Exposition verticale au virus Zika et ses conséquences sur le développement neurologique de l'enfant (ZIKVIRUSIFF) (ZIKVIRUSIFF)

L'objectif principal de l'étude est d'évaluer l'histoire naturelle de la transmission verticale du ZIKV de la grossesse à la fin de la troisième année de vie et l'existence de facteurs de risque associés à l'incidence de troubles cliniques et neurologiques, en particulier la microcéphalie.

Une étude longitudinale sera menée de la gestation jusqu'à la fin de la troisième année de vie, durant laquelle l'infection au ZIKV sera la principale exposition.

La taille de l'échantillon sera de 500 enfants exposés au virus zika. La taille de l'échantillon a été calculée pour les événements rares sur la base de la prévalence habituelle de la microcéphalie au Brésil (2:10.000) et l'augmentation attendue du nombre de cas chez les femmes enceintes exposées au ZIKAV.

L'étude sera menée à l'Institut national Fernandes Figueira pour la santé des femmes et des enfants (IFF). Les femmes enceintes seront sélectionnées dans la clinique de soins prénatals de l'IFF et dans les unités de stratégie de santé familiale du Centro de Saúde Escola Germano Sinval Faria (CDEGSF), toutes deux de FioCruz/RJ. Nous recruterons également une femme enceinte de la famille clinique de SMS Rio de Janeiro.

Critères d'inclusion La population de l'étude sera composée de femmes enceintes présentant des symptômes compatibles avec une infection à ZIKAV, avec éruption cutanée, fièvre associée à des arthralgies, myalgies, conjonctivite non purulente, ou céphalées et de femmes enceintes asymptomatiques identifiées en même temps de possibilité d'exposition . Nous inclurons les patients positifs à la RT-PCR.

Toutes les femmes enceintes qui sont en suivi prénatal à l'IFF et au CSGSF, quel que soit l'âge gestationnel, sont éligibles comme non exposées au départ.

Critères d'exclusion Les femmes enceintes présentant des anomalies chromosomiques détectées au cours de la vie fœtale ou de l'accouchement seront exclues.

Définition de l'exposition Sachant qu'environ 80% des infections au ZIKAV sont asymptomatiques, l'exposition sera confirmée par la positivité aux tests diagnostiques (PCR ou tests sérologiques). Compte tenu de la disponibilité future des tests sérologiques, certaines stratégies seront utilisées pour définir les groupes d'exposition car jusqu'à présent seul le test PCR est disponible, qui ne reste positif qu'en phase aiguë de la maladie.

Comme décrit ci-dessus, les femmes symptomatiques seront référées pour une confirmation diagnostique de l'infection par RT-PCR et des tests sérologiques pour la dengue, le chikcungunha, le CMV, la toxoplasmose et la rubéole.

Les femmes avec et sans symptômes subiront des prélèvements sanguins pour des tests sérologiques au cours des trois trimestres de la grossesse et à la naissance. Les échantillons de sang seront conservés dans un dépôt biologique pour les tests sérologiques ZIKA lorsque des tests sérologiques spécifiques seront disponibles. Ces prélèvements séquentiels serviront également à valider les tests sérologiques en cours de développement.

Les groupes d'exposition à comparer seront composés sur la base des résultats des tests sérologiques. Les individus asymptomatiques dont les échantillons de sang indiquent la présence d'une infection à Zika à l'avenir migreront vers le groupe des personnes exposées.

Les femmes enceintes de la cohorte présentant des résultats positifs pour des tests spécifiques (PCR en phase aiguë et tests sérologiques plus tard) seront considérées comme exposées à l'infection tandis que les femmes enceintes avec des résultats négatifs seront considérées comme non exposées.

Ce deuxième groupe peut être classé comme asymptomatique et symptomatique. Le troisième groupe sera les enfants normaux nés de mères sans zika prouvé par des IgG et IgM négatifs. Chaque enfant sera suivi pendant trois ans à compter de la naissance.

Critères de jugement à analyser Le principal critère de jugement sera la microcéphalie et/ou le retard de développement à l'aide du Bayley Score 3e édition à 12, 18 et 24-36 mois.

Les résultats secondaires de l'étude seront les suivants : état des échographies de grossesse, lésions placentaires, état oculaire, auditif, cardiaque, nutritionnel des enfants et changements neurodéveloppementaux de la naissance à trois ans, décès chez les femmes enceintes, avortement, mort fœtale et décès pendant la trois premières années de vie.

Collecte de données:

L'inclusion des femmes enceintes interviendra dans les 24 premiers mois de l'étude. Pour identifier les résultats, chaque enfant sera suivi de la naissance à la fin de trois ans d'âge chronologique. La période d'étude totale pour la collecte des données sera de 5 ans. L'étude sera menée entre janvier 2016 et mars 2022.

Les données seront recueillies par des professionnels de la santé qui sont liés aux services de santé et qui fournissent une assistance à la population étudiée.

Les données sur la gestation, la naissance et les trois premières années de vie seront obtenues à partir d'un entretien avec chaque femme à l'aide d'un questionnaire après rendez-vous. En outre, les données pour les enregistrements seront collectées dans des formulaires préparés à cet effet.

Le formulaire de collecte des données (CRF/DCF) sera construit et validé dans toutes ses dimensions auprès des services. Des POP pour le diagramme de flux de l'étude et pour chaque procédure et niveau de soins seront préparés.

• Caractéristiques socioéconomiques (éducation, revenu familial par habitant, conditions de logement, assainissement et ramassage des ordures) ; problèmes de santé (comorbidités).
• Antécédents d'exposition au ZIKAV : identification des parents, voisins et collègues de travail atteints de Zika

Suivi de la population étudiée

Suivi des femmes enceintes :

Les femmes enceintes incluses dans l'étude seront suivies à la clinique prénatale de l'Institut national brésilien Fernandes Figueira pour la santé des femmes et des enfants.

Après inclusion des femmes enceintes dans l'étude, les consultations auront lieu mensuellement et les examens seront effectués selon le protocole suivant :

• Échographie fœtale à chaque trimestre
• Examens sérologiques pour Zika, dengue, chikungunya, CMV, toxoplasmose et rubéole chaque trimestre
• PCR pour le virus Zika si femme enceinte symptomatique
• Examens prénataux recommandés par le Stork Network du ministre brésilien de la Santé
• Examens prénataux recommandés par le Réseau brésilien des cigognes Le liquide amniotique peut être prélevé si indiqué par la présence d'anomalies congénitales associées.

Doppler :

Le cordon ombilical sera insonorisé pour obtenir un sonogramme de l'artère ombilicale et ainsi évaluer l'indice de pulsatilité (PI), l'indice de résistance (RI) et la vitesse systolique maximale (PSV).

Détection du virus dans le sérum et autres sécrétions humaines Pour la détection du virus chez les patients, l'ARN est extrait du sérum et/ou de l'urine (200 ml) à l'aide du kit RTP Pathogen (Stratec Biomedical AG, Birkenfeld, Allemagne) conformément aux instructions du fabricant. L'ARN isolé sert de matrice dans les réactions en temps réel/RT-PCR comme décrit par : Lanciotti et al., 2008 et Faye et al., 2013.

Détection de virus dans le sérum et autres sécrétions humaines Pour le séquençage génomique, des régions spécifiques du génome viral seront amplifiées par la méthode RT-PCR. Les produits ainsi obtenus seront purifiés par électrophorèse sur gel d'agarose puis extraits du gel à l'aide du kit QIAquick Gel Extraction (Qiagen). Après extraction, le matériel sera quantifié en gel d'agarose par comparaison entre les intensités de bande en utilisant le standard Low DNA Mass Ladder (Life Technologies). Le montant nécessaire au séquençage sera transmis à la plateforme de séquençage Fiocruz. Les séquences seront éditées manuellement à l'aide du Bioedit (v. 7.0.5.3), et les analyses phylogénétiques seront effectuées à l'aide du MEGA (v. 5:05) programme.

Analyse du placenta et immunohistochimie Les placentas frais seront acheminés au Service d'Anatomie Pathologique et Cytopathologie (DAPC/DPAC) où ils seront conservés au réfrigérateur jusqu'à 48 h. Ils sont décrits, pesés et photographiés selon la routine d'analyse du placenta. Des fragments de la plaque chorionique, du cordon et des membranes seront retirés et congelés dans de l'azote liquide. La plaque placentaire (cinq zones), le cordon (au moins deux zones), et le chorion (un fragment) seront fixés dans du formol tamponné temps maximum : 30 h). Ils seront ensuite clivés pour un traitement histologique et inclus dans de la paraffine.

Caractérisation phénotypique des cellules placentaires et du sang de cordon maternel et ombilical et de l'écouvillon oral de l'enfant par cytométrie en flux en plusieurs fragments (épaisseur : 1-2 mm). Après clivage, elles sont lavées dans du DMEM et soumises à des cycles de dissociation dans l'enzyme collagénase 1A (Sigma ; _) (300 U/mg ; dans 1% DMEM). La dissociation se produira en 6 à 8 cycles (agitation douce; 37 ° C, 10 min chacun). La suspension cellulaire ainsi obtenue sera centrifugée (1000 rpm ; 4 °C ; 10 min) et le culot sera placé/suspendu dans du DMEM avec du sérum de veau fœtal (FCS ; 10 % ; Sigma ; _ ; 4 °C) pour /inactiver / inhiber l'enzyme collagénase /action /activité?. La matière dissociée sera [alors] filtrée /dans /à travers ?a membrane ([diamètre des pores :] 70 mm). Ensuite, les cellules seront comptées dans une chambre de Neubauer pour être utilisées dans les procédures suivantes. Le sang de la mère et du cordon ombilical sera prélevé dans /un sang /un tube approprié contenant de l'EDTA comme anticoagulant. Le sérum sera utilisé pour la détection virale, et les cellules leucocytaires seront marquées après lyse des globules rouges.\

Nécropsie des fœtus et des mort-nés Des examens histopathologiques et immunohistochimiques et une étude de la morphogenèse par imagerie seront effectués dans le cerveau et d'autres organes des fœtus et des mort-nés / à la suite d'une infection au ZIKAV. Outre le traitement histologique habituel en paraffine, les autres organes seront congelés et soumis à l'extraction du matériel génétique et à l'investigation de l'ARN viral. Le globe oculaire sera également analysé pour évaluer d'éventuels changements oculaires.

Suivi des nouveau-nés :

Les nouveau-nés seront suivis jusqu'à l'âge de 3 ans dans la clinique externe de l'IFF, dont la routine comprend au moins 6 visites la première année, 4 visites/an les deuxième et troisième années. Une clinique externe multidisciplinaire sera établie à la fois dans l'unité des maladies infectieuses en pédiatrie et dans la clinique externe pédiatrique pour suivre la cohorte d'enfants présentant un risque d'exposition verticale au virus ZIKA. La clinique externe disposera de personnel médical et de professionnels dans les domaines de la physiothérapie, de la phonoaudiologie, de la psychologie et des services sociaux. L'équipe médicale sera responsable du suivi des patients, en collaboration avec des spécialités telles que la neurologie, la cardiologie et l'ophtalmologie pédiatriques et le service de génétique médicale. Chaque fois que nécessaire, l'admission de ces patients pour établir [soit] le diagnostic ou l'approche initiale -{du cas} se fera dans le service DIPe.

L'évaluation initiale telle que recommandée pour les patients connus pour être exposés au virus ou atteints de microcéphalie comprendra les examens et/ou évaluations suivants : neurologique, oculaire, auditif, EEG si nécessaire, ECG, sang de cordon pour RT-PCR et IgM. Données anthropométriques et examen physique du nouveau-né, en mettant l'accent sur la mesure précise du périmètre crânien en utilisant la courbe d'intercroissance (2014) comme référence, selon l'âge gestationnel et le sexe du patient. Évaluation par la Génétique pour détecter les caractéristiques dysmorphiques ou les anomalies congénitales qui peuvent compromettre/affecter d'autres organes.

Examens d'imagerie :

1. échographie transfontanelle (USTF), comme premier choix
2. tomographie crânienne (CT) sans produit de contraste, si la TF n'est techniquement pas possible
3. Échographie abdominale
4. Échocardiogramme
5. Imagerie par résonance magnétique cérébrale, lorsque cela est indiqué. g) Dépistage auditif du nouveau-né (TAN) :

1. Émissions optoacoustiques évoquées (EOAE); 24-48 h de vie 2. Potentiel évoqué auditif du tronc cérébral (PEATE/ABR) : jusqu'à 1 mois de vie chez les enfants atteints de microcéphalie. En cas d'échec, un nouveau test doit être effectué dans les 30 jours. En cas d'échec du retest, transmettre [le NB] immédiatement [à _].

h) Dépistage néonatal oculaire (TON) :

1. Inspection et test de la réflexion rouge rétinienne.
2. Examen du fonds oculaire (fundoscopie)
3. Documentation avec RetCam

Lors des consultations ultérieures, le suivi clinique, la mesure de la PC, l'évaluation du développement (y compris la stimulation précoce) par la kinésithérapie et l'évaluation de la morbidité et de la mortalité seront maintenus. Au cours de la première année de vie, PEATE sera effectué tous les trois mois. Les visites ultérieures à la clinique auront lieu tous les mois jusqu'à l'âge de 6 mois, tous les deux mois pendant la période de 6 à 12 mois et tous les trois mois jusqu'à trois ans [de vie]. L'évaluation ophtalmologique (examen du fond d'œil) aura lieu à chaque retour.

Le suivi neurologique dépendra de l'état initial du patient. Les patients sans microcéphalie seront évalués à la naissance, 30 jours et 2, 4, 6, 9, 12, 18, 24 et 36 mois. Les patients atteints de microcéphalie seront évalués à la naissance, à 30 jours et tous les 2 ou 3 mois, ou plus fréquemment si nécessaire.

L'évaluation du développement moteur se fera par l'examen Dubowitz (dans les 72 premières heures), Alberta Infant Motor Scale (AIMS; tous les trois mois jusqu'à ce que l'enfant marche ou complète 18 mois de vie), et Bayley Test-3e édition à 12, 18 ans et entre 12 et 36 mois.

L'évaluation du développement du langage sera effectuée à 12, 24 et 36 mois, en ce qui concerne les effets possibles sur le développement neurologique, le développement cognitif et les compétences linguistiques.