重建人类肠道:重新引入 Limosilactobacillus Reuteri 物种
大肠是数万亿微生物的家园,这些微生物被称为肠道微生物组,它们执行基本功能,例如消化食物和抵抗疾病。 我们肠道微生物群中存在的微生物多样性受生活方式因素的影响,例如饮食模式、药物使用和卫生习惯。 研究表明,随着社会经历工业化,人类肠道微生物组的多样性会减少。 例如,巴布亚新几内亚农村居民的粪便样本中含有另外 50 种微生物,例如罗伊氏乳杆菌,这在美国人中是找不到的。
是什么原因导致工业化国家的罗伊氏乳杆菌消失,目前尚不清楚。 然而,饮食是影响肠道微生物组组成的主要因素。 微生物群可及碳水化合物 (MAC) 是难消化的碳水化合物,是肠道微生物的主要能量来源。 与巴布亚新几内亚农村地区相比,北美人消耗的这些碳水化合物(豆类、山药和洋蓟等食物中含有这些碳水化合物)要少得多。
这项受控喂养研究的总体目标是确定从巴布亚新几内亚农村分离出的罗伊氏乳杆菌菌株作为益生菌与旨在促进其生长的非工业化饮食一起服用时,是否可以在加拿大人的肠道中建立. 此外,该研究将确定:
(i) 罗伊氏乳杆菌和非工业化饮食的生理和免疫学影响,以及 (ii) 罗伊氏乳杆菌和非工业化饮食对肠道微生物生态学的影响。
研究概览
详细说明
现在有一致的证据表明,工业化大大降低了肠道微生物群的细菌多样性(Segata,2015 年),这可能是由于抗生素的使用、现代临床实践、卫生和饮食习惯的改变等因素的综合作用。 然而,唯一存在经验证据的因素是西方饮食中微生物群可及碳水化合物 (MAC) 含量低,这些碳水化合物是难以消化的膳食碳水化合物,可被肠道微生物利用(Sonnerburg 等人,2015 年)。
之前的工作通过证明巴布亚新几内亚农村部落个体的粪便微生物群具有更高的多样性,证实了“微生物组耗尽”的总体前提,其中包含另外 50 种在北美完全检测不到的物种(Martínez 等人,2015 年) . 通过 16S rRNA 测序可在每个巴布亚新几内亚个体中检测到的一种物种是 Limosilactobacillus reuteri(L. 路透社)。 有趣的是,这种也被用作益生菌的物种在 1960 年左右进行的研究中经常在人类中检测到,但在当代人类中很少发现,这表明西方人中的 L. reuteri 种群最近有所减少(Walter 等人,2017 年)。 , 2011). 最重要的是,罗伊氏乳杆菌是许多脊椎动物肠道微生物群的成员,对宿主免疫功能和发育有好处,正如许多被高度引用的出版物所证明的那样(Zelante 等人 2013 年;Buffington 等人 2016 年;Lamas等人 2016 年;He 等人 2017 年)。
目前尚不清楚是什么原因导致罗伊氏乳杆菌数量下降。 然而,这可能是由于不可消化的碳水化合物的重要性,这些碳水化合物在西方饮食中的含量非常低,而在巴布亚新几内亚农村的饮食中却很丰富,巴布亚新几内亚人的饮食主要以植物为主。
这项研究的目的是证明在喂食旨在促进肠道细菌生长的非工业化饮食的加拿大人的肠道中,可以“重新引入”在非西方化微生物组中占主导地位的细菌物种。 这项研究还将确定这种“重新引入”和非工业化饮食如何影响宿主的免疫功能和宿主-饮食-微生物组代谢相互作用,并探索它们之间的关联。 它将进一步探讨微生物处理和饮食对肠道微生物生态学的影响。 中心假设是,来自巴布亚新几内亚农村的罗伊氏乳杆菌分离株可以在加拿大人的肠道中建立,该加拿大人的饮食中含有已知可促进这种微生物生长的碳水化合物。 还假设这种“重新引入”和食用非工业化类型的饮食将与宿主的免疫学和代谢益处相关。 为实现这些目标,提出了以下目标:
- 进行人体试验以确定是否可以在健康的加拿大人的肠道中建立从巴布亚新几内亚 (PNG) 农村地区分离的罗伊氏粘液乳杆菌菌株。
- 确定是否可以通过喂食专门为罗伊氏乳杆菌提供生长基质而设计的饮食来改善定殖。
- 确定罗伊氏乳杆菌和非工业化饮食如何改变人类微生物组、代谢组、心脏代谢替代终点和炎症的免疫生物标志物。
这项研究将确定是否可以将“消失的物种”细菌重新引入人体肠道,并可能提供机制洞察力,以告知如何应用这种饮食调节来降低慢性病的风险。 由于从巴布亚新几内亚农村地区分离出的罗伊氏乳杆菌菌株在功能上不同于西方菌株,MAC 底物的不同生长速率证明了这一点,本研究将进一步确定潜在的益生菌菌株,这些菌株以前由于工业化肠道中整体缺失而未被表征微生物组。
研究类型
注册 (实际的)
阶段
- 不适用
联系人和位置
学习地点
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Alberta
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Edmonton、Alberta、加拿大、T6G 2E1
- University of Alberta
-
-
参与标准
资格标准
适合学习的年龄
接受健康志愿者
描述
纳入标准:
- 身体质量指数在 20-29.9 kg/m² 之间的健康人
- 每天至少排便一次
- 愿意在 3 周内食用准备好的研究食物(早餐、午餐、晚餐、零食)
- 男性和绝经前、未怀孕或未哺乳期的女性
- 非素食者、不吸烟者和酒精摄入量≤8 杯/周,并且愿意在研究过程中每周饮用 8 杯或更少。
如果食用含益生菌的食物,愿意停止进食,并用不含益生菌的食物代替
-≤5 小时/周的中等强度运动。
- 筛查粪便样本中的罗伊氏乳杆菌数量低于 10^4 CFU/g
排除标准:
- 糖尿病史、急性或慢性胃肠道疾病、病症或胃肠道手术干预史
- 最近 3 个月的抗生素治疗
- 使用膳食补充剂(包括益生元和益生菌、纤维补充剂/棒、消化酶/beano)——如果食用,愿意接受 4 周的干预前清除期,并且在研究期间不服用补充剂。 例外:复合维生素或维生素 D 补充剂(1 周清除期)
- 使用降压药、降脂药、抗糖尿病药、抗炎药(即皮质类固醇或长期使用非甾体抗炎药)或泻药
- 已知的食物过敏或不耐受(包括乳制品过敏或乳糖不耐受)
学习计划
研究是如何设计的?
设计细节
- 主要用途:其他
- 分配:随机化
- 介入模型:交叉作业
- 屏蔽:双倍的
武器和干预
参与者组/臂 |
干预/治疗 |
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实验性的:L. reuteri PB-W1,非工业化饮食开始
参与者将接受 3 周的非工业化饮食,然后在 3 周的清除期后过渡到 3 周的日常饮食。
在每个节食期的第 4 天,将向参与者提供一次性剂量的罗伊氏乳杆菌 PB-W1 菌株。
罗伊氏乳杆菌 PB-W1 菌株将作为可饮用溶液提供(50 毫升水中将提供约 2.25x10^10 个活细胞)。
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L. Reuteri PB-W1 菌株将按照标准化操作程序进行制备,以制备食品级条件下的 Limosilactobacillus reuteri
其他名称:
非工业化饮食将在新陈代谢的厨房中准备,并为参与者提供为期三周的所有正餐和零食。
其他名称:
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实验性的:L. reuteri DSM20016T,非工业化饮食开始
参与者将接受 3 周的非工业化饮食,然后在 3 周的清除期后过渡到 3 周的日常饮食。
在每个节食期的第 4 天,将向参与者提供一次性剂量的罗伊氏乳杆菌 DSM20016T 菌株。
罗伊氏乳杆菌 DSM20016T 菌株将作为可饮用溶液提供(50 毫升水中将提供约 2.25x10^10 个活细胞)。
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非工业化饮食将在新陈代谢的厨房中准备,并为参与者提供为期三周的所有正餐和零食。
其他名称:
L. Reuteri DSM20016T 菌株将按照标准化操作程序制备,以在食品级条件下制备 Limosilactobacillus reuteri
其他名称:
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安慰剂比较:安慰剂,非工业化饮食开始
参与者将接受 3 周的非工业化饮食,然后在 3 周的清除期后过渡到 3 周的日常饮食。
在每个节食期的第 4 天,将向参与者提供一次性剂量的安慰剂溶液。
安慰剂溶液将作为可饮用溶液提供(2 g 麦芽糖糊精在食品级条件下溶解在 50 ml 水中)。
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非工业化饮食将在新陈代谢的厨房中准备,并为参与者提供为期三周的所有正餐和零食。
其他名称:
在食品级条件下,将 2 克麦芽糖糊精溶解在 50 毫升水中
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实验性的:L. reuteri PB-W1,常规饮食开始
参与者将食用他们通常的饮食 3 周,然后在 3 周的清除期后交叉食用所提供的非工业化饮食 3 周。
在每个节食期的第 4 天,将向参与者提供一次性剂量的罗伊氏乳杆菌 PB-W1 菌株。
罗伊氏乳杆菌 PB-W1 菌株将作为可饮用溶液提供(50 毫升水中将提供约 2.25x10^10 个活细胞)。
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L. Reuteri PB-W1 菌株将按照标准化操作程序进行制备,以制备食品级条件下的 Limosilactobacillus reuteri
其他名称:
非工业化饮食将在新陈代谢的厨房中准备,并为参与者提供为期三周的所有正餐和零食。
其他名称:
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实验性的:L. reuteri DSM20016T,常规饮食开始
参与者将食用他们通常的饮食 3 周,然后在 3 周的清除期后交叉食用所提供的非工业化饮食 3 周。
在每个节食期的第 4 天,将向参与者提供一次性剂量的罗伊氏乳杆菌 DSM20016T 菌株。
罗伊氏乳杆菌 DSM20016T 菌株将作为可饮用溶液提供(50 毫升水中将提供约 2.25x10^10 个活细胞)。
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非工业化饮食将在新陈代谢的厨房中准备,并为参与者提供为期三周的所有正餐和零食。
其他名称:
L. Reuteri DSM20016T 菌株将按照标准化操作程序制备,以在食品级条件下制备 Limosilactobacillus reuteri
其他名称:
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安慰剂比较:安慰剂,常规饮食开始
参与者将食用他们通常的饮食 3 周,然后在 3 周的清除期后交叉食用所提供的非工业化饮食 3 周。
在每个节食期的第 4 天,将向参与者提供一次性剂量的安慰剂溶液。
安慰剂溶液将作为可饮用溶液提供(2 g 麦芽糖糊精在食品级条件下溶解在 50 ml 水中)。
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非工业化饮食将在新陈代谢的厨房中准备,并为参与者提供为期三周的所有正餐和零食。
其他名称:
在食品级条件下,将 2 克麦芽糖糊精溶解在 50 毫升水中
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研究衡量的是什么?
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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在加拿大个体的肠道中建立罗伊氏乳杆菌(PB-W1 和 DSM20016T 菌株)
大体时间:21天
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本研究的主要结果是测量路氏乳杆菌(PB-W1 和 DSM20016T 菌株)在加拿大人肠道中的建立情况。
这将通过粪便样本的选择性细菌培养来测量,并使用物种特异性引物通过定量 PCR 进行量化。
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21天
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食用旨在为罗伊氏乳杆菌提供生长基质的非工业化饮食后,罗伊氏乳杆菌(PB-W1 和 DSM20016T 菌株)定植的持久性增强
大体时间:21天
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我们将测量 L. reuteri 在加拿大人肠道中的持久性是否因食用专门为 L. reuteri 提供生长底物 (MAC) 而设计的非工业化饮食而增强。
这将通过粪便样本的选择性细菌培养来测量,并使用物种特异性引物通过定量 PCR 进行量化。
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21天
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次要结果测量
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
|---|---|---|
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L. reuteri 菌株和非工业化饮食对心脏代谢替代终点的影响:空腹血糖和血脂组。
大体时间:21天
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将分析血液样本中的血浆中葡萄糖、甘油三酯、低密度脂蛋白 (LDL) 胆固醇、高密度脂蛋白 (HDL) 胆固醇、非 HDL 胆固醇和总胆固醇 (mmol/L) 的变化。
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21天
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L. reuteri 菌株和非工业化饮食对心脏代谢替代终点的影响:空腹胰岛素水平。
大体时间:21天
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将分析血液样本中的血浆中胰岛素 (µIU/L) 的变化。
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21天
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L. reuteri 菌株和非工业化饮食对心脏代谢替代终点的影响:胰岛素抵抗的稳态模型评估和定量胰岛素敏感性检查指数。
大体时间:21天
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将根据空腹血糖和胰岛素水平计算胰岛素抵抗的稳态模型评估和定量胰岛素敏感性检查指数。
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21天
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L. reuteri 菌株和非工业化饮食对心脏代谢替代终点的影响:空腹 C 反应蛋白水平。
大体时间:21天
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将分析血液样本中的血浆中 C 反应蛋白 (mg/L) 的变化。
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21天
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L. reuteri 菌株和非工业化饮食对心脏代谢替代终点的影响:体重。
大体时间:21天
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体重将以千克为单位测量。
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21天
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L. reuteri 菌株和非工业化饮食对炎症性肠病替代终点的影响:粪便钙卫蛋白水平。
大体时间:21天
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将分析粪便样本中钙卫蛋白的变化 (ng/mg)。
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21天
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L. reuteri 菌株和非工业化饮食对肠道屏障功能生物标志物的影响:脂多糖结合蛋白。
大体时间:21天
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将分析血样血浆中脂多糖结合蛋白 (µg/mL) 的变化。
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21天
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L. reuteri 菌株和非工业化饮食对肠道屏障功能生物标志物的影响:粪便连蛋白水平。
大体时间:21天
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将分析粪便样本的连蛋白变化 (ng/mg)。
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21天
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路氏乳杆菌菌株和非工业化饮食对粪便微生物组组成的影响。
大体时间:4-21天
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o 将使用 16S rRNA 测序分析粪便样本,以测量粪便微生物组在门、纲、目、科、属和扩增子测序变异水平上的变化。
还将使用整个宏基因组测序来分析粪便微生物组的组成,以测量门、纲、目、科、属、种和物种水平基因组水平的变化。
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4-21天
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路氏乳杆菌菌株和非工业化饮食对粪便微生物组功能的影响:酶水平。
大体时间:8天
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粪便样本将使用全基因组测序进行分析,以测量肠道微生物群编码的酶的变化。
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8天
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路氏乳杆菌菌株和非工业化饮食对粪便微生物组功能的影响:短链脂肪酸水平。
大体时间:8 & 21 天
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短链脂肪酸(乙酸、丙酸、丁酸、戊酸)和支链脂肪酸(异戊酸、异丁酸)将使用气相色谱质谱法(µmol/g)在粪便样本中进行测量。
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8 & 21 天
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罗伊氏乳杆菌菌株和非工业化饮食对粪便微生物组功能的影响:pH。
大体时间:8 & 21 天
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将使用 pH 计测量粪便 pH。
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8 & 21 天
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L. reuteri 菌株和非工业化饮食对代谢组的影响。
大体时间:8 & 21 天
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血浆代谢组将被评估,以确定在提供干预后具有已知免疫功能的分子的变化,例如色氨酸和胆汁酸的吲哚衍生物。
这将通过高性能化学同位素标记液相色谱质谱平台进行测量。
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8 & 21 天
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L. reuteri 菌株和非工业化饮食对宿主免疫反应的影响。
大体时间:8 & 21 天
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将通过使用流式细胞术量化 IgA、选定的细胞因子和白细胞表型来测量血液样本中的宿主免疫反应。
单核细胞将在聚蔗糖梯度上从全血中分离出来,细胞对挑战(肽聚糖、植物凝集素和脂多糖)的反应能力将在体外测定。
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8 & 21 天
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L. reuteri 菌株和非工业化饮食对心理情绪状态变化的影响。
大体时间:21天
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个人情绪状态的变化将通过情绪状态调查表的概况来衡量(得分在 -32 和 200 之间;较低的分数表示更稳定的情绪概况)。
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21天
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L. reuteri 菌株和非工业化饮食对胃肠道症状变化的影响。
大体时间:21天
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个体胃肠道症状的变化将通过胃肠道症状问卷进行测量(评分范围为 0-5;分数越高表示症状越多)。
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21天
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合作者和调查者
调查人员
- 首席研究员:Jens Walter, PhD、University College Cork
- 首席研究员:Andrea Haqq, MD、University of Alberta
出版物和有用的链接
一般刊物
- Buffington SA, Di Prisco GV, Auchtung TA, Ajami NJ, Petrosino JF, Costa-Mattioli M. Microbial Reconstitution Reverses Maternal Diet-Induced Social and Synaptic Deficits in Offspring. Cell. 2016 Jun 16;165(7):1762-1775. doi: 10.1016/j.cell.2016.06.001.
- Segata N. Gut Microbiome: Westernization and the Disappearance of Intestinal Diversity. Curr Biol. 2015 Jul 20;25(14):R611-3. doi: 10.1016/j.cub.2015.05.040.
- Sonnenburg ED, Sonnenburg JL. Starving our microbial self: the deleterious consequences of a diet deficient in microbiota-accessible carbohydrates. Cell Metab. 2014 Nov 4;20(5):779-786. doi: 10.1016/j.cmet.2014.07.003. Epub 2014 Aug 21.
- Martinez I, Stegen JC, Maldonado-Gomez MX, Eren AM, Siba PM, Greenhill AR, Walter J. The gut microbiota of rural papua new guineans: composition, diversity patterns, and ecological processes. Cell Rep. 2015 Apr 28;11(4):527-38. doi: 10.1016/j.celrep.2015.03.049. Epub 2015 Apr 16.
- Walter J, Britton RA, Roos S. Host-microbial symbiosis in the vertebrate gastrointestinal tract and the Lactobacillus reuteri paradigm. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011 Mar 15;108 Suppl 1(Suppl 1):4645-52. doi: 10.1073/pnas.1000099107. Epub 2010 Jun 25.
- Zelante T, Iannitti RG, Cunha C, De Luca A, Giovannini G, Pieraccini G, Zecchi R, D'Angelo C, Massi-Benedetti C, Fallarino F, Carvalho A, Puccetti P, Romani L. Tryptophan catabolites from microbiota engage aryl hydrocarbon receptor and balance mucosal reactivity via interleukin-22. Immunity. 2013 Aug 22;39(2):372-85. doi: 10.1016/j.immuni.2013.08.003.
- Lamas B, Richard ML, Leducq V, Pham HP, Michel ML, Da Costa G, Bridonneau C, Jegou S, Hoffmann TW, Natividad JM, Brot L, Taleb S, Couturier-Maillard A, Nion-Larmurier I, Merabtene F, Seksik P, Bourrier A, Cosnes J, Ryffel B, Beaugerie L, Launay JM, Langella P, Xavier RJ, Sokol H. CARD9 impacts colitis by altering gut microbiota metabolism of tryptophan into aryl hydrocarbon receptor ligands. Nat Med. 2016 Jun;22(6):598-605. doi: 10.1038/nm.4102. Epub 2016 May 9.
- He B, Hoang TK, Wang T, Ferris M, Taylor CM, Tian X, Luo M, Tran DQ, Zhou J, Tatevian N, Luo F, Molina JG, Blackburn MR, Gomez TH, Roos S, Rhoads JM, Liu Y. Resetting microbiota by Lactobacillus reuteri inhibits T reg deficiency-induced autoimmunity via adenosine A2A receptors. J Exp Med. 2017 Jan;214(1):107-123. doi: 10.1084/jem.20160961. Epub 2016 Dec 19.
研究记录日期
研究主要日期
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研究注册日期
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最后更新发布 (实际的)
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- 树液
- 分析代码
药物和器械信息、研究文件
研究美国 FDA 监管的药品
研究美国 FDA 监管的设备产品
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