Hodnocení imunitní reakce na COVID-19 (COVIDIMMUNE)

Koronavirové onemocnění z let 2019–20, způsobené COVID-19, je pokračující pandemie. Epidemie vypukla v prosinci 2019 ve Wu-chanu v provincii Chu-pej v Číně a Světová zdravotnická organizace (WHO) ji 11. března 2020 uznala za pandemii. Do 9. dubna 2020 je více než 1,4 milionu potvrzených případů a více než 82 000 úmrtí 1. V Izraeli byl COVID-19 potvrzen u více než 9 000 případů a připravil o život 70 obětí (09.04.2020) .

S rozsáhlým propuknutím COVID-19 bylo hlášeno množství studií s velkou populací. Wu a kol. zjistili, že průměrná RO COVID-19 byla přibližně 2,68 (95% CI: 2,47-2,86). Opatření, při nichž úředníci veřejného zdraví karanténou potvrzené a izolují symptomatické případy za účelem omezení šíření COVID-19, jsou běžnou praxí používanou ve většině zemí. Významnou otázkou však zůstává u asymptomaticky infikovaných jedinců, kteří mohou virus šířit a bránit kontrole infekce.

Problém Dosud se počáteční sledování zaměřovalo především na pacienty s těžkým onemocněním, a jako takové na celé spektrum onemocnění. Rozsah asymptomatického onemocnění není jasný. Mizumoto a kol. matematický model navrhl 17,9–33,3 % jsou asymptomatičtí přenašeči. Další otázkou, kterou je třeba zvážit, je, zda tito asymptomatičtí přenašeči vyvinou imunitní odpověď nebo pokračují ve vylučování viru.

SARS-CoV-2, původce virového agens onemocnění COVID-19, je koronavirus, který ve svém kladu nese transmembránové glykoproteinové hroty (S protein) typické pro viry. Hroty na SARS-CoV-2 umožňují viru vstoupit do hostitelských buněk prostřednictvím lidského receptoru angiotenzin konvertujícího enzymu 2 (ACE2), který je přítomen v alveolárních epiteliálních buňkách. Tyto hroty jsou významným cílem lidských imunitních reakcí a bylo zjištěno, že jsou vysoce imunogenní a indukují produkci protilátek. Doména vázající receptor (RBD) proteinu S je zvláště cílena neutralizačními protilátkami.

Diagnostický test u symptomatických pacientů je založen na polymerázové řetězové reakci v reálném čase (RT-PCR), která testuje existenci specifických genů COVID-19 ve vzorku. Stále však přibývá zpráv o falešně negativních výsledcích v důsledku nesprávného odběru vzorků, nízké virové zátěže nebo technické nestability PCR.

Sérologické vyšetření má za cíl detekovat protilátky (imunoglobulin M - IgM, imunoglobulin G- IgG, imunoglobulin A - IgA) v krvi pacienta, tedy imunitní odpověď pacienta. IgM protilátky se obvykle projeví během 3-7 dnů od příznaků, zatímco IgG protilátky následují během 10-14 dnů. Nemoci, které postihují dýchací cesty, obvykle také způsobují zvýšení IgA.

Zhao a kol. nedávno publikovali údaje naznačující, že pacienti s COVID-19 vykazují typické doby produkce protilátek v reakci na akutní virovou infekci SARS-CoV-2. Celkově data naznačují, že infekce SARS-CoV-2 sleduje časovou linii sérokonverze podobně jako jiné virové infekce. V jejich vzorku 173 hospitalizovaných symptomaticky potvrzených pacientů se u 93,1 % (161/173) vytvořily protilátky, u 82,7 % se vytvořily protilátky IgM au 64,7 % se vytvořily protilátky IgG. Důležité je, že všichni tito pacienti trpěli příznaky. Souvislost mezi úrovní příznaků, virovou zátěží a imunitní odpovědí je ještě třeba určit.

Uzavřená prostředí, jako jsou domácnosti, mají definovanou populaci, která se nemusí snadno mísit s větší okolní komunitou, a proto taková nastavení mohou poskytnout strategický způsob sledování vznikajících respiračních infekcí a charakterizovat vzorce přenosu viru, protože jmenovatel lze dobře definovat. Expozice je také v rámci nastavení a sledování kontaktů v domácnosti je obecně snáze proveditelné v tomto dobře definovaném prostředí ve srovnání s nedefinovaným. Po těsných kontaktech s podobnými úrovněmi expozice infekcím z primárních případů lze také identifikovat asymptomatickou frakci.

Naše řešení Účelem této studie je vyhodnotit imunitní odpověď, tj. vývoj protilátek proti SARS-CoV-2 u asymptomatických případů, v designu domácí studie.

Plánujeme vyhodnotit více než 1000 pacientů s pozitivními výsledky COVID-19 a jejich domácnosti. Plán zahrnuje hodnocení jejich symptomů, virové zátěže a imunitní odpovědi každých 10 dní v období 12 týdnů. Dále Analýza příčin rozdílů v imunitní odpovědi mezi subjekty pomocí sekvenování jejich DNA a především genu ACE2 - receptoru, na který virus napadá.

To vrhne potřebné světlo na spojení mezi symptomy, virovou zátěží a imunitní reakcí. Souvislost mezi virovou náloží, symptomy a imunitní odpovědí umožní: monitorovat průběh onemocnění, předpovídat pacienty, u kterých je vysoké riziko rozvoje závažných symptomů, určit imunitu vůči viru a především lokalizovat chronické nosiče, u kterých se imunita nevyvine.

Protokol Po pozitivním výsledku COVID-19 RT-PCR v laboratoři lékařského centra Shamir bude subjekt kontaktován telefonicky a bude mu nabídnuta účast ve studii. Po souhlasu dorazí zdravotnický personál do domu subjektu a dále vysvětlí podrobnosti studie a požádá o informovaný souhlas subjektu a jakékoli domácnosti starší 18 let. Po podepsání informovaného souhlasu každý ze subjektů vyplní zprávu o symptomech a poskytne orofaryngeální výtěr a vzorek krve (10-20 ccm).

Každých 10 dní během 12 týdnů navštíví výzkumný pracovník dům a zopakuje proceduru (dotazník o symptomech, odběr krve a orofaryngeální výtěr).

Po posledním vyhodnocení (12. týden) každých 4-8 týdnů v průběhu 1 roku výzkumník navštíví pacienty a provede vyplnění dotazníku symptomů a odběr krve.

Sérologické sady:

1. LIAISION SARS-CoV-2 IgM (Diasorin, Saluggia, Itálie)
2. LIAISION SARS-CoV-2 S1/S2 IgG (Diasorin, Saluggia, Itálie)
3. ARCHITECT SARS-CoV-2 N IgG Immunoassay (Abbot, Illinois, U.S.A)

Souprava Rt-PCR RT-PCR bude provedena s použitím 3 primerů a 3 sond navíc k jednomu primeru a sondě lidské RNázy.

Postup

1. Příjezd do domu poddaných
2. Zdravotnický personál bude používat vhodné ochranné zdravotnické prostředky.
3. Odběr krve pro 3 krevní zkumavky (15-20cc)
4. Orofaryngeální výtěr
5. Vzorky budou uchovávány při teplotě 2-8 °C.
6. Vzorky budou vráceny do laboratoře Shamir Medical Center při teplotě 2-8 °C.
7. Bude provedena RT-PCR.
8. Sérologie bude provedena pomocí dostupných souprav. Každý subjekt bude odebrán 9krát (kromě prvního kontaktu každých 10 dní během 12 týdnů). Vzorky krve budou uchovávány a skladovány při -80 °C pro budoucí výzkumné účely.

Dlouhodobé hodnocení bude zahrnovat odběr krve a dotazníky každých 4-8 týdnů po dobu 1 roku od závěrečného hodnocení (12. týden).

Načasování

1. První hodnocení bude provedeno pro pacienta i jeho/její domácnosti během 1-7 dnů od obdržení pozitivního výsledku RT-PCR

2. Po prvním hodnocení bude každý účastník hodnocen každých 10 dní (±2 dny) po dobu 100 dní. Celkem 10x navíc.

   V souhrnu bude každý účastník hodnocen 11x (první hodnocení + 10 dodatečných hodnocení).

3. Po posledním hodnocení bude každý účastník hodnocen každých 4-8 týdnů po dobu 1 roku. Celkem 6-12x.