Evaluación de la respuesta inmune para COVID-19 (COVIDIMMUNE)

La enfermedad por coronavirus 2019-20, causada por COVID-19, es una pandemia en curso. El brote comenzó en Wuhan, provincia de Hubei, China, en diciembre de 2019 y la Organización Mundial de la Salud (OMS) lo reconoció como pandemia el 11 de marzo de 2020. Hasta el 9 de abril de 2020 hay más de 1,4 millones de casos confirmados y más de 82.000 muertes 1. En Israel, COVID-19 se confirmó en más de 9.000 casos y se cobró la vida de 70 víctimas (04.09.2020) .

Con el brote extenso de COVID-19, se han informado una gran cantidad de estudios con una gran población. Wu et al. encontró que el R0 medio de COVID-19 fue de aproximadamente 2,68 (IC del 95 %: 2,47-2,86). Las medidas en las que los funcionarios de salud pública ponen en cuarentena a los casos confirmados y aíslan los casos sintomáticos para reducir la propagación de COVID-19 es la práctica común utilizada en la mayoría de los países. Sin embargo, queda una pregunta importante con respecto a las personas infectadas asintomáticamente, que pueden propagar el virus e impedir el control de la infección.

El problema Hasta la fecha, la vigilancia inicial se ha centrado principalmente en pacientes con enfermedad grave y, como tal, en todo el espectro de la enfermedad. La extensión de la enfermedad asintomática no está clara. Mizumoto et al. modelo matemático sugerido 17.9-33.3% son portadores asintomáticos. La otra pregunta a considerar es si estos portadores asintomáticos desarrollan una respuesta inmune o continúan con la diseminación viral.

El SARS-CoV-2, el agente viral causante de la enfermedad COVID-19, es un coronavirus que porta los picos de glicoproteína transmembrana (proteína S) típicos de los virus en su clado. Los picos en el SARS-CoV-2 permiten que el virus ingrese a las células huésped a través de la enzima convertidora de angiotensina 2 del receptor humano (ACE2), presente en las células epiteliales alveolares. Estos picos son un objetivo destacado de las respuestas inmunitarias humanas y se ha descubierto que son altamente inmunogénicos e inducen la producción de anticuerpos. El dominio de unión al receptor (RBD) de la proteína S es el blanco particular de los anticuerpos neutralizantes.

La prueba diagnóstica en pacientes sintomáticos se basa en la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR), que prueba la existencia de genes específicos de COVID-19 en la muestra. Sin embargo, hay un número creciente de informes de resultados falsos negativos debido a la recolección incorrecta de muestras, baja carga viral o inestabilidad técnica de la PCR.

La prueba de serología tiene como objetivo detectar anticuerpos (inmunoglobulina M - IgM, inmunoglobulina G- IgG, inmunoglobulina A - IgA) en la sangre del paciente, es decir, la respuesta inmune del paciente. Los anticuerpos IgM generalmente aparecen dentro de los 3 a 7 días posteriores a los síntomas, mientras que los anticuerpos IgG aparecen dentro de los 10 a 14 días. Las enfermedades que involucran el tracto respiratorio generalmente también causan elevación de IgA.

Zhao et al. han publicado recientemente datos que indican que los pacientes con COVID-19 muestran tiempos típicos de producción de anticuerpos en respuesta a la infección viral aguda con SARS-CoV-2. En general, los datos sugieren que la infección por SARS-CoV-2 sigue una línea de tiempo de seroconversión similar a otras infecciones virales. En su muestra de 173 de pacientes hospitalizados sintomáticos confirmados, el 93,1% (161/173) desarrolló anticuerpos, donde el 82,7% desarrolló anticuerpos IgM y el 64,7% desarrolló anticuerpos IgG. Es importante destacar que todos estos pacientes padecían síntomas. La asociación entre el nivel de síntomas, la carga viral y la respuesta inmune aún no se ha determinado.

Los entornos cerrados, como los hogares, tienen una población definida que puede no mezclarse fácilmente con la comunidad circundante más grande y, por lo tanto, dichos entornos pueden proporcionar una forma estratégica de rastrear las infecciones respiratorias emergentes y caracterizar los patrones de transmisión del virus porque el denominador puede estar bien definido. Además, la exposición está dentro del entorno, y el seguimiento de los contactos del hogar es generalmente más factible en este entorno bien definido en comparación con uno indefinido. Seguir contactos cercanos con niveles similares de exposición a la infección de casos primarios también puede permitir la identificación de la fracción asintomática.

Nuestra solución El propósito del estudio actual es evaluar la respuesta inmune, es decir, desarrollar anticuerpos anti-SARS-CoV-2 en los casos asintomáticos, en un diseño de estudio doméstico.

Planeamos evaluar a más de 1000 pacientes con resultados positivos de COVID-19 y sus hogares. El plan incluye evaluación de sus síntomas, carga viral y respuesta inmunológica cada 10 días en un periodo de 12 semanas. A continuación, el análisis de la causa de las diferencias en la respuesta inmunitaria entre los sujetos mediante la secuenciación de su ADN y, lo que es más importante, del gen ACE2, el receptor al que ataca el virus.

Esto arrojará la luz necesaria sobre la conexión entre los síntomas, la carga viral y la respuesta inmunitaria. La asociación entre la carga viral, los síntomas y la respuesta inmunitaria permitirá: monitorear el progreso de la enfermedad, predecir pacientes con alto riesgo de desarrollar síntomas graves, determinar la inmunidad al virus y, lo que es más importante, localizar a los portadores crónicos que no desarrollan inmunidad.

Protocolo Después de un resultado positivo de RT-PCR de COVID-19 en el laboratorio del centro médico Shamir, se contactará al sujeto por teléfono y se le ofrecerá participar en el estudio. Con el consentimiento, el personal médico llegará a la casa del sujeto y le explicará los detalles del estudio y solicitará el consentimiento informado del sujeto y de cualquiera de los miembros del hogar mayores de 18 años. Al firmar un consentimiento informado, cada uno de los sujetos completará un informe de síntomas y proporcionará un hisopado orofaríngeo y una muestra de sangre (10-20 cc).

Cada 10 días dentro de 12 semanas, un investigador visitará la casa de los sujetos y repetirá el procedimiento (cuestionario de síntomas, extracción de sangre y frotis orofaríngeo).

Después de la última evaluación (semana 12), cada 4 a 8 semanas dentro de 1 año, un investigador visitará la casa de los sujetos y realizará el llenado del cuestionario de síntomas y la extracción de sangre.

Kits de serología:

1. LIAISION SARS-CoV-2 IgM (Diasorin, Saluggia, Italia)
2. LIAISION SARS-CoV-2 S1/S2 IgG (Diasorin, Saluggia, Italia)
3. Inmunoensayo ARCHITECT SARS-CoV-2 N IgG (Abbot, Illinois, EE. UU.)

Kit Rt-PCR La RT-PCR se realizará utilizando 3 cebadores y 3 sondas además de un cebador y una sonda de RNasa humana.

Procedimiento

1. Llegada a la casa de los sujetos.
2. El personal médico utilizará el equipo médico de protección adecuado.
3. Extracción de sangre para 3 tubos de sangre (15-20cc)
4. Hisopado orofaríngeo
5. Las muestras se mantendrán a 2-8c grados.
6. Las muestras se devolverán al laboratorio del Centro Médico Shamir en 2-8c grados.
7. Se realizará RT-PCR.
8. La serología se realizará con los kits disponibles. Cada sujeto será muestreado 9 veces (cada 10 días dentro de 12 semanas además del primer contacto). Las muestras de sangre se conservarán y almacenarán a -80 °C para futuras investigaciones.

La evaluación a largo plazo incluirá muestras de sangre y cuestionarios cada 4 a 8 semanas durante 1 año a partir de la evaluación final (semana 12).

Momento

1. La primera evaluación se completará tanto para el paciente como para sus hogares dentro de 1 a 7 días de recibir el resultado positivo de RT-PCR.

2. Después de la primera evaluación, cada participante será evaluado cada 10 días (±2 días) durante 100 días. En total 10 veces más.

   En resumen, cada participante será evaluado 11 veces (primera evaluación + 10 evaluaciones adicionales).

3. Después de la última evaluación, cada participante será evaluado cada 4-8 semanas durante 1 año. En total 6-12 veces.