Evaluatie van de immuunrespons voor COVID-19 (COVIDIMMUNE)

De ziekte van het coronavirus 2019-2020, veroorzaakt door COVID-19, is een aanhoudende pandemie. De uitbraak begon in december 2019 in Wuhan, provincie Hubei, China en de Wereldgezondheidsorganisatie (WHO) erkende het als een pandemie op 11 maart 2020. Tot 9 april 2020 zijn er meer dan 1,4 miljoen bevestigde gevallen en meer dan 82.000 doden 1. In Israël werd COVID-19 bevestigd in meer dan 9.000 gevallen en kostte het het leven aan 70 slachtoffers (04.09.2020).

Met de uitgebreide uitbraak van COVID-19 is er een massa onderzoeken met een grote populatie gerapporteerd. Wu et al. ontdekte dat de gemiddelde R0 van COVID-19 ongeveer 2,68 was (95% BI: 2,47-2,86). De maatregelen waarbij volksgezondheidsfunctionarissen symptomatische gevallen in quarantaine plaatsen en isoleren om de verspreiding van COVID-19 te verminderen, zijn in de meeste landen de gangbare praktijk. Er blijft echter een belangrijke vraag bestaan ​​met betrekking tot de asymptomatisch geïnfecteerde personen, die het virus kunnen verspreiden en de infectiecontrole kunnen belemmeren.

Het probleem Tot op heden heeft de initiële surveillance zich voornamelijk gericht op patiënten met een ernstige ziekte, en daarmee op het volledige spectrum van de ziekte. De omvang van asymptomatische ziekte is niet duidelijk. Mizumoto et al. wiskundig model voorgesteld 17,9-33,3% zijn asymptomatische dragers. De andere vraag die moet worden overwogen, is of deze asymptomatische dragers een immuunrespons ontwikkelen of doorgaan met het verspreiden van virussen.

SARS-CoV-2, de veroorzaker van de ziekte COVID-19, is een coronavirus dat de transmembraan glycoproteïne-spikes (S-eiwit) draagt ​​die kenmerkend zijn voor virussen in zijn clade. Door de pieken op SARS-CoV-2 kan het virus gastheercellen binnendringen via de menselijke receptor angiotensine-converterend enzym 2 (ACE2), aanwezig in alveolaire epitheelcellen. Deze spikes zijn een prominent doelwit van menselijke immuunresponsen en bleken zeer immunogeen te zijn en de productie van antilichamen te induceren. Het receptorbindende domein (RBD) van het S-eiwit is met name het doelwit van neutraliserende antilichamen.

De diagnostische test bij symptomatische patiënten is gebaseerd op real-time polymerasekettingreactie (RT-PCR), die het bestaan ​​van specifieke COVID-19-genen in het monster test. Er zijn echter steeds meer meldingen van fout-negatieve resultaten als gevolg van onjuiste monsterafname, lage virale belasting of technische instabiliteit van de PCR.

Serologische test heeft tot doel antilichamen (immunoglobuline M - IgM, immunoglobuline G-IgG, immunoglobuline A - IgA) in het bloed van de patiënt te detecteren, d.w.z. de immuunrespons van de patiënt. De IgM-antilichamen verschijnen meestal binnen 3-7 dagen na de symptomen, terwijl IgG-antilichamen binnen 10-14 dagen volgen. Ziekten waarbij de luchtwegen betrokken zijn, veroorzaken meestal ook een verhoging van IgA.

Zhao et al. hebben onlangs gegevens gepubliceerd waaruit blijkt dat COVID-19-patiënten typische antilichaamproductietijden vertonen als reactie op een acute virale infectie met SARS-CoV-2. Over het algemeen suggereren de gegevens dat SARS-CoV-2-infectie een seroconversietijdlijn volgt die vergelijkbaar is met andere virale infecties. In hun steekproef van 173 gehospitaliseerde symptomatisch bevestigde patiënten ontwikkelde 93,1% (161/173) antilichamen, terwijl 82,7% IgM-antilichamen ontwikkelde en 64,7% IgG-antilichamen. Belangrijk is dat al deze patiënten last hadden van symptomen. Het verband tussen het symptoomniveau, de virale belasting en de immuunrespons moet nog worden vastgesteld.

Gesloten omgevingen, zoals huishoudens, hebben een gedefinieerde populatie die zich mogelijk niet gemakkelijk vermengt met de grotere omringende gemeenschap, en daarom kunnen dergelijke instellingen een strategische manier zijn om opkomende luchtweginfecties op te sporen en overdrachtspatronen van virussen te karakteriseren, omdat de noemer goed kan worden gedefinieerd. Ook is de blootstelling binnen de setting en is follow-up van huishoudelijke contacten over het algemeen beter haalbaar in deze goed gedefinieerde setting dan in een niet-gedefinieerde setting. Het volgen van nauwe contacten met vergelijkbare niveaus van blootstelling aan infectie van primaire gevallen kan ook identificatie van de asymptomatische fractie mogelijk maken.

Onze oplossing Het doel van de huidige studie is het evalueren van de immuunrespons, d.w.z. het ontwikkelen van anti-SARS-CoV-2-antilichamen in de asymptomatische gevallen, in een onderzoeksopzet voor huishoudens.

We zijn van plan om meer dan 1000 patiënten met positieve COVID-19-resultaten en hun huishoudens te evalueren. Het plan omvat een evaluatie van hun symptomen, virale belasting en immuunrespons elke 10 dagen in een periode van 12 weken. Vervolgens analyse van de oorzaak van de verschillen in immuunrespons tussen proefpersonen door hun DNA te sequensen en vooral van het ACE2-gen - de receptor die het virus aanvalt.

Dit zal het benodigde licht werpen op het verband tussen symptomen, virale belasting en immuunrespons. De associatie tussen virale belasting, symptomen en immuunrespons maakt het volgende mogelijk: het ziekteverloop volgen, patiënten voorspellen die een hoog risico lopen om ernstige symptomen te ontwikkelen, de immuniteit tegen het virus bepalen en vooral de chronische dragers lokaliseren die geen immuniteit ontwikkelen.

Protocol Na een positief COVID-19 RT-PCR-resultaat in het laboratorium van het Shamir Medical Center, wordt de proefpersoon telefonisch gecontacteerd en aangeboden om deel te nemen aan het onderzoek. Na toestemming zal medisch personeel naar het huis van de proefpersoon komen en de details van het onderzoek verder uitleggen en om geïnformeerde toestemming vragen van de proefpersoon en alle huishoudens ouder dan 18 jaar. Na ondertekening van een geïnformeerde toestemming vult elk van de proefpersonen een symptomenrapport in en verstrekt een orofaryngeaal uitstrijkje en bloedmonster (10-20cc).

Elke 10 dagen binnen 12 weken zal een onderzoeker het huis van de proefpersoon bezoeken en de procedure herhalen (symptomenvragenlijst, bloedafname en orofaryngeaal uitstrijkje).

Na de laatste evaluatie (12e week), elke 4-8 weken binnen 1 jaar, zal een onderzoeker het huis van de proefpersoon bezoeken en een vragenlijst voor symptomen invullen en bloed afnemen.

Serologiekits:

1. LIAISION SARS-CoV-2 IgM (Diasorin, Saluggia, Italië)
2. LIAISION SARS-CoV-2 S1/S2 IgG (Diasorin, Saluggia, Italië)
3. ARCHITECT SARS-CoV-2 N IgG Immunoassay (Abbot, Illinois, VS)

Rt-PCR-kit RT-PCR wordt uitgevoerd met 3 primers en 3 probes naast één humane RNase-primer en -probe.

Procedure

1. Aankomst in het huis van de proefpersoon
2. Medisch personeel zal geschikte beschermende medische uitrusting gebruiken.
3. Bloedafname voor 3 bloedbuisjes (15-20cc)
4. Orofaryngeaal uitstrijkje
5. Monsters worden bewaard bij 2-8c graden.
6. Monsters worden teruggestuurd naar het laboratorium van het Shamir Medical Center in 2-8c graden.
7. RT-PCR zal worden uitgevoerd.
8. Serologie zal worden uitgevoerd met behulp van de beschikbare kits. Elk onderwerp wordt 9 keer bemonsterd (elke 10 dagen binnen 12 weken naast het eerste contact). Bloedmonsters zullen worden bewaard en bewaard bij -80°C voor toekomstige onderzoeksdoeleinden.

Langetermijnevaluatie omvat bloedmonsters en vragenlijsten om de 4-8 weken gedurende 1 jaar vanaf de definitieve evaluatie (12e week).

Tijdstip

1. De eerste evaluatie wordt voltooid voor zowel de patiënt als zijn/haar huishoudens binnen 1-7 dagen na ontvangst van het RT-PCR-positieve resultaat

2. Na de eerste evaluatie wordt elke deelnemer gedurende 100 dagen elke 10 dagen (±2 dagen) geëvalueerd. In totaal nog 10 keer.

   Samenvattend wordt elke deelnemer 11 keer beoordeeld (eerste beoordeling + 10 aanvullende beoordelingen).

3. Na de laatste evaluatie wordt elke deelnemer gedurende 1 jaar elke 4-8 weken geëvalueerd. In totaal 6-12 keer.