Vertikal exponering för zikavirus och dess konsekvenser för barns neuroutveckling (ZIKVIRUSIFF) (ZIKVIRUSIFF)

Det huvudsakliga målet med studien är att bedöma den naturliga historien för vertikal ZIKV-överföring från graviditet till slutet av tredje levnadsåret och förekomsten av riskfaktorer associerade med förekomsten av kliniska och neurologiska störningar, speciellt mikrocefali.

En longitudinell studie kommer att genomföras från graviditet till slutet av det tredje levnadsåret, under vilken ZIKV-infektion kommer att vara den huvudsakliga exponeringen.

Provstorleken kommer att vara 500 barn exponerade för zikavirus. Provstorleken beräknades för sällsynta händelser med utgångspunkt från den vanliga mikrocefaliprevalensen i Brasilien (2:10 000) och förväntad ökning av antalet fall bland gravida kvinnor som exponerats för ZIKAV.

Studien kommer att genomföras vid Fernandes Figueira National Institute for Health of Women and Children (IFF). De gravida kvinnorna kommer att väljas ut på mödravårdskliniken på IFF och i Family Health Strategy-enheterna, på Centro de Saúde Escola Germano Sinval Faria (CDEGSF), som båda är från FioCruz/RJ. Vi kommer också att rekrytera gravid kvinna från den kliniska familjen SMS Rio de Janeiro.

Inklusionskriterier Studiepopulationen kommer att bestå av gravida kvinnor som uppvisar symtom som är förenliga med ZIKAV-infektion, med hudutslag, artralgi-associerad feber, myalgi, icke-purulent konjunktivit eller huvudvärk och asymtomatiska gravida kvinnor som identifieras samtidigt med risk för exponering. . Vi kommer att inkludera patienter med RT-PCR-positiva.

Alla gravida kvinnor som är i prenatal uppföljning på IFF och CSGSF, oavsett graviditetsålder, är berättigade som icke exponerade i början.

Uteslutningskriterier Gravida kvinnor med kromosomavvikelser som upptäckts under fosterliv eller födsel kommer att uteslutas.

Definition av exponering Med tanke på vetskapen om att cirka 80 % av ZIKAV-infektionerna är asymtomatiska, kommer exponeringen att bekräftas av positiviteten i diagnostiska tester (PCR eller serologiska tester). Med tanke på den framtida tillgängligheten av serologiska tester kommer vissa strategier att användas för att definiera exponeringsgrupper eftersom hittills endast PCR-testet är tillgängligt, vilket förblir positivt endast i den akuta fasen av sjukdomen.

Som beskrivits ovan kommer de symtomatiska kvinnorna att remitteras för infektionsdiagnostisk bekräftelse genom RT-PCR och serologiska tester för dengue, chikcungunha, CMV, toxoplasmos och röda hund.

Kvinnor med och utan symtom kommer att få sitt blodprov för serologiska tester under graviditetens tre trimester och vid födseln. Blodprover kommer att lagras i ett biolager för ZIKA serologiska tester när specifika serologiska tester finns tillgängliga. Dessa sekventiella prover kommer också att användas för att validera serologiska tester som är i utvecklingsstadiet.

Exponeringsgrupperna som ska jämföras kommer att sammanställas utifrån resultaten från de serologiska testerna. De asymtomatiska individer vars blodprov indikerar förekomst av Zika-infektion i framtiden kommer att migrera till gruppen av utsatta.

De gravida kvinnorna i kohorten som uppvisar positiva resultat för specifika tester (PCR i den akuta fasen och serologiska tester senare) kommer att anses vara exponerade för infektion medan gravida kvinnor med negativa resultat kommer att anses inte exponerade.

Denna andra grupp kan kategoriseras som asymtomatisk och symtomatisk. Den tredje gruppen kommer att vara de normala barn som föds av mödrar utan zika bevisat med negativt IgG och IgM. Varje barn kommer att följas i tre år från födseln och framåt.

Resultat som ska analyseras Huvudresultatet kommer att vara mikrocefali och/eller fördröjning av utveckling med Bayley Score 3:e upplagan vid 12, 18 och 24-36 månaders ålder.

De sekundära studieresultaten kommer att vara följande: graviditetsultraljudsstatus, placentaskador, ögon-, hörsel-, hjärt-, näringsstatus hos barn och neuroutvecklingsförändringar från födsel till tre år, död hos gravida kvinnor, abort, fosterdöd och död under tre första levnadsåren.

Datainsamling:

Inklusionen av gravida kvinnor kommer att ske under de första 24 månaderna av studien. För att identifiera resultaten kommer varje barn att följas från födseln tills de fyllt tre år i kronologisk ålder. Den totala studietiden för datainsamling kommer att vara 5 år. Studien kommer att genomföras under perioden jan 2016 - mars 2022.

Data kommer att samlas in av hälso- och sjukvårdspersonal som är kopplade till hälso- och sjukvårdstjänster och ger assistans till studiepopulationen.

Data om graviditet, födelse och de tre första levnadsåren kommer att erhållas från en intervju med varje kvinna med hjälp av ett frågeformulär efter utnämningen. Dessutom kommer data för register att samlas in i formulär som är utarbetade för detta ändamål.

Datainsamlingsformuläret (CRF/DCF) kommer att konstrueras och valideras i alla dess dimensioner bland tjänsterna. POP för studieflödesdiagrammet och för varje procedur och vårdnivå kommer att utarbetas.

• Socioekonomiska egenskaper (utbildning, familjeinkomst per capita, bostadsförhållanden, sanitet och sophämtning); hälsotillstånd (komorbiditeter).
• Historik om exponering för ZIKAV: identifiering av släktingar, grannar och arbetskollegor med Zika

Uppföljning av studiepopulationen

Uppföljning av gravida kvinnor:

De gravida kvinnorna som ingår i studien kommer att följas på prenatalkliniken vid Fernandes Figueira National Brazilian Institute for Health of Women and Children.

Efter inkludering av de gravida kvinnorna i studien kommer konsultationer att ske varje månad och undersökningar kommer att utföras enligt följande protokoll:

• Fetalt ultraljud vid varje trimester
• Serologiska undersökningar för Zika, dengue, chikungunya, CMV, toxoplasmos och röda hund varje trimester
• PCR för Zika-virus om symtomatisk gravid kvinna
• Prenatala undersökningar som rekommenderas av Stork Network från Brasiliens hälsominister
• Prenatala undersökningar som rekommenderas av Brazilian Stork Network. Fostervattnet kan samlas in om det indikeras av närvaron av associerade medfödda anomalier.

Doppler:

Navelsträngen kommer att insoneras för att få ett sonogram av navelartären och på så sätt bedöma pulsatilitetsindex (PI), motståndsindex (RI) och peak systolic velocity (PSV).

Virusdetektion i serum och andra mänskliga sekret För detektering av virus hos patienter extraheras RNA från serum och/eller urin (200 ml) med hjälp av RTP Pathogen (Stratec Biomedical AG, Birkenfeld, Tyskland) enligt tillverkarens instruktioner. RNA isolerat fungerar som en mall i i realtid /RT-PCR-reaktioner som beskrivs av: Lanciotti et al., 2008 och Faye et al., 2013.

Virusdetektion i serum och andra mänskliga sekret För genomisk sekvensering kommer specifika regioner av virusgenomet att amplifieras med RT-PCR-metoden. De sålunda erhållna produkterna kommer att renas med agarosgelelektrofores och sedan extraheras från gelén med hjälp av QIAquick Gel Extraction (Qiagen) kit. Efter extraktion kommer materialet att kvantifieras i agarosgel genom jämförelse mellan bandintensiteter med hjälp av standarden Low DNA Mass Ladder (Life Technologies). Mängden som behövs för sekvensering kommer att vidarebefordras till Fiocruz sekvenseringsplattform. Sekvenserna kommer att redigeras manuellt med hjälp av Bioedit (v. 7.0.5.3), och de fylogenetiska analyserna kommer att utföras med MEGA (v. 5:05) program.

Analys av moderkakan och immunhistokemi De färska moderkakan kommer att skickas till Institutionen för patologisk anatomi och cytopatologi (DAPC/DPAC) där de kommer att förvaras i kylskåp i upp till 48 timmar. De beskrivs, vägs och fotograferas enligt rutinen för analys av placenta. Fragment från korionplattan, snöret och membranen kommer att tas bort och frysas i flytande kväve. Placentaplattan (fem områden), tråden (minst två områden) och chorion (ett fragment) fixeras i buffrat formalin maximal tid: 30 timmar. De kommer sedan att klyvas för histologisk bearbetning och bäddas in i paraffin.

Fenotypisk karakterisering av placentaceller och moder- och navelsträngsblod och munprovning av barn med flödescytometri Placentafragment kommer att samlas in och bevaras i sterilt DMEM (Sigma; St. Louis, MO, [USA]) odlingsmedium (4 °C) och klyvs i flera fragment (tjocklek: 1-2 mm). Efter klyvning tvättas de i DMEM och utsätts för dissociationscykler i kollagenas 1A (Sigma; _) (300 U/mg; i 1 % DMEM) enzym. Dissociation kommer att ske i 6-8 cykler (mild agitation; 37 °C, 10 min vardera). Den sålunda erhållna cellsuspensionen kommer att centrifugeras (1000 rpm; 4 °C; 10 min) och pelleten kommer att placeras/suspenderas i DMEM med fetalt kalvserum (FCS; 10%; Sigma; _; 4 °C) för att /inaktivera / hämma kollagenasenzymet /verkan /aktivitet?. Det dissocierade materialet kommer [då] att filtreras /in /through?a membran ([pordiameter:] 70 mm). Sedan kommer cellerna att räknas i en Neubauer-kammare för användning i följande procedurer. Moderns och navelsträngsblodet kommer att samlas upp i /ett blod /ett lämpligt rör som innehåller EDTA som antikoagulant. Serumet kommer att användas för virusdetektion och leukocytcellerna kommer att markeras efter lysering av röda blodkroppar.\

Obduktion av foster och dödfödslar Histopatologiska och immunhistokemiska undersökningar och avbildningsmorfogenesstudier kommer att utföras i hjärnan och andra organ från foster och dödfödda/till följd av ZIKAV-infektion. Förutom den vanliga histologiska bearbetningen i paraffin kommer de andra organen att frysas och underkastas extraktion av genetiskt material och undersökning av viralt RNA. Ögongloben kommer också att analyseras för att utvärdera möjliga okulära förändringar.

Uppföljning av nyfödda:

Nyfödda kommer att följas fram till 3 års ålder i öppenvården på IFF, vars rutin omfattar minst 6 besök första året, 4 besök/år andra och tredje året. En multidisciplinär öppenvårdsmottagning kommer att etableras både vid enheten för infektionssjukdomar inom pediatrik och på polikliniken för barn för att följa kohorten av barn med risk för vertikal exponering för ZIKA-viruset. Polikliniken kommer att ha medicinsk personal och yrkesverksamma inom områdena sjukgymnastik, fonoaudiologi, psykologi och socialtjänst. Det medicinska teamet kommer att ansvara för att följa patienterna, i samarbete med specialiteter som neurologi, pediatrisk kardiologi och oftalmologi samt medicinsk genetiktjänst. Närhelst det är nödvändigt, kommer inläggning av dessa patienter för att fastställa [antingen] diagnosen eller initialt tillvägagångssätt -{i ärendet} att ske på DIPe-avdelningen.

Den initiala utvärderingen som rekommenderas för patienter som antingen är kända för att vara exponerade för viruset eller med mikrocefali kommer att bestå av följande undersökningar och/eller utvärderingar: neurologiska, okulära, hörsel, EEG vid behov, EKG, navelsträngsblod för RT-PCR och IgM. Antropometriska data och fysisk undersökning av det nyfödda barnet, med tonvikt på exakt mätning av huvudomkrets med Intergrowth Curve (2014) som referens, enligt graviditetsålder och patientens kön. Utvärdering av Genetics för att upptäcka dysmorfa egenskaper eller medfödda anomalier som kan äventyra/påverka andra organ.

Bildundersökningar:

1. transfontanelle sonografi (USTF), som förstahandsval
2. kranial tomografi (CT) utan kontrast, om TF inte är tekniskt möjligt
3. Abdominal ultraljud
4. Ekokardiogram
5. Hjärnmagnetisk resonanstomografi, när indikerat. g) Hörselscreening för nyfödda (TAN):

1. Framkallade optoakustiska emissioner (EOAE); 24-48 timmar av livet 2. Auditivt framkallad potential för hjärnstam (PEATE/ABR): upp till 1 månad av livet hos barn med mikrocefali. Vid misslyckande måste omtestning göras inom 30 dagar. Vid omtestningsfel, vidarebefordra [ANM.] omedelbart [till _].

h) Okulär neonatal screening (TON):

1. Inspektion och testning av retinal Röd Reflektion.
2. Ögonfondundersökning (fundoskopi)
3. Dokumentation med RetCam

I de efterföljande konsultationerna kommer den kliniska uppföljningen, PC-mätningen, utvecklingsutvärderingen (inklusive tidig stimulering) med sjukgymnastik samt utvärdering av sjuklighet och dödlighet att upprätthållas. Under det första levnadsåret kommer PEATE att utföras var tredje månad. De efterföljande klinikbesöken kommer att ske månadsvis fram till 6 månaders ålder, varannan månad under perioden 6-12 månader och var tredje månad fram till tre år. Den oftalmologiska utvärderingen (funduskopisk undersökning) kommer att hållas varje retur.

Den neurologiska uppföljningen kommer att bero på patientens initiala tillstånd. Patienter utan mikrocefali kommer att utvärderas vid födseln, 30 dagar och 2, 4, 6, 9, 12, 18, 24 och 36 månader. Patienter med mikrocefali kommer att utvärderas vid födseln, 30 dagar och varannan eller var tredje månad, eller oftare vid behov.

Utvärdering av motorisk utveckling kommer att göras genom Dubowitz-undersökningen (under de första 72 timmarna), Alberta Infant Motor Scale (AIMS; var tredje månad tills barnet går eller fullbordar 18 månader av livet), och Bayley Test-3:e upplagan vid 12, 18 och mellan 12-36 månaders ålder.

Utvärdering av språkutveckling kommer att göras vid 12, 24 och 36 månader, med hänsyn till möjliga effekter på neuroutveckling, kognitiv utveckling och språkkunskaper.