Arvioimme immuunivastetta COVID-19:lle (COVIDIMMUNE)

COVID-19:n aiheuttama vuosien 2019-20 koronavirustauti on jatkuva pandemia. Epidemia alkoi Wuhanissa, Hubein maakunnassa Kiinassa joulukuussa 2019, ja Maailman terveysjärjestö (WHO) tunnusti sen pandemiaksi 11. maaliskuuta 2020. Huhtikuun 9. päivään 2020 mennessä vahvistettuja tapauksia on yli 1,4 miljoonaa ja kuolemantapauksia yli 82 000 1. Israelissa COVID-19 vahvistettiin yli 9 000 tapauksessa ja se vaati 70 uhrin hengen (09.04.2020).

Laajan COVID-19-epidemian myötä on raportoitu joukosta tutkimuksia suurella väestöllä. Wu et ai. havaitsi, että COVID-19:n keskimääräinen R0 oli noin 2,68 (95 % CI: 2,47-2,86). Toimenpiteet, joilla kansanterveysviranomaiset asettavat karanteeniin ja eristävät oireellisia tapauksia COVID-19:n leviämisen hillitsemiseksi, ovat yleinen käytäntö useimmissa maissa. Merkittävä kysymys jää kuitenkin oireettomien tartunnan saaneiden yksilöiden osalta, jotka voivat levittää virusta ja haitata infektioiden hallintaa.

Ongelma Tähän mennessä alkuseuranta on keskittynyt ensisijaisesti potilaisiin, joilla on vaikea sairaus, ja siten koko sairauden kirjo. Oireettoman taudin laajuus ei ole selvä. Mizumoto et ai. matemaattinen malli ehdotti 17,9-33,3 % ovat oireettomia kantajia. Toinen harkittava kysymys on, kehittävätkö nämä oireettomat kantajat immuunivasteen vai jatkavatko viruksen leviämistä.

SARS-CoV-2, COVID-19-taudin aiheuttaja, on koronavirus, joka kantaa kalvon läpi kulkevia glykoproteiinipiikkejä (S-proteiini), jotka ovat tyypillisiä viruksilleen. SARS-CoV-2:n piikit sallivat viruksen pääsyn isäntäsoluihin keuhkorakkuloiden epiteelisoluissa olevan ihmisen reseptorin angiotensiinikonvertoivan entsyymin 2 (ACE2) kautta. Nämä piikit ovat ihmisen immuunivasteiden näkyvä kohde, ja niiden on havaittu olevan erittäin immunogeenisiä ja indusoivat vasta-ainetuotantoa. S-proteiinin reseptoria sitova domeeni (RBD) on erityisen kohteena neutraloivilla vasta-aineilla.

Oireiden potilaiden diagnostinen testi perustuu reaaliaikaiseen polymeraasiketjureaktioon (RT-PCR), joka testaa tiettyjen COVID-19-geenien olemassaolon näytteessä. Kuitenkin yhä useammat raportit vääristä negatiivisista tuloksista johtuvat virheellisestä näytteenotosta, alhaisesta viruskuormasta tai PCR:n teknisestä epävakaudesta.

Serologisella testillä pyritään havaitsemaan potilaan verestä vasta-aineita (immunoglobuliini M - IgM, immunoglobuliini G- IgG, immunoglobuliini A - IgA) eli potilaan immuunivastetta. IgM-vasta-aineet ilmaantuvat yleensä 3-7 päivän kuluessa oireista, kun taas IgG-vasta-aineet tulevat näkyviin 10-14 päivän kuluessa. Hengitysteiden sairaudet aiheuttavat yleensä myös IgA:n nousua.

Zhao et ai. ovat äskettäin julkaisseet tietoja, jotka osoittavat, että COVID-19-potilailla on tyypillisiä vasta-aineiden tuotantoaikoja vasteena akuutille SARS-CoV-2-virusinfektiolle. Kaiken kaikkiaan tiedot viittaavat siihen, että SARS-CoV-2-infektio noudattaa serokonversion aikajanaa, joka on samanlainen kuin muut virusinfektiot. Heidän 173 sairaalassa olleesta oireellisesta vahvistetusta potilaasta koostuvasta otoksesta 93,1 %:lle (161/173) kehittyi vasta-aineita, joista 82,7 %:lle kehittyi IgM-vasta-aineita ja 64,7 %:lle IgG-vasta-aineita. Tärkeää on, että kaikki nämä potilaat kärsivät oireista. Oireiden tason, viruskuorman ja immuunivasteen välinen yhteys on vielä selvittämättä.

Suljetuilla ympäristöillä, kuten kotitalouksilla, on määritelty väestö, joka ei välttämättä sekoitu helposti ympäröivään suurempaan yhteisöön, ja siksi tällaiset asetukset voivat tarjota strategisen tavan seurata uusia hengitystieinfektioita ja karakterisoida virusten leviämismalleja, koska nimittäjä voidaan määrittää hyvin. Myös altistuminen on ympäristön sisällä, ja kotitalouksien kontaktien seuranta on yleensä helpompaa tässä hyvin määritellyssä ympäristössä kuin määrittelemättömässä. Myös oireettoman osan tunnistaminen voi olla mahdollista läheisessä kontaktissa, jossa on samantasoinen altistuminen infektiolle primaaritapauksista.

Ratkaisumme Tämän tutkimuksen tarkoituksena on arvioida immuunivastetta eli SARS-CoV-2-vasta-aineiden kehittämistä oireettomissa tapauksissa kotitaloustutkimussuunnitelmassa.

Aiomme arvioida yli 1000 potilasta, joilla on positiivinen COVID-19-tulos, ja heidän kotitalouksiaan. Suunnitelmaan sisältyy oireiden, viruskuorman ja immuunivasteen arviointi 10 päivän välein 12 viikon aikana. Seuraavaksi analysoidaan koehenkilöiden välisten immuunivasteiden erojen syyt sekvensoimalla heidän DNA:nsa ja mikä tärkeintä ACE2-geenistä - reseptorista, jota virus hyökkää.

Tämä valaisee tarvittavaa valoa oireiden, viruskuorman ja immuunivasteen välisestä yhteydestä. Viruskuorman, oireiden ja immuunivasteen välinen yhteys mahdollistaa: seurata sairauden etenemistä, ennustaa potilaita, joilla on suuri riski saada vakavia oireita, määrittää immuniteetin virukselle ja ennen kaikkea paikantaa krooniset kantajat, jotka eivät kehitä immuniteettia.

Protokolla Positiivisen COVID-19 RT-PCR -tuloksen jälkeen Shamir-lääkärikeskuksen laboratoriossa tutkittavaan otetaan yhteyttä puhelimitse ja hänelle tarjotaan osallistumista tutkimukseen. Suostumuksen saatuaan lääkintähenkilöstö saapuu tutkittavan taloon ja selittää tarkemmin tutkimuksen yksityiskohdat ja pyytää tietoon perustuvaa suostumusta tutkittavalta ja kaikilta yli 18-vuotiailta kotitalouksilta. Allekirjoitettuaan tietoon perustuvan suostumuksen jokainen tutkittava täyttää oireraportin ja antaa suunielun vanupuikko- ja verinäytteen (10-20cc).

Joka 10. päivä 12 viikon sisällä tutkija vierailee koehenkilöiden talossa ja toistaa toimenpiteen (oirekysely, verenotto ja vanupuikko nielusta).

Viimeisen arvioinnin (12. viikko) jälkeen, 4-8 viikon välein 1 vuoden sisällä, tutkija vierailee koehenkilöiden luona ja suorittaa oirekyselylomakkeen täyttöä ja verenottoa.

Serologiasarjat:

1. LIAISION SARS-CoV-2 IgM (Diasorin, Saluggia, Italia)
2. LIAISION SARS-CoV-2 S1/S2 IgG (Diasorin, Saluggia, Italia)
3. ARCHITECT SARS-CoV-2 N IgG Immunoassay (Abbot, Illinois, U.S.A)

Rt-PCR-pakkaus RT-PCR suoritetaan käyttämällä 3 aluketta ja 3 koetinta yhden ihmisen RNaasi-alukkeen ja -koettimen lisäksi.

Menettely

1. Saapuminen oppiainetalolle
2. Hoitohenkilökunta käyttää asianmukaisia ​​lääketieteellisiä suojavarusteita.
3. Verenotto 3 veriletkulle (15-20cc)
4. Suunielun vanupuikko
5. Näytteet säilytetään 2-8 asteessa.
6. Näytteet palautetaan Shamir Medical Centerin laboratorioon 2-8c asteessa.
7. RT-PCR suoritetaan.
8. Serologia suoritetaan käyttämällä saatavilla olevia sarjoja. Jokaisesta koehenkilöstä otetaan näyte 9 kertaa (10 päivän välein 12 viikon sisällä ensimmäisen kontaktin lisäksi). Verinäytteet säilytetään ja säilytetään -80°C:ssa tulevaa tutkimusta varten.

Pitkäaikainen arviointi sisältää verinäytteitä ja kyselyitä 4-8 viikon välein 1 vuoden ajan lopullisesta arvioinnista (12. viikko).

Ajoitus

1. Ensimmäinen arviointi suoritetaan sekä potilaan että hänen kotitalouksiensa osalta 1-7 päivän kuluessa RT-PCR-positiivisen tuloksen saamisesta

2. Ensimmäisen arvioinnin jälkeen jokainen osallistuja arvioidaan 10 päivän (± 2 päivän) välein 100 päivän ajan. Yhteensä 10 lisäkertaa.

   Yhteenvetona jokainen osallistuja arvioidaan 11 kertaa (ensimmäinen arviointi + 10 lisäarviointia).

3. Viimeisen arvioinnin jälkeen jokainen osallistuja arvioidaan 4-8 viikon välein 1 vuoden ajan. Yhteensä 6-12 kertaa.