评估 COVID-19 的免疫反应 (COVIDIMMUNE)

由 COVID-19 引起的 2019-20 冠状病毒病是一种持续的大流行病。 疫情于 2019 年 12 月在中国湖北省武汉市爆发，世界卫生组织 (WHO) 于 2020 年 3 月 11 日将其确认为大流行病。 截至 4 月 9 日，2020 年确诊病例超过 140 万，死亡人数超过 82,000 1。 在以色列，COVID-19 在 9,000 多起案件中得到确认，并夺走了 70 名受害者的生命 (09.04.2020)。

随着 COVID-19 的大范围爆发，大量人群研究被报道。 吴等。发现 COVID-19 的平均 R0 约为 2.68（95% CI：2.47-2.86）。 公共卫生官员隔离确诊病例和隔离有症状病例以减少 COVID-19 传播的措施是大多数国家/地区常用的做法。 然而，关于无症状感染者的一个重要问题仍然存在，他们可能传播病毒并阻碍感染控制。

问题 迄今为止，初步监测主要集中在患有严重疾病的患者身上，因此，也包括疾病的全部范围。 无症状疾病的程度尚不清楚。 水本等。数学模型建议17.9-33.3% 是无症状携带者。 另一个需要考虑的问题是这些无症状携带者是否会产生免疫反应或继续排出病毒。

SARS-CoV-2 是 COVID-19 疾病的病原体，是一种冠状病毒，具有其进化枝中病毒典型的跨膜糖蛋白刺突（S 蛋白）。 SARS-CoV-2 上的尖峰允许病毒通过存在于肺泡上皮细胞中的人类受体血管紧张素转换酶 2 (ACE2) 进入宿主细胞。 这些尖峰是人类免疫反应的重要目标，已被发现具有高度免疫原性并诱导抗体产生。 S 蛋白的受体结合域 (RBD) 尤其是中和抗体的目标。

有症状患者的诊断测试基于实时聚合酶链反应 (RT-PCR)，可检测样本中是否存在特定的 COVID-19 基因。 然而，由于样本采集不当、病毒载量低或 PCR 技术不稳定，假阴性结果的报告越来越多。

血清学检测旨在检测患者血液中的抗体（免疫球蛋白M-IgM、免疫球蛋白G-IgG、免疫球蛋白A-IgA），即患者的免疫反应。 IgM 抗体通常在出现症状后 3-7 天内出现，而 IgG 抗体则在 10-14 天内出现。 涉及呼吸道的疾病通常也会导致 IgA 升高。

赵等。最近发表的数据表明，COVID-19 患者对 SARS-CoV-2 的急性病毒感染表现出典型的抗体产生时间。 总体而言，数据表明 SARS-CoV-2 感染遵循与其他病毒感染相似的血清转化时间线。 在他们的 173 名住院有症状确诊患者样本中，93.1% (161/173) 产生了抗体，其中 82.7% 产生了 IgM 抗体，64.7% 产生了 IgG 抗体。 重要的是，所有这些患者都出现了症状。 症状水平、病毒载量和免疫反应之间的关联尚未确定。

封闭环境（例如家庭）具有确定的人口，可能不容易与周围较大的社区混合，因此此类环境可以提供一种战略方法来跟踪新出现的呼吸道感染和表征病毒传播模式，因为可以很好地定义分母。 此外，暴露在环境中，与未定义的环境相比，在这种定义明确的环境中，家庭接触者的随访通常更可行。 跟踪与原发病例接触程度相似的密切接触也可以识别无症状部分。

我们的解决方案 当前研究的目的是在家庭研究设计中评估免疫反应，即在无症状病例中开发抗 SARS-CoV-2 抗体。

我们计划评估 1000 多名 COVID-19 结果呈阳性的患者及其家庭。 该计划包括在 12 周内每 10 天评估一次他们的症状、病毒载量和免疫反应。 接下来，通过对受试者的 DNA 进行测序，最重要的是对 ACE2 基因（病毒攻击的受体）进行测序，分析受试者之间免疫反应差异的原因。

这将阐明症状、病毒载量和免疫反应之间的联系。 病毒载量、症状和免疫反应之间的关联将能够：监测疾病进展，预测出现严重症状的高风险患者，确定对病毒的免疫力，最重要的是找到未产生免疫力的慢性携带者。

协议 在 Shamir 医学中心实验室获得阳性 COVID-19 RT-PCR 结果后，将通过电话联系受试者，并邀请受试者参与该研究。 征得同意后，医务人员将到达受试者家中，进一步说明研究内容，并征求受试者及任何18岁以上家庭的知情同意。 在签署知情同意书后，每位受试者将填写一份症状报告并提供口咽拭子和血液样本（10-20cc）。

在 12 周内，每隔 10 天，研究人员将访问受试者的房屋，并重复程序（症状问卷、抽血和口咽拭子）。

在最后一次评估（第 12 周）之后，在 1 年内每 4-8 周，研究人员将访问受试者住所并进行症状问卷的填写和抽血。

血清学试剂盒：

1. LIAISION SARS-CoV-2 IgM（Diasorin，Saluggia，意大利）
2. LIAISION SARS-CoV-2 S1/S2 IgG（Diasorin，Saluggia，意大利）
3. ARCHITECT SARS-CoV-2 N IgG 免疫分析（美国伊利诺伊州阿博特）

Rt-PCR 试剂盒 除了一种人 RNase 引物和探针外，还使用 ​​3 种引物和 3 种探针进行 RT-PCR。

程序

1. 到达受试者住所
2. 医务人员将使用适当的医疗防护装备。
3. 3支采血管（15-20cc）抽血
4. 口咽拭子
5. 样品将保持在 2-8c 度。
6. 样品将以 2-8c 度送回沙米尔医疗中心实验室。
7. 将进行 RT-PCR。
8. 血清学将使用可用的试剂盒进行。 每个受试者将被采样 9 次（除第一次接触外，12 周内每 10 天采样一次）。 血液样本将保存并储存在 -80°C 以供将来研究之用。

长期评估将包括从最终评估（第 12 周）开始的 1 年中每 4-8 周一次的血样和问卷调查。

定时

1. 在收到 RT-PCR 阳性结果后的 1-7 天内，将对患者及其家人完成首次评估

2. 第一次评估后，每位参与者将每 10 天（±2 天）接受一次评估，持续 100 天。 总共增加 10 次。

   总之，每个参与者将被评估 11 次（第一次评估 + 10 次附加评估）。

3. 在最后一次评估之后，每位参与者将每 4-8 周接受一次评估，持续 1 年。 总共6-12次。