COVID-19 に対する免疫反応の評価 (COVIDIMMUNE)

COVID-19 によって引き起こされる 2019-20 年のコロナウイルス病は、進行中のパンデミックです。 アウトブレイクは 2019 年 12 月に中国の湖北省武漢で始まり、世界保健機関 (WHO) は 2020 年 3 月 11 日にパンデミックとして認識しました。 2020 年 4 月 9 日までに、140 万人以上の症例が確認され、82,000 人以上が死亡しています 1。 イスラエルでは、COVID-19 が 9,000 件以上の症例で確認され、70 人の犠牲者の命が奪われました (09.04.2020) 。

COVID-19 の大流行に伴い、大規模な人口を対象とした大量の研究が報告されています。 呉ら。 COVID-19 の平均 R0 は約 2.68 (95% CI: 2.47-2.86) であることがわかりました。 COVID-19 の拡散を抑えるために、公衆衛生当局が確認された症状のある症例を隔離して隔離する措置は、ほとんどの国で使用されている一般的な方法です。 しかし、無症候性感染者に関しては、ウイルスを増殖させ、感染制御を妨げる可能性があるという重大な問題が残っています。

問題 今日まで、初期のサーベイランスは主に重篤な疾患の患者に焦点を当てており、そのため、疾患の全領域に焦点を当ててきました。 無症候性疾患の程度は明らかではありません。 水本ら。数学的モデルが示唆する 17.9-33.3% 無症候性キャリアです。 考慮すべきもう 1 つの問題は、これらの無症候性保菌者が免疫反応を起こすのか、それともウイルス排出を続けるのかということです。

COVID-19 疾患の原因となるウイルス病原体である SARS-CoV-2 は、そのクレードにウイルスに典型的な膜貫通糖タンパク質スパイク (S タンパク質) を持つコロナウイルスです。 SARS-CoV-2 のスパイクは、肺胞上皮細胞に存在するヒト受容体アンギオテンシン変換酵素 2 (ACE2) を介してウイルスが宿主細胞に侵入することを可能にします。 これらのスパイクは、ヒト免疫応答の顕著な標的であり、免疫原性が高く、抗体産生を誘導することがわかっています。 S タンパク質の受容体結合ドメイン (RBD) は、特に中和抗体の標的となります。

症状のある患者の診断テストは、サンプル中の特定の COVID-19 遺伝子の存在をテストするリアルタイム ポリメラーゼ連鎖反応 (RT-PCR) に基づいています。 しかし、不適切なサンプル収集、ウイルス負荷の低さ、または PCR の技術的不安定性による偽陰性結果の報告が増えています。

血清検査の目的は、患者の血液中の抗体 (免疫グロブリン M - IgM、免疫グロブリン G-IgG、免疫グロブリン A - IgA)、つまり患者の免疫反応を検出することです。 IgM 抗体は通常、症状から 3 ～ 7 日以内に現れますが、IgG 抗体は 10 ～ 14 日以内に現れます。 気道に関係する疾患は、通常、IgA の上昇も引き起こします。

趙ら。最近、COVID-19 患者が SARS-CoV-2 による急性ウイルス感染に反応して典型的な抗体産生時間を示すことを示すデータを発表しました。 全体として、データは、SARS-CoV-2 感染が他のウイルス感染と同様のセロコンバージョン タイムラインに従うことを示唆しています。 入院した173人の症状が確認された患者のサンプルでは、​​93.1％（161/173）が抗体を発症し、82.7％がIgM抗体を発症し、64.7％がIgG抗体を発症しました。 重要なことに、これらの患者はすべて症状に苦しんでいました。 症状のレベル、ウイルス量、免疫反応との関連性はまだ解明されていません。

家庭などの閉じた環境では、周囲のより大きなコミュニティと容易に混ざり合わない可能性のある定義済みの人口があり、分母を明確に定義できるため、このような環境は、新興の呼吸器感染症を追跡し、ウイルス感染パターンを特徴付ける戦略的な方法を提供できます。 また、暴露は環境内にあり、家庭内接触者のフォローアップは一般に、未定義の環境と比較して、この明確に定義された環境で実現可能です。 一次感染者と同様のレベルの感染への暴露との密接な接触を追跡することで、無症候性の割合を特定することもできます。

私たちのソリューション 現在の研究の目的は、免疫応答を評価することです。つまり、無症候性のケースでの抗SARS-CoV-2抗体の開発を、家庭での研究デザインで行います。

COVID-19の結果が陽性である1000人以上の患者とその家族を評価する予定です。 この計画には、症状、ウイルス量、免疫反応の評価が 12 週間にわたって 10 日ごとに含まれています。 次に、対象者の DNA と最も重要な ACE2 遺伝子 (ウイルスが攻撃する受容体) を配列決定することにより、対象者間の免疫応答の違いの原因を分析します。

これにより、症状、ウイルス量、および免疫反応の間の関係に必要な光が当てられます. ウイルス量、症状、および免疫応答の関連性により、疾患の進行を監視し、重篤な症状を発症するリスクが高い患者を予測し、ウイルスに対する免疫を決定し、最も重要なこととして、免疫を発達させていない慢性キャリアを特定できます。

プロトコル シャミール医療センターの研究室で COVID-19 RT-PCR の結果が陽性であった後、対象者に電話で連絡し、研究への参加を提案します。 同意が得られたら、医療スタッフが被験者の家に到着し、研究の詳細をさらに説明し、被験者と 18 歳以上の世帯のインフォームド コンセントを求めます。 インフォームド コンセントに署名すると、各被験者は症状レポートに記入し、口腔咽頭スワブと血液サンプル (10 ～ 20cc) を提供します。

12 週間以内に 10 日ごとに、研究者が被験者の家を訪れ、手順を繰り返します (症状アンケート、採血、口腔咽頭スワブ)。

最後の評価 (12 週目) に続いて、1 年以内に 4 ～ 8 週間ごとに、研究者が被験者の家を訪れ、症状アンケートの記入と採血を行います。

血清検査キット:

1. LIAISION SARS-CoV-2 IgM (ディアソリン、サルッジャ、イタリア)
2. LIAISION SARS-CoV-2 S1/S2 IgG (ディアソリン、サルッジャ、イタリア)
3. ARCHITECT SARS-CoV-2 N IgG Immunoassay (アボット、イリノイ州、アメリカ)

Rt-PCRキット RT-PCRは、1つのヒトRNaseプライマーとプローブに加えて、3つのプライマーと3つのプローブを使用して実行されます。

手順

1. 被験者宅到着
2. 医療スタッフは、適切な医療用保護具を使用します。
3. 採血管3本分の採血（15～20cc）
4. 口腔咽頭スワブ
5. サンプルは 2 ～ 8℃ に保たれます。
6. サンプルは 2 ～ 8 度で Shamir Medical Center の研究所に返却されます。
7. RT-PCRが行われます。
8. 血清学は、利用可能なキットを使用して実行されます。 各被験者は9回サンプリングされます（最初の接触に加えて、12週間以内に10日ごと）。 血液サンプルは、将来の研究目的のために-80°Cで保存および保存されます。

長期評価には、最終評価 (12 週目) から 1 年間、4 ～ 8 週間ごとに血液サンプルとアンケートが含まれます。

タイミング

1. RT-PCR陽性の結果を受け取ってから1〜7日以内に、患者とその家族の両方の最初の評価が完了します

2. 最初の評価に続いて、各参加者は 10 日 (±2 日) ごとに 100 日間評価されます。 合計10回の追加。

   要約すると、各参加者は 11 回評価されます (最初の評価 + 10 回の追加評価)。

3. 最後の評価に続いて、各参加者は 1 年間、4 ～ 8 週間ごとに評価されます。 合計6〜12回。