Évaluation de la réponse immunitaire pour COVID-19 (COVIDIMMUNE)

La maladie à coronavirus 2019-2020, causée par le COVID-19, est une pandémie en cours. L'épidémie a commencé à Wuhan, dans la province du Hubei, en Chine, en décembre 2019 et l'Organisation mondiale de la santé (OMS) l'a reconnue comme une pandémie le 11 mars 2020. Jusqu'au 9 avril 2020, il y a plus de 1,4 million de cas confirmés et plus de 82 000 décès 1. En Israël, le COVID-19 a été confirmé dans plus de 9 000 cas et a coûté la vie à 70 victimes (09.04.2020) .

Avec la vaste épidémie de COVID-19, une masse d'études avec une grande population a été rapportée. Wu et al. ont constaté que le R0 moyen de COVID-19 était d'environ 2,68 (IC à 95 % : 2,47-2,86) . Les mesures dans lesquelles les responsables de la santé publique mettent en quarantaine les cas confirmés et isolés afin de réduire la propagation du COVID-19 sont la pratique courante utilisée dans la plupart des pays. Cependant, une question importante demeure en ce qui concerne les personnes infectées asymptomatiquement, qui peuvent propager le virus et entraver le contrôle de l'infection.

Le problème À ce jour, la surveillance initiale s'est concentrée principalement sur les patients atteints d'une maladie grave et, à ce titre, sur l'ensemble du spectre de la maladie. L'étendue de la maladie asymptomatique n'est pas claire. Mizumoto et al. modèle mathématique suggéré 17,9-33,3 % sont des porteurs asymptomatiques. L'autre question à considérer est de savoir si ces porteurs asymptomatiques développent une réponse immunitaire ou continuent l'excrétion virale.

Le SRAS-CoV-2, l'agent viral responsable de la maladie COVID-19, est un coronavirus qui porte les pics de glycoprotéine transmembranaire (protéine S) typiques des virus de son clade. Les pointes sur le SRAS-CoV-2 permettent au virus de pénétrer dans les cellules hôtes via le récepteur humain de l'enzyme de conversion de l'angiotensine 2 (ACE2), présent dans les cellules épithéliales alvéolaires. Ces pointes sont une cible importante des réponses immunitaires humaines et se sont avérées hautement immunogènes et induisent la production d'anticorps. Le domaine de liaison au récepteur (RBD) de la protéine S est particulièrement ciblé par les anticorps neutralisants.

Le test de diagnostic chez les patients symptomatiques est basé sur la réaction en chaîne par polymérase en temps réel (RT-PCR), qui teste l'existence de gènes COVID-19 spécifiques dans l'échantillon. Cependant, il y a un nombre croissant de rapports de résultats faussement négatifs dus à une mauvaise collecte d'échantillons, à une faible charge virale ou à une instabilité technique de la PCR.

Le test sérologique vise à détecter les anticorps (immunoglobuline M - IgM, immunoglobuline G - IgG, immunoglobuline A - IgA) dans le sang du patient, c'est-à-dire la réponse immunitaire du patient. Les anticorps IgM apparaissent généralement dans les 3 à 7 jours suivant les symptômes, tandis que les anticorps IgG suivent dans les 10 à 14 jours. Les maladies qui impliquent les voies respiratoires provoquent généralement également une élévation des IgA.

Zhao et al. ont récemment publié des données indiquant que les patients atteints de COVID-19 présentent des temps de production d'anticorps typiques en réponse à une infection virale aiguë par le SRAS-CoV-2. Dans l'ensemble, les données suggèrent que l'infection par le SRAS-CoV-2 suit une chronologie de séroconversion similaire à d'autres infections virales. Dans leur échantillon de 173 patients confirmés symptomatiques hospitalisés, 93,1 % (161/173) ont développé des anticorps, dont 82,7 % ont développé des anticorps IgM et 64,7 % ont développé des anticorps IgG. Fait important, tous ces patients souffraient de symptômes. L'association entre le niveau des symptômes, la charge virale et la réponse immunitaire reste à déterminer.

Les environnements fermés, tels que les ménages, ont une population définie qui peut ne pas se mélanger facilement avec la communauté environnante plus large, et par conséquent, ces environnements peuvent fournir un moyen stratégique de suivre les infections respiratoires émergentes et de caractériser les schémas de transmission du virus car le dénominateur peut être bien défini. De plus, l'exposition se situe dans le cadre et le suivi des contacts familiaux est généralement plus faisable dans ce cadre bien défini par rapport à un cadre indéfini. Le fait de suivre des contacts étroits avec des niveaux similaires d'exposition à l'infection à partir de cas primaires peut également permettre l'identification de la fraction asymptomatique.

Notre solution Le but de l'étude actuelle est d'évaluer la réponse immunitaire, c'est-à-dire le développement d'anticorps anti-SARS-CoV-2 dans les cas asymptomatiques, dans le cadre d'une étude à domicile.

Nous prévoyons d'évaluer plus de 1000 patients avec des résultats positifs au COVID-19 et leurs familles. Le plan comprend une évaluation de leurs symptômes, de leur charge virale et de leur réponse immunitaire tous les 10 jours sur une période de 12 semaines. Ensuite, analyse de la cause des différences de réponse immunitaire entre les sujets en séquençant leur ADN et surtout du gène ACE2 - le récepteur attaqué par le virus.

Cela apportera la lumière nécessaire sur le lien entre les symptômes, la charge virale et la réponse immunitaire. L'association entre la charge virale, les symptômes et la réponse immunitaire permettra : de suivre l'évolution de la maladie, de prévoir les patients à haut risque de développer des symptômes sévères, de déterminer l'immunité au virus et surtout de localiser les porteurs chroniques qui ne développent pas d'immunité.

Suite à un résultat positif à la RT-PCR COVID-19 dans le laboratoire du centre médical de Shamir, le sujet sera contacté par téléphone et se verra proposer de participer à l'étude. Après consentement, le personnel médical arrivera au domicile du sujet et expliquera plus en détail les détails de l'étude et demandera un consentement éclairé du sujet et de tous les ménages de plus de 18 ans. Après avoir signé un consentement éclairé, chacun des sujets remplira un rapport de symptômes et fournira un écouvillon oropharyngé et un échantillon de sang (10-20cc).

Tous les 10 jours pendant 12 semaines, un chercheur visitera la maison des sujets et répétera la procédure (questionnaire sur les symptômes, prélèvement sanguin et prélèvement oropharyngé).

Suite à la dernière évaluation (12e semaine), toutes les 4 à 8 semaines pendant 1 an, un chercheur visitera les sujets hospitalisés et effectuera le remplissage du questionnaire sur les symptômes et le prélèvement sanguin.

Kits de sérologie :

1. LIAISION SARS-CoV-2 IgM (Diasorin, Saluggia, Italie)
2. LIAISION SARS-CoV-2 S1/S2 IgG (Diasorin, Saluggia, Italie)
3. ARCHITECT SARS-CoV-2 N IgG Immunoassay (Abbot, Illinois, États-Unis)

Kit Rt-PCR La RT-PCR sera réalisée en utilisant 3 amorces et 3 sondes en plus d'une amorce et d'une sonde RNase humaine.

Procédure

1. Arrivée à la maison des sujets
2. Le personnel médical utilisera un équipement médical de protection approprié.
3. Prélèvement sanguin pour 3 tubes de sang (15-20cc)
4. Écouvillon oropharyngé
5. Les échantillons seront conservés à 2-8c degrés.
6. Les échantillons seront retournés au laboratoire du Shamir Medical Center dans 2-8c degrés.
7. Une RT-PCR sera effectuée.
8. La sérologie sera réalisée à l'aide des kits disponibles. Chaque sujet sera échantillonné 9 fois (tous les 10 jours pendant 12 semaines en plus du premier contact). Les échantillons de sang seront conservés et conservés à -80 °C à des fins de recherche future.

L'évaluation à long terme comprendra un échantillon de sang et des questionnaires toutes les 4 à 8 semaines pendant 1 an à compter de l'évaluation finale (12e semaine).

Horaire

1. La première évaluation sera effectuée pour le patient et ses ménages dans les 1 à 7 jours suivant la réception du résultat positif de la RT-PCR

2. Suite à la première évaluation, chaque participant sera évalué tous les 10 jours (±2 jours) pendant 100 jours. Au total 10 fois supplémentaires.

   En résumé, chaque participant sera évalué 11 fois (première évaluation + 10 évaluations supplémentaires).

3. Suite à la dernière évaluation, chaque participant sera évalué toutes les 4 à 8 semaines pendant 1 an. Au total 6 à 12 fois.