听力筛查 (TAN)：

1.诱发光声发射（EOAE）；生命的 24-48 小时 2. 脑干听觉诱发电位 (PEATE/ABR)：小头畸形儿童生命中长达 1 个月。 如果不合格，必须在 30 天内重新测试。 如果重新测试失败，请立即将 [NB] 转发 [to _]。

h) 眼科新生儿筛查 (TON)：

1. 视网膜红光反射的检查和测试。
2. 眼底检查（fundoscopy）
3. RetCam 文档

在随后的会诊中，将保留临床随访、PC 测量、物理治疗的发育评估（包括早期刺激）以及发病率和死亡率评估。 在生命的第一年，PEATE 将每三个月进行一次。 随后的门诊就诊将每月进行一次，直到 6 个月大，在 6-12 个月期间每两个月一次，每三个月一次，直到 [生命] 满 3 岁。 眼科评估（眼底检查）将在每次返回时进行。

神经系统随访将取决于患者的初始状况。 没有小头畸形的患者将在出生、30 天和 2、4、6、9、12、18、24 和 36 个月时接受评估。 小头畸形患者将在出生时、30 天后以及每 2 或 3 个月接受一次评估，必要时可更频繁地接受评估。

运动发育的评估将通过 Dubowitz 检查（在前 72 小时内）、阿尔伯塔婴儿运动量表（AIMS；每三个月一次，直到孩子走路或完成 18 个月的生命）和 Bayley 测试-第 3 版在 12 岁时进行， 18 岁和 12-36 个月之间。

将在 12、24 和 36 个月时对语言发育进行评估，评估对神经发育、认知发育和语言技能的可能影响。