卵胞の紅潮と直接吸引

これは、IVF 治療を受けている女性における直接吸引 (フラッシングなし) と比較した、卵胞フラッシング卵母細胞の回復率、卵母細胞の成熟度、受精率、および胚の発育と利用の影響に関する前向き観察ペア研究です。

登録された各女性では、1つの卵巣（右または左）が、卵胞洗浄または洗浄なしの直接吸引のいずれかで吸引されるようにランダムに割り当てられます。 主要なエンドポイントは、卵母細胞の回収率 (吸引された卵胞ごとに回収された卵母細胞) です。 二次的な結果は、卵母細胞の成熟度、受精率、および胚の発生と利用です。 妊娠率は代理結果として報告されます。

経膣卵母細胞コレクション

制御された卵巣刺激 (COS) に続いて、hCG またはトリプトレリンを使用して最終的な卵母細胞の成熟が引き起こされます。 卵母細胞の収集は、トリガーの 35 ～ 36 時間後に実行されます。 この手順には、ダブル ルーメン吸引針 (16G、Casmed) を介した卵胞の経膣超音波誘導吸引が含まれます。 この処置には、婦人科医、発生学者、助産師/看護師、麻酔科医を含む学際的なチームが必要です。 卵母細胞の生存率と患者の安全を確保するために、患者は鎮静状態にあり、無菌状態と環境条件の厳格な規制の下で、発生学研究室に隣接する婦人科手術室で行われます。

手順の前に 手順の前日に、発生学者は、鉱物油 (Fertipro) で覆われた卵母細胞培養用に特別に設計された重炭酸緩衝培地 (Fert、Origio) を含む培養皿 (Falcon Central Well 皿) を準備します。 ディッシュを 37oC の 5 ～ 7% CO2 インキュベーターに入れ、一晩平衡化します。 インキュベーターの外でｐＨ調整を行うＨＥＰＥＳ緩衝培地（フラッシング培地、Ｏｒｉｇｉｏ）のアリコートを３７℃に予熱する。 最後に、卵胞洗浄に使用する DPBS (リン酸緩衝生理食塩水) の 160 ml フラスコを、予熱のために劇場のインキュベーターに入れます。 すべての発生学的準備は、層流フードの下で無菌的に行われます。

この手順は、オートクレーブされ、滅菌手術布で包装された手術器具を利用します。 卵母細胞の針、20ml の注射器 (非毒性、BD)、コレクション チューブ (14ml の IVF チューブ、NUNC) など、卵胞液と接触するすべての材料は、MEA テスト (マウス胚盤胞の生存) によって IVF テストされ、滅菌済みであり、シングルユース。 これらは、使用前に 37oC の加温チャンバーに保管されます。

卵胞の継続的な吸引とフラッシュを可能にする 16G ダブル ルーメン針 (Casmed、英国) を使用します。 針の長さは 30 cm で、先端近くにエコー源性マーキングがあり、経膣超音波ガイド下で簡単に認識できます。 チューブの長さは 60cm で、標準的な試験管に接続するための栓と、フラッシュ用のシリンジに接続するためのルアーロック付きの別のチューブが含まれています。 針とその接続部はすべて高品質のサージカル ステンレス鋼で製造されています。 チューブは半透明の PTFE (ポリテトラフルオロエチレン) から製造されています。

すべての製品は、ISO 9001:2008、ISO 13485、および CE マーキングの品質基準に従って製造されています。

処置の準備 患者の準備 手術室に入る前に、麻酔科医は差し迫った麻酔に関する患者の病歴を確認します。

患者は手術室に付き添われ、証人文書に署名する 2 人の人物によって身元が確認されます。 予想される卵母細胞の数が非常に少ない患者 (応答不良、軽度の IVF、または自然周期) では、成熟した卵胞の存在と位置を確認するために、処置の直前に担当医が経膣超音波検査を行います。 卵巣過剰刺激症候群のリスクが高い場合、前述の標準的な臨床診療に従って、血液サンプルも採取されます (Lainas et al., 2012, 2013, 2014)。 患者の準備のために従う手順は、ほとんどの婦人科手術と同じです。 患者は切石位で手術台に横たえられ、彼女の外性器はヒビタン溶液 (ベタジン スクラブを使用するよりも刺激が少ないと考えられます) で洗浄され、生理食塩水ですすがれます。 標準的な手と腕のスクラブを実行した後、外科医の助手は手術用手袋を着用し、加熱段階内で滅菌された手術用ペーパータオルに置かれた、予熱および滅菌されたチューブブロックを含む滅菌ツールパッケージを開きます。 滅菌コレクション チューブは、手順中に使用するため、加熱ブロックに配置されます。 処置中にさらにチューブが必要な場合は、補助看護師が無菌的に加熱ブロックに追加のチューブを配置する必要があります。 次に、患者の体と脚を滅菌済みの手術用タオルで覆います。超音波のプローブは、CIDEX で 5 分間消毒した後、大量の水で洗浄して注射します。 膣拡張器の挿入後、膣を子宮口まで DPBS で洗浄します。 次に、助手は新しい手術用手袋とガウンを着用し、追加の滅菌手術用ペーパードレープで患者を覆います。滅菌済みの卵母細胞針ガイドが開かれ、それとフラッシングシリンジが DPBS で洗浄されます。 1 つの注射器は慎重に針をフラッシュするために使用される DPBS で満たされ、その後破棄されます。 次に、超音波プローブを無菌的に患者のドレープの上に置き、針ガイドをそれに取り付け、最後にプローブを超音波中央ユニットに接続します。 あらかじめ温めておいた 16 G ダブル ルーメン採卵針を開き、吸引ポンプを 250 mmHG に設定します。 針のさまざまなチューブ コネクタは、a) 吸引ポンプ、b) フラッシング シリンジ、c) 最初の採卵管に接続されています。

外科医は、標準的な手と腕のスクラブを行い、手術用ガウンと手術用手袋を着用してから、手術台で手術の位置を占めます。 針とそのチューブは、使用前に温かい DPBS で洗い流して洗浄し、最初のコレクション チューブは廃棄します。 これにより、卵胞に穴をあける前に、針/チューブ全体が DPBS で満たされます。 麻酔科医は患者を鎮静させ、手術中の呼吸と心臓の機能を監視します。

発生学的実験室の準備 発生学的手順全体は、37+/-0.2 のディッシュ温度に耐えるために 40oC に設定された加熱ステージを備えた層流フードの下で実行されます。 oC。 発生学者は、HEPES メディアで中央ウェル培養皿を準備します。 予熱した空の丸い皿、熱研磨したガラス製パスツール ピペット、および卵胞液を廃棄するための空の容器はすべて、加熱された作業台に置かれます。 上記のすべてに、患者の詳細が明確にラベル付けされている必要があります。

手続き中

医師は採卵針をガイドに挿入し、それを超音波の経膣プローブに取り付けます。 次に、卵巣とダグラス嚢の超音波検査を行います。 卵胞を見つけた後、最初の卵巣に隣接するポイントで膣壁に針を刺し、すべての胞状卵胞を吸引します。 より大きい (...mm)。

各卵胞が吸引されると、液体がチューブに集められ、外科医のアシスタントがそれを加熱されたステージからの新しいチューブと交換します。 看護師は、充填されたチューブを取り、容積的にマークされた「参照」チューブに基づいてその容積を推定します。 体積推定は、既知の体積の一連のチューブに基づいています。 チューブは、発生学研究室内の加熱ブロックにすばやく配置されます (接続ウィンドウを介して)。 チューブは加熱ブロックに左から右に配置され、左端のスポットは新しく吸引された卵胞からの液体用に確保され、右端の位置はフラッシュされた卵胞液を含むチューブ用に予約されます。

発生学者はチューブを取り、各チューブの内容物を慎重に皿に注ぎます。 次に、顕微鏡で卵丘 - 卵母細胞複合体 (COC) を探します。 この検索の結果は医師に伝えられ、次の 3 つのカテゴリに分類されます。a) COC が見つかった、b) COC が見つからなかったが卵胞細胞が存在した、c) COC が見つからず卵胞細胞が存在しなかった。 COC が見つかると、医師は次の卵胞に移動し、発生学者はそれをコレクション ディッシュの堀に移してよく洗い、中央のウェルに移します。 COC が見つからない場合、医師はシリンジを介して DPBS を卵胞に洗い流します。 フラッシュされる量は、卵胞の破裂を避けるために、卵胞の初期量の 50% を超えてはなりません。卵胞の出血を引き起こす可能性があります。 次に、洗い流された流体が吸引され、上記の手順が繰り返される。 このプロセスは、COC が見つかるか、4 ～ 5 回のフラッシュが実行されるまで繰り返されます。 フラッシング シリンジの DPBS がなくなったら、使用直前に注意深く無菌的に充填した新しいシリンジと交換します (温度が大幅に下がらないように、使用の 2 分前まで)。

手順が続くにつれて、最大 10 個が収集されるまで、発生学者によって COC が収集皿に配置されます。 追加の COC には新しいディッシュを使用する必要があります。 卵母細胞収集の終了後、卵母細胞は Fert 培地を含む皿に移され、インキュベーターに置かれます。 発生学者は、すべての卵管が検査されたことを確認した後、回収された卵母細胞の最終的な数を医師に知らせます。 手順を終了する前に、医師は卵巣とダグラス嚢を最後にもう一度スキャンし、余分な液体が検出された場合は、可能な限り吸引します. 最後に、医師は針とプローブを取り外し、膣からの出血がないことを確認します。

採卵成功の要因

経膣採卵は複雑な手順であり、それを成功させるために考慮しなければならない多くの変数があります。 手術による副作用は、手術の長さ、医師の技術、使用する針の種類によって影響を受ける可能性があります。 手順の長さは、主に収集された卵母細胞の数と、これらが収集された容易さによって影響を受けます。 卵胞の洗浄を含む処置は、洗浄を行わない処置よりも平均して時間がかかります。 針（ゲージ）の幅は、膣からの出血のレベルと、手術による患者の痛みのレベルに直接影響します。 上記の変数 (フラッシングと針の幅) は、卵母細胞収集の有効性、つまり取得された卵母細胞の数の主要な要因として提案されています。

卵胞フラッシング フラッシングは、卵胞からすぐに取り出されない卵母細胞をフラッシング後に収集できるという事実により、卵母細胞の収量を増加させる可能性がある方法として提案されています。 ダブル ルーメン ニードルは、ニードル内の 2 つのチャネルを使用してフラッシュを可能にします。1 つは卵胞の吸引用で、もう 1 つはフラッシュ用です。 しかし、主に手順が長く続く傾向があるという事実のためだけでなく、紅潮による出血や感染のリスクのために、その日常的な使用に関しては論争があります. フラッシング (ダブル ルーメン針による) とフラッシングなし (シングル ルーメン針による) を比較する多くの研究が長年にわたって実施されてきましたが、相反する結果が生じています。

2010 年に発表されたコクラン レビューでは、フラッシングの使用を評価しましたが、ダブル ルーメン針の使用に有意な利益は見られませんでした。 EUGONIA クリニックで実施された最近の無作為化研究では、16G Casmed ダブル ルーメン針を使用した場合、フラッシングを行わない場合と比較して、フラッシングを行うと回収率が大幅に高くなることがわかりました。 さらに、収集された卵母細胞の約 97% が最初の 3 回のフラッシュで回収され、卵母細胞は、必要なフラッシュの数に関係なく、同様の成熟および受精率を有することがわかりました。採卵した卵子。

フラッシングの安全性に関しては、特に無菌技術に関して、上記のプロトコルを順守することで、フラッシングによる感染のリスクを最小限に抑えることができます。 あまりにも激しいフラッシングによって卵胞が破裂しないように注意する必要があることを強調する必要があります。 卵胞にフラッシュされる DPBS の量は、卵胞の体積の 50% を超えてはならず、過剰な血管新生を伴う卵胞はまったくフラッシュされるべきではありません。 この手順は、手術時間を最小限に抑えながら患者の安全を確保するために、経験豊富なチームによって実行される必要があります。

吸引針 針と回収技術の両方を比較する際の重要なパラメーターは、吸引に使用される針の作業直径です。 これは、卵胞フラッシングを使用して採卵を行う場合に特に当てはまります。 ダブル ルーメン ニードルは、同様のゲージのシングル ルーメン ニードルと比較して、通常、作動直径が小さくなっています。 ダブル ルーメン ニードルは、シングル ルーメン ニードルと同様の流量を達成するために非常に高い圧力を必要とするため、吸引ポンプに負圧を設定する際には、この事実を考慮する必要があります。 異なるメーカーの同様のダブル ルーメン針でさえ、内腔の直径が異なる場合があり、直径のわずかな変化でも流量に大きな影響を与えるため、性能が大幅に変化します。 以下は、一般的に使用されるいくつかの吸引針の直径の比較です。 ダブル ルーメン カテゴリの内径は、内部ルーメンの作動直径を指します。 同様のゲージ針間の直径の大きな違いに注意してください。

シングルルーメン ダブルルーメン 16G 16G 17G 17G 16G 16G 17G 17G アウター インナー アウター インナー アウター インナー アウター インナー ウォレス 1,7 1,24 1,42 1 1,7 1,17 1,5 0,9 1,4 1 1,65 1 1,5 0,8 ビトロライフ 1,6 1,1 1,4 1 1,6 1 1,5 0,9 CASMED n/a n/a n/a n/a 1,65 0, 81 該当なし 該当なし