Valutazione della risposta immunitaria per COVID-19 (COVIDIMMUNE)

La malattia da coronavirus 2019-20, causata da COVID-19, è una pandemia in corso. L'epidemia è iniziata a Wuhan, nella provincia di Hubei, in Cina, nel dicembre 2019 e l'Organizzazione mondiale della sanità (OMS) l'ha riconosciuta come pandemia l'11 marzo 2020. Fino al 9 aprile 2020 ci sono più di 1,4 milioni di casi confermati e oltre 82.000 decessi 1. In Israele, il COVID-19 è stato confermato in più di 9.000 casi e ha causato la morte di 70 vittime (09.04.2020).

Con l'estesa epidemia di COVID-19, è stata segnalata una massa di studi con una vasta popolazione. Wu et al. ha rilevato che l'R0 medio di COVID-19 era di circa 2,68 (IC 95%: 2,47-2,86). Le misure in cui i funzionari della sanità pubblica mettono in quarantena confermati e isolano i casi sintomatici al fine di ridurre la diffusione di COVID-19 è la pratica comune utilizzata nella maggior parte dei paesi. Tuttavia, rimane una domanda significativa per quanto riguarda gli individui asintomaticamente infetti, che possono propagare il virus e ostacolare il controllo delle infezioni.

Il problema Ad oggi, la sorveglianza iniziale si è concentrata principalmente sui pazienti con malattia grave e, come tale, sull'intero spettro della malattia. L'estensione della malattia asintomatica non è chiara. Mizumoto et al. modello matematico suggerito 17,9-33,3% sono portatori asintomatici. L'altra domanda da considerare è se questi portatori asintomatici sviluppino una risposta immunitaria o continuino la diffusione virale.

SARS-CoV-2, l'agente virale causativo della malattia COVID-19, è un coronavirus che porta i picchi di glicoproteina transmembrana (proteina S) tipici dei virus nel suo clade. I picchi su SARS-CoV-2 consentono al virus di entrare nelle cellule ospiti attraverso l'enzima 2 di conversione dell'angiotensina del recettore umano (ACE2), presente nelle cellule epiteliali alveolari. Questi picchi sono un obiettivo importante delle risposte immunitarie umane e si sono rivelati altamente immunogenici e inducono la produzione di anticorpi. Il dominio di legame al recettore (RBD) della proteina S è particolarmente preso di mira dagli anticorpi neutralizzanti.

Il test diagnostico nei pazienti sintomatici si basa sulla reazione a catena della polimerasi in tempo reale (RT-PCR), che verifica l'esistenza di specifici geni COVID-19 nel campione. Tuttavia, vi è un numero crescente di segnalazioni di risultati falsi negativi a causa di raccolta impropria del campione, bassa carica virale o instabilità tecnica della PCR.

Il test sierologico mira a rilevare gli anticorpi (immunoglobulina M - IgM, immunoglobulina G- IgG, immunoglobulina A - IgA) nel sangue del paziente, ovvero la risposta immunitaria del paziente. Gli anticorpi IgM di solito compaiono entro 3-7 giorni dai sintomi, mentre gli anticorpi IgG seguono entro 10-14 giorni. Le malattie che coinvolgono le vie respiratorie di solito causano anche un aumento delle IgA.

Zhai et al. hanno recentemente pubblicato dati che indicano che i pazienti COVID-19 mostrano tempi tipici di produzione di anticorpi in risposta all'infezione virale acuta da SARS-CoV-2. Nel complesso, i dati suggeriscono che l'infezione da SARS-CoV-2 segue una sequenza temporale di sieroconversione simile ad altre infezioni virali. Nel loro campione di 173 pazienti confermati sintomatici ospedalizzati, il 93,1% (161/173) ha sviluppato anticorpi, dove l'82,7% ha sviluppato anticorpi IgM e il 64,7% ha sviluppato anticorpi IgG. È importante sottolineare che tutti questi pazienti soffrivano di sintomi. L'associazione tra livello dei sintomi, carica virale e risposta immunitaria deve ancora essere determinata.

Ambienti chiusi, come le famiglie, hanno una popolazione definita che potrebbe non mescolarsi facilmente con la più ampia comunità circostante, e quindi tali ambienti possono fornire un modo strategico per monitorare le infezioni respiratorie emergenti e caratterizzare i modelli di trasmissione del virus perché il denominatore può essere ben definito. Inoltre, l'esposizione rientra nel contesto e il follow-up dei contatti familiari è generalmente più fattibile in questo contesto ben definito rispetto a uno indefinito. Anche i contatti ravvicinati con livelli simili di esposizione all'infezione da casi primari possono consentire l'identificazione della frazione asintomatica.

La nostra soluzione Lo scopo del presente studio è valutare la risposta immunitaria, ovvero lo sviluppo di anticorpi anti-SARS-CoV-2 nei casi asintomatici, in un disegno di studio domestico.

Abbiamo in programma di valutare oltre 1000 pazienti con risultati positivi al COVID-19 e le loro famiglie. Il piano include la valutazione dei sintomi, della carica virale e della risposta immunitaria ogni 10 giorni in un periodo di 12 settimane. Successivamente, analisi della causa delle differenze di risposta immunitaria tra i soggetti mediante il sequenziamento del loro DNA e, soprattutto, del gene ACE2, il recettore che il virus attacca.

Questo farà luce sulla connessione tra sintomi, carica virale e risposta immunitaria. L'associazione tra carica virale, sintomi e risposta immunitaria consentirà di: monitorare il progresso della malattia, prevedere che i pazienti ad alto rischio sviluppino sintomi gravi, determinare l'immunità al virus e, soprattutto, individuare i portatori cronici che non sviluppano l'immunità.

Protocollo A seguito di un risultato RT-PCR COVID-19 positivo nel laboratorio del centro medico Shamir, il soggetto verrà contattato telefonicamente e gli verrà offerto di partecipare allo studio. Previo consenso, il personale medico arriverà a casa del soggetto e spiegherà ulteriormente i dettagli dello studio e chiederà un consenso informato del soggetto e di qualsiasi famiglia di età superiore ai 18 anni. Dopo aver firmato un consenso informato, ciascuno dei soggetti compilerà un rapporto sui sintomi e fornirà un tampone orofaringeo e un campione di sangue (10-20cc).

Ogni 10 giorni entro 12 settimane, un ricercatore visiterà la casa del soggetto e ripeterà la procedura (questionario sui sintomi, prelievo di sangue e tampone orofaringeo).

Dopo l'ultima valutazione (dodicesima settimana), ogni 4-8 settimane entro 1 anno, un ricercatore visiterà la casa del soggetto ed eseguirà la compilazione del questionario sui sintomi e il prelievo di sangue.

Kit sierologici:

1. LIAISION SARS-CoV-2 IgM (Diasorin, Saluggia, Italia)
2. LIAISION SARS-CoV-2 S1/S2 IgG (Diasorin, Saluggia, Italia)
3. ARCHITECT SARS-CoV-2 N IgG Immunoassay (Abbot, Illinois, U.S.A.)

Kit Rt-PCR La RT-PCR verrà eseguita utilizzando 3 primer e 3 sonde oltre a un primer e una sonda per RNasi umana.

Procedura

1. Arrivo alla casa dei soggetti
2. Il personale medico utilizzerà dispositivi medici di protezione adeguati.
3. Prelievo di sangue per 3 provette (15-20cc)
4. Tampone orofaringeo
5. I campioni saranno conservati a 2-8°C.
6. I campioni verranno restituiti al laboratorio dello Shamir Medical Center in gradi 2-8c.
7. Verrà eseguita la RT-PCR.
8. La sierologia verrà eseguita utilizzando i kit disponibili. Ogni soggetto verrà campionato 9 volte (ogni 10 giorni entro 12 settimane oltre al primo contatto). I campioni di sangue saranno conservati e conservati a -80°C per futuri scopi di ricerca.

La valutazione a lungo termine includerà campioni di sangue e questionari ogni 4-8 settimane per 1 anno dalla valutazione finale (dodicesima settimana).

Tempismo

1. La prima valutazione sarà completata sia per il paziente che per le sue famiglie entro 1-7 giorni dalla ricezione del risultato positivo RT-PCR

2. Dopo la prima valutazione, ogni partecipante verrà valutato ogni 10 giorni (±2 giorni) per 100 giorni. In totale 10 volte in più.

   In sintesi, ogni partecipante sarà valutato 11 volte (prima valutazione + 10 valutazioni aggiuntive).

3. Dopo l'ultima valutazione, ogni partecipante verrà valutato ogni 4-8 settimane per 1 anno. In totale 6-12 volte.