人間の腸の再野生化: Limosilactobacillus Reuteri 種の再導入
大腸には、食物の消化や病気との闘いなどの重要な機能を果たす、腸内微生物叢として知られる何兆もの微生物が住んでいます。 私たちの腸内微生物叢に存在する微生物の多様性は、食事パターン、薬の使用、衛生習慣などのライフスタイル要因の影響を受けます。 研究によると、社会が工業化されるにつれて、人間の腸内微生物叢の多様性が減少することが示されています。 たとえば、パプアニューギニアの農村部からの糞便サンプルには、米国に住む人々には見られない Limosilactobacillus reuteri などの追加の 50 の微生物種が含まれています。
先進国で L. reuteri が消失した原因は現在不明です。 しかし、食事は腸内細菌叢の組成に影響を与える主要な要因です。 微生物叢アクセス可能な炭水化物 (MAC) は、腸内微生物の主要なエネルギー源である難消化性炭水化物です。 北アメリカ人は、田舎のパプア ニューギニア人よりも、これらの炭水化物 (豆、ヤムイモ、アーティ チョークなどの食品に含まれる) の消費量がはるかに少ない.
この管理された給餌研究の全体的な目的は、パプア ニューギニアの農村から分離された L. reuteri の株が、その成長を促進するように設計された非工業化型の食事と一緒にプロバイオティクスとして摂取された場合に、カナダ人の腸内で確立できるかどうかを判断することです。 . さらに、この調査では以下が決定されます。
(i) L. reuteri と非工業化型食餌の両方の生理学的および免疫学的効果、および (ii) L. reuteri と非工業化型食餌の両方が腸内微生物叢の生態に及ぼす影響。
調査の概要
詳細な説明
現在、工業化によって腸内微生物叢の細菌の多様性が大幅に減少したという一貫した証拠があります (Segata, 2015)。おそらく、抗生物質の使用、現代の臨床慣行、衛生、食習慣の変化などの要因の組み合わせによるものと思われます。 しかし、実験的証拠が存在する唯一の要因は、腸にコロニーを形成する微生物が利用できるようになる難消化性の食事性炭水化物である、西洋の食事に含まれる微生物叢アクセス可能な炭水化物 (MAC) の含有量が低いことです (Sonnerburg et al., 2015)。
以前の研究では、パプア ニューギニアの農村部族の個体の糞便微生物叢の多様性が高いことを示すことで、「マイクロバイオームの枯渇」の全体的な前提が確認されました。これには、北米人では完全に検出できない 50 種が追加で含まれています (Martínez et al., 2015)。 . 16S rRNAシーケンシングによってすべてのパプアニューギニア人で検出可能であるが、単一の米国対照では検出できなかった1つの種は、Limosilactobacillus reuteri (L. ロイテリ)。 興味深いことに、プロバイオティクスとしても使用されるこの種は、1960 年頃に行われた研究で定期的にヒトで検出されましたが、現代のヒトではほとんど検出されず、西洋人の L. reuteri 集団の最近の減少を示唆しています (Walter et al. 、2011)。 最も重要なことは、L. reuteri は多くの脊椎動物種の腸内微生物叢のメンバーであり、多くの引用された出版物で示されているように、宿主の免疫機能と発達に利益をもたらすことです (Zelante et al. 2013; Buffington et al. 2016; Lamas et al. 2016; He et al. 2017)。
L. reuteri の個体数が減少した原因は現在不明です。 しかし、主に植物ベースの食事を消費する人口であるパプアニューギニアの農村部の食事には豊富に含まれている一方で、西洋の食事には非常に少量しか存在しない非消化性炭水化物の重要性が原因である可能性があります.
この研究の目的は、腸内細菌の増殖を促進するように設計された非工業化タイプの食事を与えられたカナダ人の腸に、非西洋化マイクロバイオームで優勢な細菌種が「再導入」できることを実証することです. この研究では、この「再導入」と非工業化型の食事が、宿主の免疫機能と宿主 - 食事 - マイクロバイオームの代謝相互作用にどのように影響するかを決定し、それらの間の関連性を探ります. 腸内微生物叢の生態に対する微生物処理と食事の影響をさらに調査します。 中心的な仮説は、パプア ニューギニアの農村に由来する L. reuteri の分離株が、この微生物の増殖を促進することが知られている炭水化物を含む食事を与えられたカナダ人の腸内で確立される可能性があるというものです。 また、この「再導入」と非工業化タイプの食事の摂取は、宿主への免疫学的および代謝的利益に関連するという仮説も立てられています. これらの目標を達成するために、以下の目標が提案されています。
- パプア ニューギニア (PNG) の農村部から分離された Limosilactobacillus reuteri 株が、健康なカナダ人の腸内で確立できるかどうかを判断するための人体試験を実施すること。
- L. reuteri の成長基質を提供するように特別に設計された飼料を与えることで、コロニー形成を改善できるかどうかを判断すること。
- L. reuteri と非工業化型の食事の両方が、ヒトのマイクロバイオーム、メタボローム、心血管代謝の代理エンドポイント、および炎症の免疫バイオマーカーをどのように変化させるかを判断すること。
この研究は、細菌の「失われた種」が人間の腸に再導入できるかどうかを立証し、慢性疾患のリスクを軽減するためにそのような食事の調整がどのように適用されるかを知らせるメカニズムの洞察を提供する可能性があります. パプア ニューギニアの農村部から分離された L. reuteri 株は、MAC の基質上での増殖速度が異なることから明らかなように、西洋株とは機能的に異なるため、この研究では、工業化された腸に全体的に存在しないために以前は特徴付けられていなかった潜在的なプロバイオティクス株をさらに特定します。マイクロバイオーム。
研究の種類
入学 (実際)
段階
- 適用できない
連絡先と場所
研究場所
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Alberta
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Edmonton、Alberta、カナダ、T6G 2E1
- University of Alberta
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
健康ボランティアの受け入れ
説明
包含基準:
- 体格指数が 20 ~ 29.9 kg/m² の健康な人
- 少なくとも 1 日 1 回の排便がある
- 準備された研究用食品(朝食、昼食、夕食、軽食)を3週間摂取する意思がある
- 男性および閉経前、妊娠していない、または授乳していない女性
- -非菜食主義者、非喫煙者、およびアルコール摂取量が週に8杯以下であり、研究の過程で週に8杯以下の飲み物を喜んで消費する。
プロバイオティクスを含む食品を摂取している場合は、同じものを食べるのをやめて、プロバイオティクスを含まない食品に置き換えることをいとわない
-中程度から激しい運動を週5時間以内。
- 10^4 CFU/g 未満の糞便サンプルのスクリーニングにおける L. reuteri の量
除外基準:
- -糖尿病、急性または慢性消化管疾患、状態の病歴、または消化管外科的介入の病歴
- 過去3か月の抗生物質治療
- -栄養補助食品の使用(プレバイオティクスとプロバイオティクス、繊維サプリメント/バー、消化酵素/ビーノを含む)-消費された場合、介入前の4週間のウォッシュアウト期間を喜んで受け、研究期間中サプリメントを摂取しないままにします。 例外: マルチビタミンまたはビタミン d サプリメント (1 週間のウォッシュアウト期間)
- 降圧薬、脂質低下薬、抗糖尿病薬、抗炎症薬(コルチコステロイドまたは慢性的なNSAIDの使用)、または下剤の使用
- 既知の食物アレルギーまたは不耐症(乳製品アレルギーまたは乳糖不耐症を含む)
研究計画
研究はどのように設計されていますか?
デザインの詳細
- 主な目的:他の
- 割り当て:ランダム化
- 介入モデル:クロスオーバー割り当て
- マスキング:ダブル
武器と介入
参加者グループ / アーム |
介入・治療 |
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実験的:L. reuteri PB-W1 非工業化型ダイエット開始
参加者は、非工業化タイプの食事を 3 週間受け取り、その後、3 週間のウォッシュアウト期間の後、通常の食事を 3 週間摂取するクロスオーバーが続きます。
参加者には、各食事期間の 4 日目に L. reuteri PB-W1 株の 1 回投与が提供されます。
L. reuteri PB-W1 株は飲用可能な溶液として提供されます (約 2.25x10^10 個の生細胞が 50 ml の水で提供されます)。
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L. Reuteri PB-W1 株は、食品グレードの条件で Limosilactobacillus reuteri を調製するための標準化された操作手順に従って調製されます。
他の名前:
工業化されていないタイプの食事はメタボリック キッチンで準備され、すべての食事とスナックが参加者に 3 週間提供されます。
他の名前:
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実験的:L. reuteri DSM20016T、非工業化型ダイエット開始
参加者は、非工業化タイプの食事を 3 週間受け取り、その後、3 週間のウォッシュアウト期間の後、通常の食事を 3 週間摂取するクロスオーバーが続きます。
参加者には、各食事期間の 4 日目に L. reuteri DSM20016T 株の 1 回投与が提供されます。
L. reuteri DSM20016T 株は飲用可能な溶液として提供されます (約 2.25x10^10 個の生存細胞が 50 ml の水で提供されます)。
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工業化されていないタイプの食事はメタボリック キッチンで準備され、すべての食事とスナックが参加者に 3 週間提供されます。
他の名前:
L. Reuteri DSM20016T 株は、食品グレードの条件で Limosilactobacillus reuteri を調製するための標準化された操作手順に従って調製されます。
他の名前:
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プラセボコンパレーター:プラセボ、非工業化型ダイエット開始
参加者は、非工業化タイプの食事を 3 週間受け取り、その後、3 週間のウォッシュアウト期間の後、通常の食事を 3 週間摂取するクロスオーバーが続きます。
参加者には、各食事期間の 4 日目にプラセボ溶液が 1 回投与されます。
プラセボ溶液は、飲用可能な溶液として提供されます (食品グレードの条件で 50 ml の水に溶解した 2 g のマルトデキストリン)。
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工業化されていないタイプの食事はメタボリック キッチンで準備され、すべての食事とスナックが参加者に 3 週間提供されます。
他の名前:
2 g のマルトデキストリンは、食品グレードの条件で 50 ml の水に溶解します。
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実験的:L. reuteri PB-W1 いつものダイエットスタート
参加者は通常の食事を 3 週間摂取し、その後、3 週間のウォッシュアウト期間の後、提供された非工業化型の食事を 3 週間摂取するクロスオーバーが続きます。
参加者には、各食事期間の 4 日目に L. reuteri PB-W1 株の 1 回投与が提供されます。
L. reuteri PB-W1 株は飲用可能な溶液として提供されます (約 2.25x10^10 個の生細胞が 50 ml の水で提供されます)。
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L. Reuteri PB-W1 株は、食品グレードの条件で Limosilactobacillus reuteri を調製するための標準化された操作手順に従って調製されます。
他の名前:
工業化されていないタイプの食事はメタボリック キッチンで準備され、すべての食事とスナックが参加者に 3 週間提供されます。
他の名前:
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実験的:L. reuteri DSM20016T、通常の食事開始
参加者は通常の食事を 3 週間摂取し、その後、3 週間のウォッシュアウト期間の後、提供された非工業化型の食事を 3 週間摂取するクロスオーバーが続きます。
参加者には、各食事期間の 4 日目に L. reuteri DSM20016T 株の 1 回投与が提供されます。
L. reuteri DSM20016T 株は飲用可能な溶液として提供されます (約 2.25x10^10 個の生存細胞が 50 ml の水で提供されます)。
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工業化されていないタイプの食事はメタボリック キッチンで準備され、すべての食事とスナックが参加者に 3 週間提供されます。
他の名前:
L. Reuteri DSM20016T 株は、食品グレードの条件で Limosilactobacillus reuteri を調製するための標準化された操作手順に従って調製されます。
他の名前:
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プラセボコンパレーター:プラセボ、通常の食事開始
参加者は通常の食事を 3 週間摂取し、その後、3 週間のウォッシュアウト期間の後、提供された非工業化型の食事を 3 週間摂取するクロスオーバーが続きます。
参加者には、各食事期間の 4 日目にプラセボ溶液が 1 回投与されます。
プラセボ溶液は、飲用可能な溶液として提供されます (食品グレードの条件で 50 ml の水に溶解した 2 g のマルトデキストリン)。
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工業化されていないタイプの食事はメタボリック キッチンで準備され、すべての食事とスナックが参加者に 3 週間提供されます。
他の名前:
2 g のマルトデキストリンは、食品グレードの条件で 50 ml の水に溶解します。
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この研究は何を測定していますか?
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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カナダ人の腸における L. reuteri (PB-W1 および DSM20016T 株) の確立
時間枠:21日
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この研究の主な結果は、カナダ人の腸内での L. reuteri (PB-W1 および DSM20016T 株) の定着を測定することです。
これは、糞便サンプルからの選択的細菌培養によって測定され、種特異的プライマーを使用した定量的 PCR によって定量化されます。
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21日
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L. reuteri (PB-W1 & DSM20016T 株) のコロニー形成の持続性を高めるために、L. reuteri の成長基質を提供するように設計された非工業化型の食事を摂取した
時間枠:21日
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L. reuteri の成長基質 (MAC) を提供するように特別に設計された非工業化型の食事の摂取によって、カナダ人の腸内での L. reuteri の持続性が高まるかどうかを測定します。
これは、糞便サンプルからの選択的細菌培養によって測定され、種特異的プライマーを使用した定量的 PCR によって定量化されます。
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21日
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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L. reuteri 株と非工業化タイプの食事が心臓代謝の代理エンドポイントに及ぼす影響: 空腹時血糖および脂質パネル。
時間枠:21日
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血液サンプルからの血漿は、グルコース、トリグリセリド、低密度リポタンパク質 (LDL) コレステロール、高密度リポタンパク質 (HDL) コレステロール、非 HDL コレステロール、および総コレステロール (mmol/L) の変化について分析されます。
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21日
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L. reuteri 株と非工業化タイプの食事が心臓代謝の代理エンドポイントに及ぼす影響: 空腹時インスリンレベル。
時間枠:21日
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血液サンプルからの血漿は、インスリンの変化 (μIU/L) について分析されます。
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21日
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L. reuteri 株と非工業化型食事が心臓代謝代理エンドポイントに及ぼす影響: インスリン抵抗性の恒常性モデル評価と定量的インスリン感受性チェック インデックス。
時間枠:21日
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インスリン抵抗性の恒常性モデル評価および定量的インスリン感受性チェック指標は、空腹時グルコースおよびインスリンレベルに基づいて計算されます。
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21日
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L. reuteri 株と非工業化タイプの食事が心臓代謝の代理エンドポイントに及ぼす影響: 空腹時 C 反応性タンパク質レベル。
時間枠:21日
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血液サンプルからの血漿は、C反応性タンパク質(mg / L)の変化について分析されます。
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21日
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L. reuteri 株と非工業化タイプの食事が心臓代謝の代理エンドポイントに及ぼす影響: 体重。
時間枠:21日
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体重はキログラムで測定されます。
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21日
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L. reuteri 株と非工業化型の食事が炎症性腸疾患の代理エンドポイントに及ぼす影響: 糞便中のカルプロテクチン レベル。
時間枠:21日
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カルプロテクチン(ng/mg)の変化について糞便サンプルを分析する。
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21日
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L. reuteri 株と非工業化型の食事が腸のバリア機能のバイオマーカーに及ぼす影響: リポ多糖結合タンパク質。
時間枠:21日
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血液サンプルからの血漿は、リポ多糖結合タンパク質 (μg/mL) の変化について分析されます。
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21日
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L. reuteri 株と非工業化型の食事が腸のバリア機能のバイオマーカーに及ぼす影響: 糞便ゾヌリンレベル。
時間枠:21日
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ゾヌリン(ng/mg)の変化について糞便サンプルを分析する。
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21日
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L reuteri 株と非工業化型食餌が糞便マイクロバイオームの組成に及ぼす影響。
時間枠:4-21日
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o 16S rRNA シーケンスを使用して糞便サンプルを分析し、門、綱、目、科、属、およびアンプリコン シーケンス バリアント レベルで糞便マイクロバイオームの変化を測定します。
糞便マイクロバイオームの組成は、門、クラス、目、家族、属、種、および種レベルのゲノムビンレベルでの変化を測定するために、メタゲノムシーケンス全体を使用して分析されます。
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4-21日
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糞便マイクロバイオームの機能に対する L reuteri 株と非工業化型食事の影響: 酵素レベル。
時間枠:8日
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腸内細菌叢によってコードされる酵素の変化を測定するために、全メタゲノム配列決定を使用して糞便サンプルを分析します。
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8日
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糞便マイクロバイオームの機能に対する L reuteri 株と非工業化型食事の影響: 短鎖脂肪酸レベル。
時間枠:8日と21日
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短鎖脂肪酸 (酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸) と分岐鎖脂肪酸 (イソ吉草酸、イソ酪酸) は、ガスクロマトグラフィー質量分析法 (μmol/g) を使用して糞便サンプルで測定されます。
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8日と21日
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L reuteri 株と非工業化型食餌が糞便マイクロバイオームの機能に及ぼす影響: pH。
時間枠:8日と21日
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糞便のpHは、pHメーターを使用して測定されます。
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8日と21日
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L. reuteri 株と非工業化型の食事がメタボロームに及ぼす影響。
時間枠:8日と21日
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血漿メタボロームを評価して、介入の提供後にトリプトファンのインドール誘導体や胆汁酸などの既知の免疫学的機能を持つ分子の変化を決定します。
これは、高速化学同位体標識液体クロマトグラフィー質量分析プラットフォームを介して測定されます。
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8日と21日
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L. reuteri 株と非工業化型の食事が宿主の免疫応答に及ぼす影響。
時間枠:8日と21日
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フローサイトメトリーを使用して、IgA、選択されたサイトカイン、および白血球表現型を定量化することにより、血液サンプルの宿主免疫応答を測定します。
フィコール勾配で全血から単核細胞を単離し、チャレンジ(ペプチドグリカン、フィトヘマグルチニン、およびリポ多糖)に応答する細胞の能力をエクスビボで決定する。
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8日と21日
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L. reuteri 株と非工業化型食餌が心理的気分状態の変化に及ぼす影響。
時間枠:21日
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個々の気分状態の変化は、気分状態アンケートのプロファイルによって測定されます (スコアは -32 から 200 の間で、スコアが低いほど気分プロファイルが安定していることを示します)。
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21日
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L. reuteri 株と非工業化型食餌が胃腸症状の変化に及ぼす影響。
時間枠:21日
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個々の胃腸症状の変化は、胃腸症状アンケートによって測定されます (0 ~ 5 のスケールで採点され、スコアが高いほど症状が多いことを示します)。
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21日
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協力者と研究者
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捜査官
- 主任研究者:Jens Walter, PhD、University College Cork
- 主任研究者:Andrea Haqq, MD、University of Alberta
出版物と役立つリンク
一般刊行物
- Buffington SA, Di Prisco GV, Auchtung TA, Ajami NJ, Petrosino JF, Costa-Mattioli M. Microbial Reconstitution Reverses Maternal Diet-Induced Social and Synaptic Deficits in Offspring. Cell. 2016 Jun 16;165(7):1762-1775. doi: 10.1016/j.cell.2016.06.001.
- Segata N. Gut Microbiome: Westernization and the Disappearance of Intestinal Diversity. Curr Biol. 2015 Jul 20;25(14):R611-3. doi: 10.1016/j.cub.2015.05.040.
- Sonnenburg ED, Sonnenburg JL. Starving our microbial self: the deleterious consequences of a diet deficient in microbiota-accessible carbohydrates. Cell Metab. 2014 Nov 4;20(5):779-786. doi: 10.1016/j.cmet.2014.07.003. Epub 2014 Aug 21.
- Martinez I, Stegen JC, Maldonado-Gomez MX, Eren AM, Siba PM, Greenhill AR, Walter J. The gut microbiota of rural papua new guineans: composition, diversity patterns, and ecological processes. Cell Rep. 2015 Apr 28;11(4):527-38. doi: 10.1016/j.celrep.2015.03.049. Epub 2015 Apr 16.
- Walter J, Britton RA, Roos S. Host-microbial symbiosis in the vertebrate gastrointestinal tract and the Lactobacillus reuteri paradigm. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011 Mar 15;108 Suppl 1(Suppl 1):4645-52. doi: 10.1073/pnas.1000099107. Epub 2010 Jun 25.
- Zelante T, Iannitti RG, Cunha C, De Luca A, Giovannini G, Pieraccini G, Zecchi R, D'Angelo C, Massi-Benedetti C, Fallarino F, Carvalho A, Puccetti P, Romani L. Tryptophan catabolites from microbiota engage aryl hydrocarbon receptor and balance mucosal reactivity via interleukin-22. Immunity. 2013 Aug 22;39(2):372-85. doi: 10.1016/j.immuni.2013.08.003.
- Lamas B, Richard ML, Leducq V, Pham HP, Michel ML, Da Costa G, Bridonneau C, Jegou S, Hoffmann TW, Natividad JM, Brot L, Taleb S, Couturier-Maillard A, Nion-Larmurier I, Merabtene F, Seksik P, Bourrier A, Cosnes J, Ryffel B, Beaugerie L, Launay JM, Langella P, Xavier RJ, Sokol H. CARD9 impacts colitis by altering gut microbiota metabolism of tryptophan into aryl hydrocarbon receptor ligands. Nat Med. 2016 Jun;22(6):598-605. doi: 10.1038/nm.4102. Epub 2016 May 9.
- He B, Hoang TK, Wang T, Ferris M, Taylor CM, Tian X, Luo M, Tran DQ, Zhou J, Tatevian N, Luo F, Molina JG, Blackburn MR, Gomez TH, Roos S, Rhoads JM, Liu Y. Resetting microbiota by Lactobacillus reuteri inhibits T reg deficiency-induced autoimmunity via adenosine A2A receptors. J Exp Med. 2017 Jan;214(1):107-123. doi: 10.1084/jem.20160961. Epub 2016 Dec 19.
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (実際)
研究の完了 (実際)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (実際)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
本研究に関する用語
個々の参加者データ (IPD) の計画
個々の参加者データ (IPD) を共有する予定はありますか?
IPD プランの説明
IPD 共有時間枠
IPD 共有アクセス基準
IPD 共有サポート情報タイプ
- STUDY_PROTOCOL
- SAP
- ANALYTIC_CODE
医薬品およびデバイス情報、研究文書
米国FDA規制医薬品の研究
米国FDA規制機器製品の研究
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