妊娠糖尿病の胎児発育に対するコリン補給

研究の目的 特定の目的 1: GDM における出生時体重に対する妊娠中の MCS の効果を決定する。

特定の目的 2: 胎盤および臍帯血における多量栄養素輸送およびエピジェネティックな修飾に対する MCS の影響を決定します。

仮説

目的 1: 研究者は、コリン グループは非コリン グループよりも出生時体重が低く、LGA 新生児が少ないという仮説を立てています。

目的 2: 研究者は、コリン グループが胎盤輸送を減少させ、代謝遺伝子の DNA メチル化を増加させるという仮説を立てています。

研究デザイン

被験者: 便利なサンプリング方法が採用されます。 治験責任医師は、妊娠第 2 期に GDM と診断された妊婦を順次募集します。 ブロックの無作為化は、治療方法に基づいて実施されます (つまり、 インスリン療法、経口血糖降下薬、または食事療法のみ) を使用して、参加者を介入群と対照群にランダムに割り当てます。 募集は次の方法で実施されます。 (ii) 治験責任医師は、医療記録を検討することにより、適格となる可能性のある妊婦を特定します。

適格基準: 包含基準には、妊娠 28 週前の GDM 妊婦が含まれます。 GDM は 2 段階のプロセスで診断されます: 50 g の非空腹時 1 時間および 100 g の 3 時間の経口ブドウ糖チャレンジ後の血糖値が 140 mg/dL カットオフ値よりも高い。 妊娠中の女性は、英語またはスペイン語を話し、18 歳以上で、単胎妊娠しており、施設で赤ちゃんを出産する予定があり、除外基準に記載されている条件のいずれにも該当しない場合に参加資格があります。 除外基準には、既存の高血糖、糖尿病、心血管疾患、妊娠前の肝疾患が含まれます。 患者は、研究に参加することを選択し、胎盤または臍帯の生検を提供しないことを選択できます。 幹細胞の提供または保存を希望する患者は、胎盤または臍帯の生検を提供することはできません。 これらの患者は、一次分析から除外されません。

設計およびデータ収集手順:

参加者とのやり取りはすべて配送先の病院で行われ、サンプル分析は共同研究者の研究室がある大学で行われます。 共同研究者 (ブルックリン カレッジ) によって雇用された研究のコーディネーターは、リモートでデータにアクセスしたりデータを保存したりすることはなく、すべてのデータの収集と分析は病院のキャンパスで行われます。

研究者は、研究に参加する前に妊娠中の女性から書面によるインフォームド コンセントを取得します。 無作為化は、患者が同意に署名した後、薬局によって行われます。 6人の患者のブロック無作為化になります。 無作為化後、研究者は介入グループの参加者に、500 mg の酒石酸水素コリン (235 mg コリン、ダグラス ラボ) を含むコリン サプリメント ピルを提供します。 参加者は、8 週間 470 mg のコリンを得るために、1 日 2 錠を消費します。 適切な摂取量 (AI) の形でのコリンの推奨摂取量は、妊娠中の女性では 450 mg/日であり、許容上限摂取量 (UL) は 3500 mg/日です。 コリン摂取量の AI に到達する妊婦は 10% 未満であるため、コリン摂取量の上位四分位数は 900 mg/d 未満です。 研究者が提供する投与量に、これらの妊婦のコリンの習慣的な摂取量を加えた量は、AI と UL の間に収まります。つまり、十分ですが制限を超えません。 対照群の参加者にはプラセボが与えられます。 両方のグループは、標準的な出生前マルチビタミンも受け取ります. 治験責任医師は、参加者に 5 週間分のサプリメントを提供し、治験責任医師は、次の訪問時にサプリメントの消費量と残りの錠剤数の毎日のチェックオフ ログを使用して、その間のコンプライアンスを確認します。

参加者は、通常の臨床ケア時に合計 3 回の訪問を受けます。 最初の訪問は、調査員が参加者を登録する妊娠24〜28週の間であり、2回目の訪問は妊娠28〜32週の間であり、3回目の訪問は32〜36週の間です。 調査員は、最初の訪問時にベースライン アンケートを収集し (約 20 分)、最初の訪問後 3 日間の食事リコールを実施し (それぞれ約 20 分)、現在の体重をチェックし、すべての訪問で 20 mL の血液サンプルを収集します。 出産時に、研究者は参加者から胎盤サンプルと臍帯血を収集します。

ベースライン質問票: 質問票には、年齢、期日、民族性、妊娠歴、婚姻状況、教育レベル、職業、世帯収入、医療保険、薬物使用、薬物使用、栄養補助食品、慢性疾患の家族歴などの人口統計学的および医学的情報が含まれます。自己申告の妊娠前の体重。

食事の評価: 3 回の 24 時間の食事リコール (平日に 2 回、週末に 1 回) は、食事中のコリン摂取量を定量化するための最初の訪問後に電話で、訓練を受けた研究助手 (RA) によって各参加者から取得されます。 Harnack らのマルチパス法が使用されます。 RA は、コリン摂取量を分析するために、食品の識別、量、成分の仕様、調理方法を記録し、研究用栄養データ システム (NDSR) ソフトウェアにデータを入力します。 RA は、PA リコール装置を使用して、過去 24 時間の身体活動 (PA) についても参加者に尋ねます。

人体計測と採血: 調査員は、訪問中に機械式身長計を備えた医療用​​体重計を使用して、参加者の体重と身長を測定します。 血漿バイオマーカーの食物関連の濃度差を最小限に抑えるために、参加者は、朝の採血の少なくとも4時間前に食物を摂取しないように指示されます. これは、出生前の訪問の標準的な推奨事項であり、安全であると考えられています。 研究者による訪問中に、各参加者から約 20 mL の空腹時静脈血が採取されます。 血液サンプルを 1 本の EDTA 採血管と 1 本の血清分離チューブに採取し、遠心分離して血漿、バフィー コート、および血清を取得します。 サンプルは、分析測定に使用されるまでラボで処理され、-80oC で保存されます。

血糖管理: 研究者は、参加者のカルテから空腹時血糖、ヘモグロビン A1C、薬物療法、およびインスリン療法に関する情報を取得します。

出生情報と分娩時のサンプル収集: 参加者は、出生センターに入院したときに調査官に電話で通知します。 捜査官はまた、期日が近づくと彼らにリマインダーを送信します。 さらに、出産センターの医療スタッフには参加者の名前のリストが渡されるため、研究スタッフが現場にいないときに参加者がチェックインした場合も、研究者に連絡します。 赤ちゃんが生まれると、研究者は臍帯血のチューブを 2 本採取し、血清、血漿、バフィー コートを採取します。 調査員は、胎盤のサイズと重量を測定し、次の方法を使用して胎盤を処理します。全層胎盤生検は、6 mm キーズ パンチを使用して取得し、RNAlater® (RNA の場合) で安定化するか、液体窒素で凍結します。 （他の目的のため）。 サンプルは共同研究者の研究室に運ばれ、使用前に-80℃で長期保存されます。

食事摂取量の評価: 前述のように、3 日間の食事リコールから収集された食事摂取量データは、NDSR ソフトウェアによって分析されます。 総コリンの 1 日摂取量は、消費頻度に、各食品の遊離コリン、ホスファチジルコリン (PC)、グリセロホスホコリン (GPC)、ホスホコリン、およびスフィンゴミエリンを含むコリン誘導体の合計を掛けることによって計算されます。 ベタイン (コリンの酸化生成物) の 1 日摂取量は、摂取頻度と各食品のベタイン含有量を掛けて計算されます。 平均 1 日摂取量は、3 日間の食事リコールにおける総コリンおよびベタインの平均 1 日消費量として計算されます。

コリン代謝物の測定: 遊離コリン、ベタイン、およびその他のコリン誘導体 [例: PC、GPC、リゾホスファチジルコリン、ジメチルグリシン、トリメチルアミンオキシド（TMAO）]は、以前の研究で実施されたように、液体クロマトグラフィー（LC）-質量分析（MS）/MSを使用して母体血漿で測定されます。 データの精度と再現性を確保するために、抽出には安定同位体標識標準が使用され、すべてのサンプルは 6 点標準曲線に基づいて定量化され、各サンプルは重複して実行されます。 変動係数 (CV) % が実行内で 5%、または実行間で 10% を超えるサンプルは、再実行されます。

特定の目的 2: 胎盤および臍帯血における多量栄養素輸送およびエピジェネティックな修飾に対する MCS の影響を決定します。 この目的を達成するために、研究者は参加者からの胎盤生検における脂肪およびグルコース輸送体の発現、ならびに上流の調節経路AKT / mTORを決定します。 調査員は、胎盤と臍帯血の重要な成長と代謝関連遺伝子の部位特異的 DNA メチル化を測定します。

胎盤生検における多量栄養素輸送マーカーの分析: コリン代謝が胎盤脂肪およびグルコース輸送にどのように関連している可能性があるかを分析するために、研究者はリアルタイム PCR を使用して、脂肪およびグルコース代謝遺伝子およびトランスポーター (グルコース輸送体 GLUT1 など) の mRNA 量を定量化します。 GLUT3、脂肪酸代謝関連遺伝子リポタンパク質リパーゼ (LPL)、脂肪酸トランスロカーゼ (CD36)、FATP、およびアミノ酸輸送体 SNAT2 および SNAT4。 それぞれのタンパク質の豊富さ、ならびに AKT のリン酸化、および mTOR ターゲット 4EBP1 および S6K (経路の活性化の指標) も、SDS-PAGE を含む共同研究者の研究室で日常的に行われているウエスタンブロッティングによって測定されます。膜転写、抗体とのインキュベーション、および化学発光イメージングシステムによる可視化。 すべてのプライマー効率と抗体の品質は、使用前にテストされます。 リアルタイム PCR とウエスタンブロットの両方が 3 回実行されます。

成長と代謝のエピジェネティックな調節: 研究者は、以前の研究で出生前曝露の影響を受けやすいと発表されている遺伝子の部位特異的 DNA メチル化を調べ、以前に実施されたようにバイサルファイト シーケンスを使用して、子孫の長期的な成長と代謝プログラミングを仲介します。 . 簡単に説明すると、ゲノム DNA をバイサルファイト試薬で処理した後、標的ゲノム領域を PCR で増幅します。 MassArray EpiTyper システムを使用して、メチル化配列を定量化します。 関心のある遺伝子には、脂肪代謝を媒介する LEP、SREBP1C、および PPARG、成長を促進する IGF2、コルチゾール分泌を促進するコルチコトロピン放出ホルモン (CRH)、およびコルチゾール シグナルを受け取るグルココルチコイド受容体 (GR) が含まれます。