Evaluering af immunresponsen for COVID-19 (COVIDIMMUNE)

Corona-sygdommen 2019-20, forårsaget af COVID-19, er en vedvarende pandemi. Udbruddet startede i Wuhan, Hubei-provinsen, Kina, i december 2019, og Verdenssundhedsorganisationen (WHO) anerkendte det som en pandemi den 11. marts 2020. Indtil 9. april 2020 er der mere end 1,4 millioner bekræftede tilfælde og over 82.000 dødsfald 1. I Israel blev COVID-19 bekræftet i mere end 9.000 tilfælde og tog livet af 70 ofre (09.04.2020).

Med det omfattende udbrud af COVID-19 er der rapporteret om en masse undersøgelser med en stor befolkning. Wu et al. fandt, at den gennemsnitlige R0 for COVID-19 var ca. 2,68 (95 % CI: 2,47-2,86). De foranstaltninger, hvor offentlige sundhedsembedsmænd sætter bekræftede og isolerer symptomatiske tilfælde i karantæne for at reducere spredningen af ​​COVID-19, er den almindelige praksis, der anvendes i de fleste lande. Der er dog stadig et væsentligt spørgsmål med hensyn til de asymptomatisk inficerede individer, som kan udbrede virussen og hindre infektionskontrol.

Problemet Hidtil har den indledende overvågning primært fokuseret på patienter med alvorlig sygdom og som sådan hele spektret af sygdommen. Omfanget af asymptomatisk sygdom er ikke klart. Mizumoto et al. matematisk model foreslået 17,9-33,3 % er asymptomatiske bærere. Det andet spørgsmål, der skal overvejes, er, om disse asymptomatiske bærere udvikler et immunrespons eller fortsætter viral udskillelse.

SARS-CoV-2, det forårsagende virale agens til sygdommen COVID-19, er en coronavirus, som bærer de transmembrane glykoproteinspidser (S-protein), der er typiske for vira i dens kladde. Piggene på SARS-CoV-2 tillader virussen at trænge ind i værtsceller gennem den humane receptor angiotensin-konverterende enzym 2 (ACE2), der findes i alveolære epitelceller. Disse spidser er et fremtrædende mål for humane immunresponser og har vist sig at være stærkt immunogene og inducere antistofproduktion. Det receptorbindende domæne (RBD) af S-proteinet er særligt målrettet af neutraliserende antistoffer.

Den diagnostiske test i symptomatiske patienter er baseret på real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), som tester eksistensen af ​​specifikke COVID-19 gener i prøven. Der er dog et stigende antal rapporter om falsk negative resultater på grund af forkert prøveindsamling, lav viral belastning eller teknisk ustabilitet af PCR.

Serologisk test har til formål at påvise antistoffer (immunoglobulin M - IgM, immunglobulin G-IgG, immunglobulin A - IgA) i patientens blod, dvs. patientens immunrespons. IgM-antistofferne viser sig normalt inden for 3-7 dage efter symptomer, hvorimod IgG-antistoffer følger inden for 10-14 dage. Sygdomme, der involverer luftvejene, forårsager normalt også forhøjelse af IgA.

Zhao et al. har for nylig offentliggjort data, der indikerer, at COVID-19-patienter viser typiske antistofproduktionstider som reaktion på akut viral infektion med SARS-CoV-2. Samlet set tyder dataene på, at SARS-CoV-2-infektion følger en serokonversionstidslinje svarende til andre virusinfektioner. I deres stikprøve på 173 af indlagte symptomatisk bekræftede patienter udviklede 93,1 % (161/173) antistoffer, hvor 82,7 % udviklede IgM-antistoffer og 64,7 % udviklede IgG-antistoffer. Det er vigtigt, at alle disse patienter led af symptomer. Sammenhængen mellem symptomniveau, viral belastning og immunrespons er endnu ikke fastlagt.

Lukkede indstillinger, såsom husholdninger, har en defineret befolkning, der muligvis ikke let blandes med det større omgivende samfund, og derfor kan sådanne indstillinger give en strategisk måde at spore nye luftvejsinfektioner og karakterisere virusoverførselsmønstre, fordi nævneren kan være veldefineret. Eksponering er også inden for rammerne, og opfølgning af husstandskontakter er generelt mere gennemførlig i denne veldefinerede indstilling sammenlignet med en udefineret. Efter tætte kontakter med lignende niveauer af eksponering for infektion fra primære tilfælde kan det også tillade identifikation af den asymptomatiske fraktion.

Vores løsning Formålet med den aktuelle undersøgelse er at evaluere immunresponset, dvs. at udvikle anti-SARS-CoV-2 antistoffer i de asymptomatiske tilfælde, i et husstandsstudiedesign.

Vi planlægger at evaluere over 1000 patienter med positive COVID-19 resultater og deres husstande. Planen omfatter evaluering af deres symptomer, viral belastning og immunrespons hver 10. dag i en periode på 12 uger. Dernæst Analyse af årsagen til immunresponsforskellene mellem forsøgspersoner ved at sekventere deres DNA og vigtigst af alt af ACE2-genet - den receptor, som viruset angriber.

Dette vil kaste det nødvendige lys over sammenhængen mellem symptomer, viral belastning og immunrespons. Sammenhængen mellem viral belastning, symptomer og immunrespons vil gøre det muligt at: overvåge sygdomsfremskridt, forudsige patienter, der har høj risiko for at udvikle alvorlige symptomer, bestemme immunitet over for virussen og vigtigst af alt lokalisere de kroniske bærere, som ikke udvikler immunitet.

Protokol Efter et positivt COVID-19 RT-PCR-resultat i Shamir Medical Center-laboratoriet, vil forsøgspersonen blive kontaktet telefonisk og vil blive tilbudt at deltage i undersøgelsen. Efter samtykke vil lægepersonalet ankomme til forsøgspersonens hus og yderligere forklare detaljerne i undersøgelsen og bede om et informeret samtykke fra forsøgspersonen og enhver af husstandene over 18 år. Efter at have underskrevet et informeret samtykke vil hver af forsøgspersonerne udfylde en symptomrapport og give en orofaryngeal podning og blodprøve (10-20cc).

Hver 10. dag inden for 12 uger vil en forsker besøge forsøgspersonens hus og gentage proceduren (symptomspørgeskema, blodabstinenser og mundhule-podning).

Efter den sidste evaluering (12. uge), hver 4.-8. uge inden for 1 år, vil en forsker besøge forsøgspersonernes hose og udføre udfyldning af symptomspørgeskema og blodabstinenser.

Serologisæt:

1. LIAISION SARS-CoV-2 IgM (Diasorin, Saluggia, Italien)
2. LIAISION SARS-CoV-2 S1/S2 IgG (Diasorin, Saluggia, Italien)
3. ARCHITECT SARS-CoV-2 N IgG Immunoassay (Abbot, Illinois, U.S.A)

Rt-PCR kit RT-PCR vil blive udført ved hjælp af 3 primere og 3 prober ud over en human RNase primer og probe.

Procedure

1. Ankomst til faghuset
2. Medicinsk personale vil bruge passende medicinsk beskyttelsesudstyr.
3. Blodudtagning for 3 blodrør (15-20cc)
4. Orofaryngeal podning
5. Prøver vil blive opbevaret ved 2-8c grader.
6. Prøver vil blive returneret til Shamir Medical Centers laboratorium i 2-8c grader.
7. RT-PCR vil blive udført.
8. Serologi vil blive udført ved hjælp af de tilgængelige kits. Hvert forsøgsperson vil blive udtaget 9 gange (hver 10. dag inden for 12 uger ud over den første kontakt). Blodprøver vil blive opbevaret og opbevaret ved -80°C til fremtidige forskningsformål.

Langtidsevaluering vil omfatte blodprøver og spørgeskemaer hver 4.-8. uge i 1 år fra den endelige evaluering (12. uge).

Timing

1. Den første evaluering vil blive afsluttet for både patienten og hans/hendes husstande inden for 1-7 dage efter modtagelsen af ​​det positive RT-PCR-resultat

2. Efter den første evaluering vil hver deltager blive evalueret hver 10. dag (±2 dage) i 100 dage. I alt 10 ekstra gange.

   Sammenfattende vil hver deltager blive evalueret 11 gange (første evaluering + 10 yderligere evalueringer).

3. Efter den sidste evaluering vil hver deltager blive evalueret hver 4.-8. uge i 1 år. I alt 6-12 gange.