Vertikal eksponering for zikavirus og dets konsekvenser for barns nevroutvikling (ZIKVIRUSIFF) (ZIKVIRUSIFF)

Hovedmålet med studien er å vurdere den naturlige historien til vertikal ZIKV-overføring fra graviditet til slutten av tredje leveår og eksistensen av risikofaktorer assosiert med forekomsten av kliniske og nevrologiske lidelser, spesielt mikrocefali.

En longitudinell studie vil bli utført fra svangerskapet til slutten av tredje leveår, hvor ZIKV-infeksjon vil være hovedeksponeringen.

Prøvestørrelse vil være 500 barn utsatt for zikavirus. Prøvestørrelsen ble beregnet for sjeldne hendelser med utgangspunkt i vanlig mikrocefali-prevalens i Brasil (2:10.000) og forventet økning i antall tilfeller blant gravide kvinner eksponert for ZIKAV.

Studien vil bli utført ved Fernandes Figueira National Institute for Health of Women and Children (IFF). De gravide vil bli valgt ut i prenatalklinikken ved IFF og i Family Health Strategy units, ved Centro de Saúde Escola Germano Sinval Faria (CDEGSF), som begge er fra FioCruz/RJ. Vi vil også rekruttere gravid kvinne fra den kliniske familien til SMS Rio de Janeiro.

Inklusjonskriterier Studiepopulasjonen vil være sammensatt av gravide kvinner som viser symptomer forenlig med ZIKAV-infeksjon, med hudutslett, artralgi-assosiert feber, myalgi, ikke-purulent konjunktivitt eller hodepine og asymptomatiske gravide kvinner identifisert samtidig med mulighet for eksponering . Vi vil inkludere pasienter med RT-PCR positive.

Alle gravide kvinner som er i prenatal oppfølging ved IFF og CSGSF, uavhengig av svangerskapsalder, er kvalifisert som ikke-eksponert i begynnelsen.

Eksklusjonskriterier Gravide kvinner med kromosomavvik påvist under fosterliv eller fødsel vil bli ekskludert.

Definisjon av eksponering Gitt kunnskapen om at ca. 80 % av ZIKAV-infeksjoner er asymptomatiske, vil eksponeringen bekreftes av positiviteten i diagnostiske tester (PCR eller serologiske tester). Tatt i betraktning den fremtidige tilgjengeligheten av serologiske tester, vil noen strategier bli brukt for å definere eksponeringsgrupper fordi til nå er bare PCR-testen tilgjengelig, som forblir positiv kun i den akutte fasen av sykdommen.

Som beskrevet ovenfor vil de symptomatiske kvinnene bli henvist for infeksjonsdiagnostisk bekreftelse ved RT-PCR, og serologiske tester for dengue, chikcungunha, CMV, toksoplasmose og røde hunder.

Kvinner med og uten symptomer vil få tatt blodprøver for serologiske tester i de tre trimesterne av svangerskapet og ved fødselen. Blodprøver vil bli lagret i et biolager for ZIKA serologisk testing når spesifikke serologiske tester er tilgjengelige. Disse sekvensielle prøvene vil også bli brukt til å validere serologiske tester som er i utviklingsstadiet.

Eksponeringsgruppene som skal sammenlignes vil sammensettes med utgangspunkt i resultatene fra de serologiske testene. De asymptomatiske personene hvis blodprøver indikerer tilstedeværelse av Zika-infeksjon i fremtiden, vil migrere til gruppen av utsatte.

De gravide i kohorten som viser positive resultater for spesifikke tester (PCR i akuttfase og serologiske tester senere) vil bli vurdert som utsatt for infeksjon, mens gravide med negative resultater vil bli vurdert som ikke eksponert.

Denne andre gruppen kan kategoriseres som asymptomatisk og symptomatisk. Den tredje gruppen vil være de normale barna født av mødre uten zika påvist med negativ IgG og IgM. Hvert barn vil bli fulgt i tre år fra fødselen og utover.

Utfall som skal analyseres Hovedresultatet vil være mikrocefali og/eller forsinkelse i utvikling ved bruk av Bayley Score 3. utgave ved 12, 18 og 24-36 måneders alder.

De sekundære studieresultatene vil være som følger: graviditetsultralydstatus, placentaskader, okulær, hørsel, hjerte, ernæringsstatus hos barn og nevroutviklingsendringer fra fødsel til tre år, død hos gravide kvinner, abort, fosterdød og død under første tre leveår.

Datainnsamling:

Inkludering av gravide vil skje i løpet av de første 24 månedene av studien. For å identifisere utfallene vil hvert barn bli fulgt fra fødsel til fullføring av tre års kronologisk alder. Den totale studietiden for datainnsamling vil være på 5 år. Studien vil bli gjennomført i perioden januar 2016 - mars 2022.

Data vil bli samlet inn av helsepersonell som er knyttet til helsetjenester og gir bistand til studiepopulasjonen.

Data om svangerskap, fødsel og de tre første leveårene vil bli innhentet fra et intervju med hver kvinne ved hjelp av et spørreskjema etter avtale. I tillegg vil data for registreringer bli samlet inn i skjemaer utarbeidet for dette formålet.

Datainnsamlingsskjemaet (CRF/DCF) vil bli konstruert og validert i alle dens dimensjoner blant tjenestene. POP-er for studieflytdiagrammet og for hvert prosedyre- og omsorgsnivå vil bli utarbeidet.

• Sosioøkonomiske egenskaper (utdanning, familieinntekt per innbygger, boligforhold, sanitærforhold og søppelinnsamling); helsetilstander (komorbiditeter).
• Historie om eksponering for ZIKAV: identifikasjon av slektninger, naboer og arbeidskolleger med Zika

Oppfølging av studiepopulasjonen

Oppfølging av de gravide:

De gravide kvinnene som er inkludert i studien vil bli fulgt i prenatalklinikken, ved Fernandes Figueira National Brazilian Institute for Health of Women and Children.

Etter inkludering av de gravide kvinnene i studien, vil konsultasjoner finne sted månedlig, og undersøkelser vil bli utført i henhold til følgende protokoll:

• Foster ultralyd i hvert trimester
• Serologiske undersøkelser for Zika, dengue, chikungunya, CMV, toksoplasmose og røde hunder hvert trimester
• PCR for Zika-virus hvis symptomatisk gravid kvinne
• Prenatale undersøkelser som anbefalt av Stork Network fra den brasilianske helseministeren
• Prenatale undersøkelser som anbefalt av det brasilianske Stork-nettverket. Fostervannet kan samles opp hvis det indikeres av tilstedeværelsen av medfødte anomalier.

Doppler:

Navlestrengen vil bli insonert for å få et sonogram av navlearterien og dermed vurdere pulsatilitetsindeksen (PI), motstandsindeksen (RI) og peak systolic velocity (PSV).

Viruspåvisning i serum og andre menneskelige sekreter For påvisning av virus hos pasienter ekstraheres RNA fra serum og/eller urin (200 ml) ved bruk av RTP Pathogen (Stratec Biomedical AG, Birkenfeld, Tyskland) i henhold til produsentens instruksjoner. RNA isolert fungerer som en mal i sanntids /RT-PCR-reaksjoner som beskrevet av: Lanciotti et al., 2008 og Faye et al., 2013.

Virusdeteksjon i serum og andre humane sekreter For genomisk sekvensering vil spesifikke regioner av virusgenomet bli amplifisert ved RT-PCR-metoden. Produktene som oppnås på denne måten vil bli renset ved agarosegelelektroforese og deretter ekstrahert fra gelen ved bruk av QIAquick Gel Extraction (Qiagen)-settet. Etter ekstraksjon vil materialet kvantifiseres i agarosegel ved sammenligning mellom båndintensiteter ved bruk av Low DNA Mass Ladder (Life Technologies)-standarden. Mengden som trengs for sekvensering vil bli videresendt til Fiocruz sekvenseringsplattform. Sekvensene vil bli redigert manuelt ved å bruke Bioedit (v. 7.0.5.3), og de fylogenetiske analysene vil bli utført ved å bruke MEGA (v. 5:05) program.

Analyse av morkaken og immunhistokjemi De ferske morkakene sendes videre til Institutt for patologisk anatomi og cytopatologi (DAPC/DPAC) hvor de oppbevares i kjøleskap i opptil 48 timer. De beskrives, veies og fotograferes i henhold til rutinen for analyse av morkake. Fragmenter fra korionplaten, ledningen og membranene vil bli fjernet og frosset i flytende nitrogen. Placentaplaten (fem områder), ledningen (minst to områder) og chorion (ett fragment) vil fikseres i bufret formalin maksimal tid: 30 timer. De vil deretter bli spaltet for histologisk prosessering og innebygd i parafin.

Fenotypisk karakterisering av placentaceller og mors- og navlestrengsblod og barns oral vattpinne ved flowcytometri Placentafragmenter vil bli samlet og opprettholdt i sterilt DMEM (Sigma; St. Louis, MO, [USA]) kulturmedium (4 °C) og spaltet i flere fragmenter (tykkelse: 1-2 mm). Etter spaltning vaskes de i DMEM og utsettes for dissosiasjonssykluser i kollagenase 1A (Sigma; _) (300 U/mg; i 1 % DMEM) enzym. Dissosiasjon vil skje i 6-8 sykluser (mild agitasjon; 37 °C, 10 min hver). Cellesuspensjonen som oppnås på denne måten vil bli sentrifugert (1000 rpm; 4 °C; 10 min) og pelleten vil bli plassert /suspendert i DMEM med føtalt kalveserum (FCS; 10 %; Sigma; _; 4 °C) for å /inaktivere / hemme kollagenase-enzymet /virkning /aktivitet?. Det dissosierte materialet vil [da] bli filtrert /in /through?a membran ([porediameter:] 70 mm). Deretter vil cellene telles i et Neubauer-kammer for bruk i følgende prosedyrer. Mors- og navlestrengsblodet vil bli samlet i /et blod /et passende rør som inneholder EDTA som antikoagulant. Serumet skal brukes til virusdeteksjon, og leukocyttcellene vil merkes etter lysering av røde blodceller.\

Obduksjon av fostre og dødfødsler Histopatologiske og immunhistokjemiske undersøkelser og avbildningsmorfogenesestudier vil bli utført i hjernen og andre organer fra fostre og dødfødsler /som følge av ZIKAV-infeksjon. Foruten den vanlige histologiske behandlingen i parafin, vil de andre organene bli frosset og underkastet ekstraksjon av genetisk materiale og undersøkelse av viralt RNA. Øyeeplet vil også bli analysert for å evaluere mulige øyeforandringer.

Oppfølging av nyfødte:

Nyfødte vil bli fulgt frem til 3 års alder i poliklinikken ved IFF, hvis rutine inkluderer minst 6 besøk første år, 4 besøk/år andre og tredje år. En tverrfaglig poliklinikk vil bli etablert både i enheten for infeksjonssykdommer i pediatrikk og barnepoliklinikken for å følge kohorten av barn med sjanse for vertikal eksponering for ZIKA-viruset. Poliklinikken vil ha medisinsk personell, og fagpersoner innen områdene fysioterapi, fonoaudiologi, psykologi og sosialtjeneste. Legeteamet vil ha ansvar for å følge pasientene, i samarbeid med spesialiteter som nevrologi, pediatrisk kardiologi og oftalmologi, og medisinsk genetikktjeneste. Når det er nødvendig, vil innleggelse av disse pasientene for å etablere [enten] diagnosen eller den første tilnærmingen -{i tilfellet} skje på DIPe-avdelingen.

Den første evalueringen som er anbefalt for pasienter som enten er kjent for å være eksponert for viruset eller med mikrocefali vil bestå av følgende undersøkelser og/eller evalueringer: nevrologisk, okulær, hørsel, EEG om nødvendig, EKG, navlestrengsblod for RT-PCR og IgM. Antropometriske data og fysisk undersøkelse av det nyfødte spedbarnet, med vekt på presis måling av hodeomkrets ved bruk av Intergrowth Curve (2014) som referanse, i henhold til svangerskapsalder og pasientens kjønn. Evaluering av genetikken for å oppdage dysmorfe egenskaper eller medfødte anomalier som kan kompromittere/påvirke andre organer.

Bildeundersøkelser:

1. transfontanelle sonografi (USTF), som førstevalg
2. kranial tomografi (CT) uten kontrast, dersom TF ikke er teknisk mulig
3. Abdominal ultralyd
4. Ekkokardiogram
5. Hjernemagnetisk resonansavbildning, når indikert. g) Nyfødt hørselsscreening (TAN):

1. Fremkalte optoakustiske utslipp (EOAE); 24-48 timer av livet 2. Auditivt fremkalt potensial for hjernestamme (PEATE/ABR): opptil 1 måned av livet hos barn med mikrocefali. Ved feil må testing gjøres på nytt innen 30 dager. I tilfelle retestfeil, send [NB] umiddelbart [til _].

h) Okulær neonatal screening (TON):

1. Inspeksjon og testing av retinal rød refleksjon.
2. Øyefondeksamen (fundoskopi)
3. Dokumentasjon med RetCam

I de påfølgende konsultasjonene vil den kliniske oppfølgingen, PC-måling, utviklingsevaluering (inkludert tidlig stimulering) ved fysioterapi og sykelighets- og dødelighetsevaluering opprettholdes. I det første leveåret vil PEATE utføres hver tredje måned. De påfølgende klinikkbesøkene vil skje månedlig inntil 6 måneders alder, annenhver måned i perioden 6-12 måneder, og hver tredje måned frem til tre år [leveår]. Den oftalmologiske evalueringen (funduskopisk undersøkelse) vil bli holdt hver retur.

Den nevrologiske oppfølgingen vil avhenge av pasientens begynnelsestilstand. Pasienter uten mikrocefali vil bli evaluert ved fødsel, 30 dager og 2, 4, 6, 9, 12, 18, 24 og 36 måneder. Pasienter med mikrocefali vil bli evaluert ved fødsel, 30 dager og hver 2. eller 3. måned, eller oftere om nødvendig.

Evaluering av motorisk utvikling vil bli gjort ved Dubowitz-undersøkelsen (i de første 72 timene), Alberta Infant Motor Scale (AIMS; hver tredje måned til barnet går eller fullfører 18 måneder av livet), og Bayley Test-3rd edition kl. 12, 18 og mellom 12-36 måneder.

Evaluering av språkutvikling vil bli utført ved 12, 24 og 36 måneder, med hensyn til mulige effekter på nevroutvikling, kognitiv utvikling og språkferdigheter.