Utvärdering av immunsvaret för covid-19 (COVIDIMMUNE)

Coronavirussjukdomen 2019-20, orsakad av covid-19, är en pågående pandemi. Utbrottet startade i Wuhan, Hubei-provinsen, Kina, i december 2019 och Världshälsoorganisationen (WHO) erkände det som en pandemi den 11 mars 2020. Fram till den 9 april 2020 finns det mer än 1,4 miljoner bekräftade fall och över 82 000 dödsfall 1. I Israel bekräftades covid-19 i mer än 9 000 fall och tog livet av 70 offer (09.04.2020) .

Med det omfattande utbrottet av covid-19 har en mängd studier med en stor befolkning rapporterats. Wu et al. fann att medelvärdet för R0 för covid-19 var ungefär 2,68 (95 % KI: 2,47-2,86) . Åtgärderna där folkhälsotjänstemän sätter bekräftade och isolerar symtomatiska fall i karantän för att minska spridningen av covid-19 är den vanliga praxis som används i de flesta länder. En viktig fråga kvarstår dock när det gäller asymptomatiskt infekterade individer, vilket kan sprida viruset och hindra infektionskontroll.

Problemet Hittills har den initiala övervakningen i första hand fokuserat på patienter med allvarlig sjukdom, och som sådan, hela spektrumet av sjukdomen. Omfattningen av asymtomatisk sjukdom är inte klarlagd. Mizumoto et al. matematisk modell föreslås 17,9-33,3 % är asymtomatiska bärare. Den andra frågan att överväga är om dessa asymtomatiska bärare utvecklar ett immunsvar eller fortsätter virusutsöndring.

SARS-CoV-2, det orsakande virala medlet för sjukdomen COVID-19, är ett coronavirus som bär de transmembrana glykoproteinspikar (S-protein) som är typiska för virus i dess klädsel. Spikarna på SARS-CoV-2 gör att viruset kan komma in i värdceller genom den humana receptorn angiotensinomvandlande enzym 2 (ACE2), som finns i alveolära epitelceller. Dessa spikar är ett framträdande mål för mänskliga immunsvar och har visat sig vara mycket immunogena och inducera antikroppsproduktion. Den receptorbindande domänen (RBD) av S-proteinet är särskilt målinriktad av neutraliserande antikroppar.

Det diagnostiska testet hos symtomatiska patienter är baserat på realtidspolymeraskedjereaktion (RT-PCR), som testar förekomsten av specifika covid-19-gener i provet. Det finns dock ett växande antal rapporter om falskt negativa resultat på grund av felaktig provtagning, låg virusmängd eller teknisk instabilitet hos PCR.

Serologiskt test syftar till att detektera antikroppar (immunoglobulin M - IgM, immunglobulin G- IgG, immunglobulin A - IgA) i patientens blod, det vill säga patientens immunsvar. IgM-antikropparna visar sig vanligtvis inom 3-7 dagar från symtom, medan IgG-antikroppar följer inom 10-14 dagar. Sjukdomar som involverar luftvägarna orsakar vanligtvis också förhöjning av IgA.

Zhao et al. har nyligen publicerat data som indikerar att COVID-19-patienter visar typiska antikroppsproduktionstider som svar på akut virusinfektion med SARS-CoV-2. Sammantaget tyder data på att SARS-CoV-2-infektion följer en serokonversionstidslinje som liknar andra virusinfektioner. I deras urval av 173 av inlagda symtomatiska bekräftade patienter utvecklade 93,1 % (161/173) antikroppar, där 82,7 % utvecklade IgM-antikroppar och 64,7 % utvecklade IgG-antikroppar. Viktigt är att alla dessa patienter led av symtom. Sambandet mellan symtomnivå, virusmängd och immunsvar är ännu inte bestämt.

Slutna miljöer, såsom hushåll, har en definierad befolkning som kanske inte blandas lätt med det större omgivande samhället, och därför kan sådana inställningar tillhandahålla ett strategiskt sätt att spåra uppkommande luftvägsinfektioner och karakterisera virusöverföringsmönster eftersom nämnaren kan definieras väl. Exponeringen är också inom miljön, och uppföljning av hushållskontakter är i allmänhet mer genomförbart i denna väldefinierade miljö jämfört med en odefinierad. Att följa nära kontakter med liknande nivåer av exponering för infektion från primära fall kan också möjliggöra identifiering av den asymtomatiska fraktionen.

Vår lösning Syftet med den aktuella studien är att utvärdera immunsvaret, dvs att utveckla anti-SARS-CoV-2-antikroppar i de asymptomatiska fallen, i en hushållsstudiedesign.

Vi planerar att utvärdera över 1000 patienter med positiva covid-19-resultat och deras hushåll. Planen inkluderar utvärdering av deras symptom, virusmängd och immunsvar var 10:e dag under en period av 12 veckor. Därefter Analys av orsaken till immunsvarsskillnaderna mellan försökspersoner genom att sekvensera deras DNA och viktigast av allt av ACE2-genen - receptorn som viruset attackerar.

Detta kommer att belysa sambandet mellan symtom, virusmängd och immunsvar. Sambandet mellan virusmängd, symtom och immunsvar kommer att möjliggöra: övervaka sjukdomsframsteg, förutsäga patienter som löper hög risk att utveckla allvarliga symtom, fastställa immunitet mot viruset och viktigast av allt lokalisera de kroniska bärare som inte utvecklar immunitet.

Protokoll Efter ett positivt COVID-19 RT-PCR-resultat i Shamir Medical Center-labbet kommer försökspersonen att kontaktas per telefon och kommer att erbjudas att delta i studien. Efter medgivande kommer medicinsk personal att anlända till försökspersonens hus och förklara närmare detaljerna i studien och be om ett informerat samtycke från försökspersonen och något av hushållen över 18 år. Efter att ha undertecknat ett informerat samtycke kommer var och en av försökspersonerna att fylla i en symtomrapport och tillhandahålla en munsvalgspinn och ett blodprov (10-20cc).

Var 10:e dag inom 12 veckor kommer en forskare att besöka försökspersonens hus och upprepa proceduren (symtomfrågeformulär, blodborttagning och munsvalget).

Efter den sista utvärderingen (vecka 12), var 4-8 vecka inom 1 år, kommer en forskare att besöka försökspersonerna och fylla i symtomenkäten och ta blodbortfall.

Serologikit:

1. LIAISION SARS-CoV-2 IgM (Diasorin, Saluggia, Italien)
2. LIAISION SARS-CoV-2 S1/S2 IgG (Diasorin, Saluggia, Italien)
3. ARCHITECT SARS-CoV-2 N IgG Immunoassay (Abbot, Illinois, U.S.A)

Rt-PCR-kit RT-PCR kommer att utföras med 3 primrar och 3 prober förutom en human RNase-primer och prob.

Procedur

1. Ankomst till ämneshuset
2. Medicinsk personal kommer att använda lämplig medicinsk skyddsutrustning.
3. Bloduttag för 3 blodrör (15-20cc)
4. Orofaryngeal pinne
5. Proverna kommer att förvaras vid 2-8c grader.
6. Prover kommer att returneras till Shamir Medical Centers labb i 2-8c grader.
7. RT-PCR kommer att utföras.
8. Serologi kommer att utföras med hjälp av tillgängliga kit. Varje försöksperson kommer att provtas 9 gånger (var 10:e dag inom 12 veckor utöver den första kontakten). Blodprover kommer att förvaras och förvaras vid -80°C för framtida forskningsändamål.

Långtidsutvärdering kommer att omfatta blodprov och frågeformulär var 4-8 vecka i 1 år från den slutliga utvärderingen (12:e veckan).

Timing

1. Den första utvärderingen kommer att slutföras för både patienten och hans/hennes hushåll inom 1-7 dagar efter att ha mottagit det RT-PCR-positiva resultatet

2. Efter den första utvärderingen kommer varje deltagare att utvärderas var 10:e dag (±2 dagar) i 100 dagar. Totalt 10 gånger till.

   Sammanfattningsvis kommer varje deltagare att utvärderas 11 gånger (första utvärdering + 10 ytterligare utvärderingar).

3. Efter den senaste utvärderingen kommer varje deltagare att utvärderas var 4-8 vecka under 1 år. Totalt 6-12 gånger.