임신성 당뇨병에서 태아 성장에 대한 콜린 보충

연구 목적 특정 목표 1: 임신 중 MCS가 GDM의 출생 체중에 미치는 영향을 결정합니다.

특정 목표 2: 태반 및 제대혈의 다량 영양소 수송 및 후생적 변형에 대한 MCS의 영향을 결정합니다.

가설

목표 1: 연구자들은 콜린 그룹이 비콜린 그룹보다 출생 시 체중이 더 낮고 LGA 신생아 수가 더 적다는 가설을 세웁니다.

목표 2: 연구자들은 콜린 그룹이 태반 수송을 감소시키고 대사 유전자의 DNA 메틸화를 증가시킬 것이라는 가설을 세웁니다.

연구 설계

주제: 편리한 샘플링 방법론이 채택됩니다. 조사관은 임신 2기 동안 GDM 진단을 받은 임산부를 수시로 모집할 것입니다. 블록 무작위화는 치료 방법(즉, 인슐린 요법, 경구용 저혈당제 또는 식이요법만) 참가자를 중재군과 대조군에 무작위로 할당합니다. 모집은 다음 방법을 사용하여 수행됩니다. (i) 산전 클리닉에 연구 전단지가 게시됩니다. (ii) 조사관은 의료 기록을 검토하여 잠재적으로 자격이 있는 임산부를 식별합니다.

적격성 기준: 포함 기준에는 임신 28주 이전의 GDM 임산부가 포함됩니다. GDM은 2단계 과정으로 진단됩니다: 50g 비절식 1시간 및 100g 3시간 경구 포도당 도전 후 140mg/dL 컷오프 값보다 높은 혈당. 임산부는 영어 또는 스페인어를 사용하며, 18세 이상이고, 단태 임신을 하고, 기관에서 아기를 출산할 의사가 있고, 제외 기준에 나열된 조건이 없는 경우 참여할 자격이 있습니다. 제외 기준에는 기존 고혈당증, 당뇨병, 심혈관 질환 및 임신 전 간 질환이 포함됩니다. 환자는 연구에 참여하고 태반이나 탯줄 생검을 기증하지 않기로 선택할 수 있습니다. 줄기 세포 기증 또는 보관을 원하는 환자는 태반 또는 탯줄 생검을 기증할 수 없습니다. 이러한 환자는 기본 분석에서 제외되지 않습니다.

설계 및 데이터 수집 절차:

참가자와의 모든 상호 작용은 전달 병원에서 이루어지며 샘플 분석은 공동 연구자의 연구실이 있는 대학에서 이루어집니다. 공동 조사자(Brooklyn College)가 고용한 연구 코디네이터는 원격으로 데이터에 액세스하거나 데이터를 저장하지 않으며 모든 데이터 수집 및 분석은 병원 캠퍼스에서 이루어집니다.

조사관은 연구 시작 전에 임산부로부터 서면 동의서를 얻을 것입니다. 무작위화는 환자가 동의한 후 약국에서 수행합니다. 6명의 환자를 블록 무작위화할 것입니다. 무작위 배정 후 조사관은 500mg의 콜린 중주석산염(콜린 235mg, Douglas Lab)이 포함된 콜린 보충 알약을 중재 그룹의 참가자에게 제공합니다. 참가자는 8주 동안 470mg의 콜린을 얻기 위해 하루에 2알을 섭취합니다. 적정 섭취량(AI) 형태의 콜린 권장 섭취량은 임산부의 경우 450mg/d이고 허용 가능한 상한 섭취량(UL)은 3500mg/d입니다. 10% 미만의 임산부가 콜린 섭취량의 AI에 도달하고 콜린 섭취량의 상위 4분위수가 900mg/d 미만이기 때문입니다. 조사관이 제공하는 복용량과 이러한 임산부의 습관적 콜린 섭취량은 AI와 UL 사이에 속할 것입니다. 즉, 충분하지만 한도를 초과하지 않습니다. 통제 그룹의 참가자는 위약을 받게 됩니다. 두 그룹 모두 표준 산전 종합 비타민제를 받습니다. 조사관은 참가자에게 5주간의 보충제 공급을 제공하고 조사관은 다음 방문 동안 보충제 소비 및 남은 알약 수에 대한 매일 체크오프 로그를 사용하여 시간 동안 준수 여부를 확인합니다.

참가자는 일상적인 임상 치료 시간에 총 3번 방문합니다. 조사관이 참가자를 등록할 때 첫 번째 방문은 임신 24주에서 28주 사이에 이루어지며 두 번째 방문은 임신 28주에서 32주 사이에 이루어지며 세 번째 방문은 32주에서 36주 사이에 이루어집니다. 조사관은 첫 번째 방문(약 20분) 시 기본 설문지를 수집하고, 첫 번째 방문 후 3일 식이 회수(각각 약 20분)를 수행하고, 현재 체중을 확인하고 모든 방문에서 20mL 혈액 샘플을 수집합니다. 분만 시 조사관은 참가자로부터 태반 샘플과 제대혈을 수집합니다.

기본 설문지: 설문지에는 연령, 출산 예정일, 민족, 출산, 결혼 여부, 교육 수준, 직업, 가계 소득, 의료 보험, 약물 사용, 약물 사용, 영양 보충제, 만성 질환의 가족력, 그리고 자가 보고된 임신 전 체중.

식이 평가: 식이 콜린 섭취량을 정량화하기 위해 훈련된 연구 조교(RA)가 첫 번째 방문 후 전화를 통해 각 참가자로부터 3개의 24시간 식이 리콜(주중에 2개, 주말에 1개)을 얻을 것입니다. Harnack과 동료들의 다중 패스 방법이 사용될 것입니다. RA는 식품 식별, 수량, 성분 사양, 준비 방법을 기록하고 연구용 영양 데이터 시스템(NDSR) 소프트웨어에 데이터를 입력하여 콜린 섭취량을 분석합니다. RA는 또한 참가자들에게 PA 리콜 도구를 사용하여 지난 24시간 동안의 신체 활동(PA)에 대해 질문합니다.

인체 측정 및 채혈: 조사관은 방문하는 동안 기계식 높이 막대가 있는 의료용 체중계를 사용하여 참가자의 체중과 키를 측정합니다. 혈장 바이오마커의 식품 관련 농도 차이를 최소화하기 위해 참가자는 아침에 채혈하기 전 최소 4시간 동안 음식을 섭취하지 않도록 지시받습니다. 이것은 산전 방문에 대한 표준 권장 사항이며 안전한 것으로 간주됩니다. 조사관이 방문하는 동안 각 참가자로부터 약 20mL의 공복 정맥혈을 채취합니다. 혈액 샘플은 하나의 EDTA 혈액 수집 튜브와 하나의 혈청 분리기 튜브에 수집되고 원심 분리되어 혈장, 버피 코트 및 혈청을 얻습니다. 샘플은 분석 측정에 사용될 때까지 실험실에서 처리되고 -80oC에서 보관됩니다.

혈당 관리: 조사관은 참가자의 의료 차트에서 공복 혈당, 헤모글로빈 A1C, 약물 및 인슐린 요법에 대한 정보를 얻을 것입니다.

출생 정보 및 분만 시 샘플 수집: 참가자는 전화로 출생 센터에 입원할 때 조사관에게 알립니다. 또한 조사관은 기한이 다가오면 미리 알림을 보낼 것입니다. 또한, 산부인과 의료진은 참가자 명단을 받게 되므로 현장에 스터디 스태프가 없을 때 참가자가 체크인하는 경우 조사관에게 연락할 것입니다. 아기가 분만되면 수사관은 제대혈 튜브 두 개를 수집하여 혈청, 혈장 및 버피 코트를 회수합니다. 조사관은 태반의 크기와 무게를 측정하고 다음 방법을 사용하여 태반을 처리합니다. 전층 태반 생검은 6mm Keyes 펀치를 사용하여 얻어지고 RNAlater®(RNA용)에서 안정화되거나 액체 질소에서 동결됩니다. (다른 목적을 위해). 샘플은 사용하기 전에 -80C에서 장기 보관을 위해 공동 연구자의 실험실로 운반됩니다.

식이 섭취량 평가: 위에서 언급한 바와 같이 3일 식이 리콜에서 수집된 식이 섭취 데이터는 NDSR 소프트웨어로 분석됩니다. 총 콜린의 일일 섭취량은 각 식품 품목의 유리 콜린, 포스파티딜콜린(PC), 글리세로포스포콜린(GPC), 포스포콜린 및 스핑고미엘린을 포함한 콜린 유도체의 합계에 소비 빈도를 곱하여 계산됩니다. 베타인(콜린의 산화 생성물)의 일일 섭취량은 섭취 빈도와 각 식품의 베타인 함량을 곱하여 계산됩니다. 일일 평균 섭취량은 식이 회수 3일 동안 총 콜린 및 베타인의 일일 평균 소비량으로 계산됩니다.

콜린 대사물의 측정: 유리 콜린, 베타인 및 기타 콜린 유도체[예: PC, GPC, 리소포스파티딜콜린, 디메틸글리신, 트리메틸아민 옥사이드(TMAO)]는 이전 연구에서 수행된 것처럼 액체 크로마토그래피(LC)-질량 분석법(MS)/MS를 사용하여 모체 혈장에서 측정됩니다. 데이터의 정확성과 재현성을 보장하기 위해 안정 동위 원소 표지 표준을 추출에 사용하고 모든 샘플을 6포인트 표준 곡선을 기반으로 정량화하며 각 샘플을 두 번 실행합니다. 변동 계수(CV) %가 실행 내에서 5%보다 높거나 실행 사이에서 10%인 샘플은 다시 실행됩니다.

특정 목표 2: 태반 및 제대혈의 다량 영양소 수송 및 후생적 변형에 대한 MCS의 영향을 결정합니다. 이 목표를 달성하기 위해 조사관은 참가자의 태반 생검에서 지방 및 포도당 전달체의 발현과 업스트림 조절 경로 AKT/mTOR를 결정할 것입니다. 연구자들은 태반과 제대혈에서 주요 성장 및 대사 관련 유전자의 부위별 DNA 메틸화를 측정할 것입니다.

태반 생검에서 다량 영양소 수송 마커 분석: 콜린 대사가 태반 지방 및 포도당 수송과 어떤 관련이 있는지 분석하기 위해 조사관은 실시간 PCR을 사용하여 포도당 수송체 GLUT1과 같은 지방 및 포도당 대사 유전자 및 수송체의 mRNA 양을 정량화합니다. 및 GLUT3, 지방산 대사 관련 유전자 지단백질 리파제(LPL), 지방산 트랜스로카제(CD36), FATP 및 아미노산 수송체 SNAT2 및 SNAT4. AKT, mTOR 표적 4EBP1 및 S6K(경로의 활성화를 나타냄)의 인산화 뿐만 아니라 각 단백질의 풍부함은 SDS-PAGE, 막 전달, 항체 배양 및 화학 발광 이미징 시스템을 사용한 시각화. 모든 프라이머 효율 및 항체 품질은 사용 전에 테스트됩니다. 실시간 PCR 및 웨스턴 블롯 모두 3중으로 실행됩니다.

성장 및 신진대사의 후생유전학적 조절: 조사관은 이전 연구에서 출생 전 노출에 취약하고 이전에 수행된 것과 같이 bi-sulfite 시퀀싱을 사용하여 자손의 장기 성장 및 대사 프로그래밍을 매개하는 것으로 이전 연구에서 발표한 유전자의 부위별 DNA 메틸화를 조사할 것입니다. . 간단히 말해서, 게놈 DNA는 바이설파이트 시약으로 처리된 후 표적 게놈 영역이 PCR에 의해 증폭됩니다. MassArray EpiTyper 시스템은 메틸화된 서열을 정량화하는 데 사용됩니다. 관심 유전자로는 지방 대사를 매개하는 LEP, SREBP1C, PPARG, 성장을 촉진하는 IGF2, 코르티솔 분비를 촉진하는 코르티코트로핀 방출 호르몬(CRH), 코르티솔 신호를 받아들이는 글루코코르티코이드 수용체(GR) 등이 있습니다.