Vertikal eksponering for Zika-virus og dens konsekvenser for børns neuroudvikling (ZIKVIRUSIFF) (ZIKVIRUSIFF)

Hovedmålet med undersøgelsen er at vurdere den naturlige historie af vertikal ZIKV-overførsel fra graviditet til slutningen af ​​tredje leveår og eksistensen af ​​risikofaktorer forbundet med forekomsten af ​​kliniske og neurologiske lidelser, især mikrocefali.

En longitudinel undersøgelse vil blive udført fra drægtighed til slutningen af ​​det tredje leveår, hvor ZIKV-infektion vil være den vigtigste eksponering.

Prøvestørrelsen vil være 500 børn udsat for zika-virus. Prøvestørrelsen blev beregnet for sjældne hændelser med udgangspunkt i den sædvanlige mikrocefali-prævalens i Brasilien (2:10.000) og forventet stigning i antallet af tilfælde blandt gravide kvinder udsat for ZIKAV.

Undersøgelsen vil blive udført på Fernandes Figueira National Institute for Health of Women and Children (IFF). De gravide vil blive udvalgt i prænatalklinikken på IFF og i Family Health Strategy-enhederne på Centro de Saúde Escola Germano Sinval Faria (CDEGSF), som begge er fra FioCruz/RJ. Vi vil også rekruttere gravid kvinde fra den kliniske familie af SMS Rio de Janeiro.

Inklusionskriterier Undersøgelsespopulationen vil være sammensat af gravide kvinder, der viser symptomer, der er forenelige med ZIKAV-infektion, med hududslæt, artralgi-associeret feber, myalgi, ikke-purulent konjunktivitis eller hovedpine og asymptomatiske gravide kvinder identificeret samtidig med mulighed for eksponering . Vi vil inkludere patienter med RT-PCR positive.

Alle gravide kvinder, der er i prænatal opfølgning på IFF og CSGSF, uanset graviditetsalderen, er berettigede som ikke-eksponerede i begyndelsen.

Eksklusionskriterier Gravide kvinder med kromosomafvigelser påvist under fosterlivet eller fødslen vil blive udelukket.

Definition af eksponering Givet viden om, at omkring 80 % af ZIKAV-infektioner er asymptomatiske, vil eksponeringen blive bekræftet af positiviteten i diagnostiske tests (PCR eller serologiske test). I betragtning af den fremtidige tilgængelighed af serologiske tests, vil nogle strategier blive brugt til at definere eksponeringsgrupper, fordi indtil nu kun er PCR-testen tilgængelig, som kun forbliver positiv i den akutte fase af sygdommen.

Som beskrevet ovenfor vil de symptomatiske kvinder blive henvist til infektionsdiagnostisk bekræftelse ved RT-PCR og serologiske tests for dengue, chikcungunha, CMV, toxoplasmose og røde hunde.

Kvinder med og uden symptomer vil få taget blodprøver til serologiske tests i graviditetens tre trimestre og ved fødslen. Blodprøver vil blive opbevaret i et biodepot til ZIKA serologisk testning, når specifikke serologiske test er tilgængelige. Disse sekventielle prøver vil også blive brugt til at validere serologiske test, der er i udviklingsstadiet.

De eksponeringsgrupper, der skal sammenlignes, vil blive sammensat med udgangspunkt i resultaterne af de serologiske tests. De asymptomatiske individer, hvis blodprøver indikerer tilstedeværelsen af ​​Zika-infektion i fremtiden, vil migrere til gruppen af ​​udsatte.

De gravide kvinder i kohorten, der fremviser positive resultater for specifikke tests (PCR i den akutte fase og serologiske tests senere), vil blive betragtet som udsat for infektion, mens gravide kvinder med negative resultater vil blive betragtet som ikke eksponerede.

Denne anden gruppe kan kategoriseres som asymptomatisk og symptomatisk. Den tredje gruppe vil være de normale børn født af mødre uden zika bevist ved negativ IgG og IgM. Hvert barn vil blive fulgt i tre år fra fødslen og fremefter.

Resultater, der skal analyseres. Hovedresultatet vil være mikrocefali og/eller forsinkelse i udvikling ved brug af Bayley Score 3. udgave ved 12, 18 og 24-36 måneders alderen.

De sekundære undersøgelsesresultater vil være som følger: graviditetsultralydsstatus, placentaskader, øjen-, høre-, hjerte-, ernæringsstatus hos børn og neuroudviklingsmæssige ændringer fra fødsel til tre år, død hos gravide kvinder, abort, fosterdød og død under første tre leveår.

Dataindsamling:

Inklusionen af ​​gravide kvinder vil ske i de første 24 måneder af undersøgelsen. For at identificere resultaterne vil hvert barn blive fulgt fra fødslen til fuldførelsen af ​​tre års kronologisk alder. Den samlede undersøgelsesperiode for dataindsamling vil være på 5 år. Undersøgelsen vil blive gennemført i perioden januar 2016 - marts 2022.

Data vil blive indsamlet af sundhedsprofessionelle, som er knyttet til sundhedstjenester og yder assistance til undersøgelsespopulationen.

Data om graviditet, fødsel og de første tre leveår vil blive indhentet fra et interview med hver kvinde ved hjælp af et spørgeskema efter aftale. Derudover vil data til registreringer blive indsamlet i formularer udarbejdet til dette formål.

Dataindsamlingsformularen (CRF/DCF) vil blive konstrueret og valideret i alle dens dimensioner blandt tjenesterne. Der vil blive udarbejdet POP'er for undersøgelsens flowdiagram og for hver procedure og plejeniveau.

• Socioøkonomiske karakteristika (uddannelse, familieindkomst pr. indbygger, boligforhold, sanitet og affaldsindsamling); sundhedsmæssige forhold (komorbiditeter).
• Historie om eksponering for ZIKAV: identifikation af slægtninge, naboer og arbejdskolleger med Zika

Opfølgning af undersøgelsespopulationen

Opfølgning af de gravide:

De gravide kvinder, der er inkluderet i undersøgelsen, vil blive fulgt i prænatalklinikken på Fernandes Figueira National Brazilian Institute for Health of Women and Children.

Efter inklusion af de gravide kvinder i undersøgelsen vil konsultationer finde sted hver måned, og undersøgelser vil blive udført i henhold til følgende protokol:

• Føtal ultralyd i hvert trimester
• Serologiske undersøgelser for Zika, dengue, chikungunya, CMV, toxoplasmose og røde hunde hvert trimester
• PCR for Zika-virus hvis symptomatisk gravid kvinde
• Prænatale undersøgelser som anbefalet af Stork Network fra den brasilianske sundhedsminister
• Prænatale undersøgelser som anbefalet af det brasilianske Stork Network. Fostervandet kan opsamles, hvis det indikeres af tilstedeværelsen af ​​associerede medfødte anomalier.

Doppler:

Navlestrengen vil blive insoneret for at få et sonogram af navlepulsåren og dermed vurdere pulsatilitetsindekset (PI), modstandsindekset (RI) og peak systolic velocity (PSV).

Viruspåvisning i serum og andre humane sekreter Til påvisning af virus hos patienter ekstraheres RNA fra serum og/eller urin (200 ml) ved brug af RTP Pathogen (Stratec Biomedical AG, Birkenfeld, Tyskland) i henhold til producentens anvisninger. RNA isoleret tjener som skabelon i real-time /RT-PCR-reaktioner som beskrevet af: Lanciotti et al., 2008 og Faye et al., 2013.

Viruspåvisning i serum og andre humane sekreter Til genomisk sekventering vil specifikke områder af virusgenomet blive amplificeret ved RT-PCR-metoden. De således opnåede produkter vil blive oprenset ved agarosegelelektroforese og derefter ekstraheret fra gelen ved hjælp af QIAquick Gel Extraction (Qiagen) kit. Efter ekstraktion vil materialet blive kvantificeret i agarosegel ved sammenligning mellem båndintensiteter ved hjælp af Low DNA Mass Ladder (Life Technologies) standarden. Det nødvendige beløb til sekventering vil blive videresendt til Fiocruz sekventeringsplatformen. Sekvenserne vil blive redigeret manuelt ved hjælp af Bioedit (v. 7.0.5.3), og de fylogenetiske analyser vil blive udført ved hjælp af MEGA (v. 5:05) program.

Analyse af moderkagen og immunhistokemi. De friske moderkager vil blive sendt til Afdelingen for Patologisk Anatomi og Cytopatologi (DAPC/DPAC), hvor de opbevares i køleskabet i op til 48 timer. De beskrives, vejes og fotograferes i henhold til rutinen for analyse af placenta. Fragmenter fra chorionpladen, snoren og membranerne vil blive fjernet og frosset i flydende nitrogen. Placentapladen (fem områder), snoren (mindst to områder) og chorion (et fragment) fikseres i bufferet formalin maksimal tid: 30 timer. De vil derefter blive spaltet til histologisk behandling og indlejret i paraffin.

Fænotypisk karakterisering af placentaceller og moder- og navlestrengsblod og mundpodning fra børn ved flowcytometri Placentafragmenter vil blive opsamlet og vedligeholdt i sterilt DMEM (Sigma; St. Louis, MO, [USA]) kulturmedium (4 °C) og spaltet i flere fragmenter (tykkelse: 1-2 mm). Efter spaltning vaskes de i DMEM og udsættes for dissociationscyklusser i collagenase 1A (Sigma; _) (300 U/mg; i 1 % DMEM) enzym. Dissociation vil forekomme i 6-8 cyklusser (mild omrøring; 37 °C, 10 min hver). Den således opnåede cellesuspension vil blive centrifugeret (1000 rpm; 4 °C; 10 min), og pelleten vil blive placeret/suspenderet i DMEM med føtalt kalveserum (FCS; 10%; Sigma; _; 4 °C) for at /inaktivere / hæmme collagenase-enzymet /virkning /aktivitet?. Det dissocierede materiale vil [derefter] blive filtreret /in /through?a membran ([porediameter:] 70 mm). Derefter vil cellerne blive talt i et Neubauer-kammer til brug i følgende procedurer. Moderens og navlestrengsblodet vil blive opsamlet i /et blod /et passende rør indeholdende EDTA som antikoagulant. Serumet vil blive brugt til viral påvisning, og leukocytcellerne vil blive markeret efter lysis af røde blodlegemer.\

Obduktion af fostre og dødfødsler Histopatologiske og immunhistokemiske undersøgelser og billeddiagnostisk morfogenese-undersøgelse vil blive udført i hjernen og andre organer fra fostre og dødfødsler/som følge af ZIKAV-infektion. Udover den sædvanlige histologiske behandling i paraffin, vil de øvrige organer blive frosset og underkastet ekstraktion af genetisk materiale og undersøgelse af viralt RNA. Øjeæblet vil også blive analyseret for at evaluere mulige øjenforandringer.

Opfølgning af nyfødte:

Nyfødte vil blive fulgt indtil 3 års alderen i ambulatoriet på IFF, hvis rutine omfatter mindst 6 besøg det første år, 4 besøg/år det andet og tredje år. Et multidisciplinært ambulatorium vil blive etableret i både Enhed for Infektionssygdomme i Pædiatri og Pædiatrisk Ambulatorium for at følge kohorten af ​​børn med chance for vertikal eksponering for ZIKA-virussen. Ambulatoriet vil have medicinsk personale og fagfolk inden for områderne fysioterapi, fonoaudiologi, psykologi og social service. Lægeteamet får ansvaret for at følge patienterne i samarbejde med specialer som neurologi, pædiatrisk kardiologi og oftalmologi samt medicinsk genetikservice. Når det er nødvendigt, vil indlæggelse af disse patienter for at fastslå [enten] diagnosen eller indledende tilgang -{i tilfældet} ske på DIPe-afdelingen.

Den indledende evaluering som anbefalet for patienter, der enten vides at være udsat for virus eller med mikrocefali, vil bestå af følgende undersøgelser og/eller evalueringer: neurologiske, okulære, hørende, EEG om nødvendigt, EKG, navlestrengsblod til RT-PCR og IgM. Antropometriske data og fysisk undersøgelse af det nyfødte spædbarn, med vægt på præcis måling af hovedomkreds ved hjælp af Intergrowth Curve (2014) som reference, i henhold til gestationsalder og patientens køn. Evaluering af Genetics for at påvise dysmorfe karakteristika eller medfødte anomalier, der kan kompromittere/påvirke andre organer.

Billedbehandlingsprøver:

1. transfontanelle sonografi (USTF), som førstevalg
2. kranial tomografi (CT) uden kontrast, hvis TF ikke er teknisk muligt
3. Abdominal ultralyd
4. Ekkokardiogram
5. Hjernemagnetisk resonansbilleddannelse, når indiceret. g) Nyfødt hørescreening (TAN):

1. Fremkaldte optoakustiske emissioner (EOAE); 24-48 timer af livet 2. Auditivt fremkaldt potentiale af hjernestamme (PEATE/ABR): op til 1 måned af livet hos børn med mikrocefali. I tilfælde af fejl skal gentest udføres inden for 30 dage. I tilfælde af gentestfejl sendes [NB] straks [til _].

h) Okulær neonatal screening (TON):

1. Inspektion og test af retinal rød refleksion.
2. Eye Fund eksamen (fundoskopi)
3. Dokumentation med RetCam

I de efterfølgende konsultationer vil den kliniske opfølgning, PC-måling, udviklingsevaluering (herunder tidlig stimulering) ved fysioterapi samt morbiditets- og dødelighedsevaluering blive fastholdt. I det første leveår udføres PEATE hver tredje måned. De efterfølgende klinikbesøg vil finde sted månedligt indtil 6 måneders alderen, hver anden måned i perioden 6-12 måneder og hver tredje måned indtil tre år [leveår]. Den oftalmologiske undersøgelse (funduskopisk undersøgelse) vil blive afholdt hver tilbagevenden.

Den neurologiske opfølgning vil afhænge af patientens initiale tilstand. Patienter uden mikrocefali vil blive evalueret ved fødslen, 30 dage og 2, 4, 6, 9, 12, 18, 24 og 36 måneder. Patienter med mikrocefali vil blive evalueret ved fødslen, 30 dage og hver 2. eller 3. måned, eller hyppigere, hvis det er nødvendigt.

Evaluering af motorisk udvikling vil blive udført ved Dubowitz-undersøgelsen (i de første 72 timer), Alberta Infant Motor Scale (AIMS; hver tredje måned, indtil barnet går eller fuldfører 18 måneder af livet), og Bayley Test-3. udgave kl. 12, 18 og mellem 12-36 måneder.

Evaluering af sprogudvikling vil blive udført efter 12, 24 og 36 måneder med hensyn til mulige effekter på neuroudvikling, kognitiv udvikling og sprogfærdigheder.