여포 플러싱 대 직접 흡인

이것은 IVF 치료를 받는 여성의 직접 흡인(플러싱 없음)과 비교하여 난포 홍조 난모세포 회복률, 난모세포 성숙도, 수정률, 배아 발달 및 활용의 효과에 대한 전향적 관찰 쌍 연구입니다.

등록된 각 여성에서 하나의 난소(오른쪽 또는 왼쪽)가 난포 홍조 또는 홍조 없이 직접 흡인으로 흡인되도록 무작위로 지정됩니다. 1차 종점은 난모세포 회수율(흡인된 난포당 회수된 난모세포)입니다. 2차 결과는 난모세포 성숙도, 수정률, 배아 발달 및 활용입니다. 임신율은 대리 결과로 보고됩니다.

경질 난모세포 수집

제어된 난소 자극(COS) 후 hCG 또는 트립토렐린을 사용하여 최종 난모세포 성숙이 시작됩니다. 난모세포 수집은 촉발 후 35-36시간에 수행됩니다. 절차는 이중 루멘 흡인 바늘(16G, Casmed)을 통해 난포의 경질 초음파 유도 흡인을 포함합니다. 절차에는 산부인과 전문의, 배아 전문의, 조산사/간호사, 마취 전문의를 포함한 학제간 팀이 필요합니다. 발생학 실험실에 인접한 산부인과 수술실에서 환자를 진정시키고 무균 상태로 수행하며 환경 조건을 엄격하게 규제하여 난자 생존력과 환자의 안전을 보장합니다.

시술 전 시술 전날 발생학자는 난자 배양용으로 특별히 고안된 중탄산염 완충 배지(Fert, Origio)가 포함된 배양 접시(Falcon Central Well dish)를 미네랄 오일(Fertipro)로 덮은 배양 접시(Falcon Central Well dish)를 준비합니다. 접시를 37oC에서 5-7% CO2 인큐베이터에 넣어 하룻밤 동안 평형화합니다. 인큐베이터 외부에서 pH 조절을 달성하는 HEPES 완충 배지(Flushing medium, Origio)의 분취량은 37oC로 예열됩니다. 마지막으로, 난포 세척에 사용하기 위한 DPBS(인산염 완충 식염수) 160ml 플라스크를 예열을 위해 극장의 인큐베이터에 넣습니다. 모든 발생학적 준비는 층류 후드에서 무균적으로 수행됩니다.

이 절차는 멸균 수술용 천으로 멸균되고 포장된 수술 장비를 사용합니다. 난자 바늘, 20ml 주사기(무독성, BD) 및 수집 튜브(14ml IVF 튜브, NUNC)와 같이 난포액과 접촉하는 모든 물질은 MEA 테스트(마우스 배반포 생존)를 통해 IVF 테스트를 거쳐 사전 멸균 및 일회용. 이들은 사용하기 전에 37oC 가온 챔버에 보관됩니다.

우리는 모낭의 지속적인 흡인 및 세척을 허용하는 16G 이중 루멘 바늘(Casmed, UK)을 사용합니다. 바늘의 길이는 30cm이고 팁 근처에 에코 발생 표시가 있어 경질 초음파 유도 하에서 쉽게 인식할 수 있습니다. 튜브의 길이는 60cm이며 표준 테스트 튜브에 연결하기 위한 마개와 세척을 위해 주사기에 연결하기 위한 Luer-lock이 있는 별도의 튜브를 포함합니다. 바늘과 그 연결부는 모두 고급 외과용 스테인리스 스틸로 제조됩니다. 튜빙은 반투명 PTFE(Polytetrafluoroethylene)로 제조됩니다.

모든 제품은 품질 표준 ISO 9001:2008, ISO 13485 및 CE 마킹에 따라 제조됩니다.

절차 준비 환자 준비 수술실에 들어가기 전에 마취 전문의는 임박한 마취와 관련된 환자의 병력을 확인합니다.

환자는 수술실로 안내되고 증인 문서에 서명하는 두 사람이 그녀의 신원을 확인합니다. 예상되는 난모세포가 거의 없는 환자(반응 불량자, 약한 IVF 또는 자연 주기)의 경우 치료 의사가 절차 직전에 질식 초음파를 수행하여 성숙한 난포의 존재와 위치를 확인합니다. 난소 과다자극 증후군의 위험이 높은 경우, 이전에 설명한 표준 임상 실습에 따라 혈액 샘플도 채취합니다(Lainas et al., 2012, 2013, 2014). 환자의 준비를 위해 따라야 할 절차는 대부분의 부인과 수술과 동일합니다. 환자를 쇄석술 자세로 수술대에 눕히고 외부 생식기를 히비탄 용액(베타딘 스크럽을 사용하는 것보다 순한 것으로 간주됨)으로 세척한 다음 식염수로 헹굽니다. 표준 손과 팔 스크럽을 수행한 후 외과의의 조수는 수술용 장갑을 착용하고 가열 단계 내에서 멸균된 수술용 종이 타월에 놓인 사전 예열되고 멸균된 튜브 블록을 포함하여 멸균된 도구 패키지를 엽니다. 시술 중에 사용할 수 있도록 멸균된 수집 튜브를 가열 블록에 넣습니다. 절차 중에 더 많은 튜브가 필요한 경우 보조 간호사는 가열 블록에 더 많은 튜브를 무균 상태로 배치해야 합니다. 멸균된 수술용 타월로 환자의 몸과 다리를 덮습니다. 초음파 프로브는 CIDEX로 5분 동안 소독한 후 다량의 주사용 물로 세척합니다. 질 확장기 삽입 후 자궁경부까지 DPBS로 질을 세척합니다. 그런 다음 조수는 새 수술용 장갑과 가운을 착용하고 추가 멸균 수술용 종이 드레이프로 환자를 덮습니다. 사전 멸균된 난모세포 바늘 가이드를 열고 플러싱 주사기와 플러싱 주사기를 DPBS로 세척합니다. 하나의 주사기는 DPBS로 조심스럽게 채워져 바늘을 플러시하는 데 사용된 다음 폐기됩니다. 그런 다음 초음파 탐침을 무균 상태로 환자의 드레이프에 놓고 바늘 가이드를 여기에 부착한 다음 마지막으로 탐침을 초음파 중앙 장치에 연결합니다. 미리 데운 16G 이중 루멘 난모세포 수집 바늘을 열고 흡인 펌프를 250mmHG로 설정합니다. 바늘의 다양한 튜브 커넥터는 a) 흡인 펌프, b) 플러싱 주사기, c) 첫 번째 난자 수집 튜브에 연결됩니다.

외과의는 수술대에서 수술 자세를 취하기 전에 표준 손과 팔 스크럽을 수행하고 수술 가운과 수술 장갑을 착용합니다. 바늘과 튜브는 사용하기 전에 따뜻한 DPBS로 세척하여 세척하고 첫 번째 수집 튜브는 폐기합니다. 이렇게 하면 모낭을 뚫기 전에 바늘/튜브 전체가 DPBS로 채워집니다. 마취과 의사는 환자를 진정시키고 절차 전반에 걸쳐 환자의 호흡과 심장 기능을 모니터링합니다.

배아 실험실 준비 전체 배아 절차는 37+/-0.2의 접시 온도를 견디기 위해 40oC로 설정된 가열 단계가 있는 층류 후드 아래에서 수행됩니다. oC. 발생학자는 HEPES 배지로 중앙 웰 배양 요리를 준비합니다. 예열된 빈 원형 ​​접시, 열 광택 유리 파스퇴르 피펫 및 폐기된 난포액을 위한 빈 용기가 모두 가열된 작업대에 놓입니다. 위의 모든 항목에는 환자 세부 정보가 명확하게 표시되어야 합니다.

절차 중

의사는 난자 수집 바늘을 가이드에 넣은 다음 초음파의 경질 탐침에 부착합니다. 그런 다음 난소와 더글라스 주머니의 초음파 평가를 수행합니다. 난포를 찾은 후 첫 번째 난소에 인접한 지점에서 바늘로 질벽을 뚫고 모든 전정부 난포를 흡인합니다. (...mm)보다 큽니다.

각 난포가 흡인될 때 유체가 튜브에 수집되고 외과의의 조수는 가열된 단계에서 새 튜브로 교체합니다. 간호사는 채워진 튜브를 가지고 용적 측정으로 표시된 "참조" 튜브를 기준으로 그 용적을 추정합니다. 체적 추정은 알려진 체적의 일련의 튜브를 기반으로 합니다. 그런 다음 튜브를 배아 실험실 내의 가열 블록에 신속하게 배치합니다(연결 창을 통해). 튜브는 가열 블록의 왼쪽에서 오른쪽으로 배치되며, 가장 왼쪽 지점은 새로 흡인된 난포의 유체를 위해 예약되고 가장 오른쪽 위치는 플러시된 난포액을 포함하는 튜브를 위해 예약됩니다.

발생학자는 튜브를 가져다가 각 튜브의 내용물을 조심스럽게 접시에 붓습니다. 그런 다음 현미경을 통해 Cumulus-Oocyte Complex(COC)를 검색합니다. 이 검색 결과는 의사에게 전달되며 a) COC가 발견됨, b) COC가 발견되지 않았지만 난포 세포가 있음, c) COC가 발견되지 않고 난포 세포가 없음의 세 가지 범주로 나뉩니다. COC가 발견되면 의사는 다음 난포로 이동하고 발생학자는 이를 수집 접시의 해자로 옮기고 철저히 씻은 후 중앙 우물로 이동합니다. COC가 발견되지 않으면 의사는 주사기를 통해 DPBS를 모낭에 주입합니다. 플러시된 부피는 난포의 출혈을 유발할 수 있는 파열을 방지하기 위해 난포의 초기 부피의 50%를 초과하지 않아야 합니다. 플러시된 유체는 흡인되고 절차는 위에서 설명한 대로 반복됩니다. 이 과정은 COC가 발견되거나 4-5번의 플러시가 수행될 때까지 반복됩니다. 플러싱 주사기의 DPBS가 떨어지면 사용 직전에 조심스럽게 무균 상태로 채운 새 주사기로 교체합니다(온도가 크게 떨어지지 않도록 사용하기 2분 전까지).

절차가 계속됨에 따라 COC는 최대 10개가 수집될 때까지 발생학자에 의해 수집 접시에 배치됩니다. 추가 COC에는 새 접시를 사용해야 합니다. 난모세포 수집이 끝나면 난모세포를 Fert 배지가 담긴 접시에 옮기고 인큐베이터에 넣습니다. 배아학자는 모든 튜브가 검색되었음을 확인한 후 의사에게 검색된 난모세포의 최종 수를 알립니다. 시술을 마치기 전에 의사는 난소와 더글라스 주머니를 마지막으로 스캔하고 과도한 체액이 감지되면 가능한 한 많이 흡인합니다. 마지막으로 의사는 바늘과 프로브를 제거하고 질 출혈이 없는지 확인합니다.

성공적인 난자 채취에 기여하는 요인

경질 난자 채취는 성공하기 위해 고려해야 할 많은 변수가 있는 복잡한 절차입니다. 수술로 인한 부작용은 시술 기간, 의사의 기술 및 사용된 바늘의 종류에 따라 영향을 받을 수 있습니다. 절차의 길이는 주로 수집된 난모세포의 수와 수집 용이성에 의해 영향을 받습니다. 모낭 세척을 포함하는 절차는 평균적으로 세척하지 않는 절차보다 더 깁니다. 바늘(게이지)의 폭은 질출혈의 정도와 수술로 인해 환자가 겪는 통증의 정도에 직접적인 영향을 미칩니다. 위의 변수(flushing, 바늘의 폭)는 난자채취의 효율성, 즉 회수된 난자수에 대한 주요인자로 제시되어 왔다.

난포 플러싱 플러싱은 난포에서 즉시 회수되지 않은 난자를 플러싱 후 채취할 수 있기 때문에 난자 수율을 높일 수 있는 방법으로 제안되었습니다. 이중 루멘 바늘은 바늘 내 두 개의 채널(모낭 흡입용 채널과 세척용 채널)을 사용하여 세척할 수 있습니다. 그러나 절차가 더 오래 지속되는 경향이 있다는 사실과 출혈 및 홍조로 인한 감염의 위험 때문에 일상적인 사용에 대해 논란이 있습니다. 수년 동안 홍조(이중 루멘 바늘 사용)와 홍조 없음(단일 루멘 바늘 사용)을 비교하는 많은 연구가 수행되었으며 상충되는 결과가 나타났습니다.

홍조 사용을 평가한 2010년에 발표된 코크란 검토에서는 이중 루멘 바늘 사용에서 유의미한 이점이 없음을 발견했습니다. EUGONIA 클리닉에서 수행된 최근 무작위 연구에서 홍조는 16G Casmed 이중 루멘 바늘을 사용하여 홍조가 없는 경우에 비해 상당히 높은 회수율과 관련이 있는 것으로 나타났습니다. 또한 수집된 난모세포의 약 97%가 처음 3번의 홍조에서 회수되었으며 난모세포는 필요한 홍조 횟수와 관계없이 유사한 성숙 및 수정률을 나타내는 것으로 밝혀져 적은 수의 홍조가 발달 능력이 있는 최종 난자 수를 증가시킬 수 있음을 시사합니다. 난자 회수.

홍조의 안전성과 관련하여 특히 무균 기술과 관련하여 위에 제시된 프로토콜을 준수하면 홍조로 인한 감염 위험을 최소화할 수 있습니다. 너무 격렬한 홍조로 인해 모낭이 파열되지 않도록 주의해야 한다는 점을 강조해야 합니다. 난포로 플러시되는 DPBS의 양은 난포 부피의 50%를 초과해서는 안 되며 과도한 혈관신생이 있는 난포는 전혀 플러시되어서는 안 됩니다. 경험이 풍부한 의료진이 시술을 진행해야 환자의 안전을 보장하면서도 수술 시간을 최소화할 수 있습니다.

흡인 바늘 바늘과 회수 기술을 비교할 때 중요한 매개변수는 흡인에 사용되는 바늘의 작동 직경입니다. 난포 홍조를 사용하여 난자 회수를 수행할 때 특히 그렇습니다. 이중 루멘 바늘은 일반적으로 비슷한 게이지의 단일 루멘 바늘에 비해 작동 직경이 더 작습니다. 이중 루멘 바늘은 단일 루멘 바늘과 유사한 유속을 달성하기 위해 훨씬 더 높은 압력이 필요하므로 흡입 펌프에 음압을 설정할 때 이 사실을 고려해야 합니다. 서로 다른 제조업체의 유사한 이중 루멘 바늘도 내부 루멘 직경이 다를 수 있어 직경의 작은 변화도 유량에 큰 영향을 미치기 때문에 성능이 크게 변경될 수 있습니다. 아래는 일반적으로 사용되는 흡인 바늘의 직경을 비교한 것입니다. 이중 루멘 범주의 내경은 내부 루멘의 작동 직경을 나타냅니다. 유사한 게이지 바늘 사이의 직경의 상당한 차이에 유의하십시오.

단일 루멘 이중 루멘 16G 16G 17G 17G 16G 16G 17G 17G 외부 내부 외부 내부 외부 내부 내부 외부 내부 내부 WALLACE 1,7 1,24 1,42 1 1,7 1,17 1,5 0,9 GYNETICS 1,6 1,3 1,4 1 1,65 1 1,5 0,8 VITROLIFE 1,6 1,1 1,4 1 1,6 1 1,5 0,9 CASMED 해당 없음 해당 없음 해당 없음 해당 없음 1,65 0, 81 해당 없음 해당 없음